oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物通過(guò)TLR4/MyD88/NF-κB途徑促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞血管生成

摘要：目的 探討氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）/β2糖蛋白Ⅰ（β2GPⅠ）/抗β2糖蛋白Ⅰ抗體（aβ2GPⅠ）復(fù)合物對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移及血管生成的影響及其機(jī)制。方法 將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，分為對(duì)照組（正常培養(yǎng)）、oxLDL組（50 mg/L oxLDL）、oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組（50 mg/L oxLDL/100 mg/L β2GPⅠ/100 mg/L aβ2GPⅠ）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）組（100 μg/L VEGF）。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）法檢測(cè)血管生成相關(guān)因子VEGF、血管內(nèi)皮鈣黏蛋白（VE-cadherin）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2及MMP-9的基因表達(dá)；CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖；劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力；基質(zhì)膠管腔形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HUVEC的血管生成能力；Western blot法檢測(cè)Toll樣受體4（TLR4）、髓樣分化因子88（MyD88）和核因子κB（NF-κB）的蛋白表達(dá)。結(jié)果 與對(duì)照組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組細(xì)胞增殖活力在處理48 h時(shí)增加；此外，與對(duì)照組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組細(xì)胞遷移及血管生成能力增強(qiáng)，VEGF、VE-cadherin、MMP-2及MMP-9的mRNA水平升高（P＜0.05），TLR4和MyD88蛋白水平及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高（P＜0.05）。結(jié)論 oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物可能通過(guò)TLR4/MyD88/NF-κB通路誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移及血管生成。

關(guān)鍵詞：動(dòng)脈粥樣硬化；β2糖蛋白Ⅰ；新生血管化，病理性；細(xì)胞增殖；細(xì)胞運(yùn)動(dòng)；NF-κB；內(nèi)皮細(xì)胞；氧化型低密度脂蛋白

中圖分類號(hào)：R392.9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.11958/20240680

Mechanism of oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ complex promoting the angiogenesis in vascular endothelial cells through TLR4//MyD88/NF-κB signaling pathway

ZHANG Guiting1， HE Chao2△

1 Department of Laboratory Medicine， Nanjing Drum Tower Hospital Clinical College of Nanjing University， Nanjing 210008， China; 2 Center Laboratory， the Fourth Affiliated Hospital of Jiangsu University

△Corresponding Author E-mail： 15952853808@163.com

Abstract： Objective To investigate effects of oxidized low density lipoprotein/β2 glycoprotein-Ⅰ/anti-β2 glycoprotein-Ⅰ antibody （oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ） complex on the proliferation， migration and angiogenesis of vascular endothelial cells and its mechanism. Methods Human umbilical vein endothelial cells （HUVEC） were cultured to logarithmic growth phase and grouped into the control group （normal culture）， the oxLDL group （50 mg/L oxLDL）， the oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ group （50 mg/L oxLDL/100 mg/L β2GPⅠ/100 mg/L aβ2GPⅠ） and the VEGF group （100 μg/L VEGF）. The gene expressions of VEGF， vascular endothelial cadherin （VE-cadherin）， matrix metalloproteinase （MMP）-2 and MMP-9 were detected by real-time quantitative fluorescent PCR （qPCR）. Cell counting kit-8 （CCK-8） method was employed to detect cell proliferation. Cell migration and invasion were determined by scratch healing test and Transwell assay. Matrigel tube formation assay was used to observe the angiogenesis of HUVEC. The relative protein expression of TLR4， MyD88 and NF-κB were examined by Western blot assay. Results Compared with the control group， the proliferation activity of cells at 48 h of treatment was increased in the oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ group （P＜0.05）. Moreover， compared with the control group， cell migration and angiogenesis were increased in the oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ group， and the mRNA levels of VEGF， VE-cadherin， MMP-2 and MMP-9 were elevated （P＜0.05）. Compared with the control group， levels of TLR4 and MyD88 were elevated in the oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ complex group （P＜0.05）， as well as levels of p-NF-κB p65/NF-κB p65 （P＜0.05）. Conclusion oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ complex may promote the proliferation， migration and tube formation of vascular endothelial cells by regulating TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway.

Key words： atherosclerosis; beta 2-glycoproteinⅠ; neovascularization， pathologic; cell proliferation; cell movement;NF-kappa B; endothelial cells; oxidized low density lipoprotein

動(dòng)脈粥樣硬化（arteriosclerosis，AS）是心腦血管疾病的常見病因，以血管內(nèi)膜損傷及內(nèi)膜下粥樣斑塊形成為主要特征，可伴發(fā)于抗磷脂綜合征（antiphospholipid syndrome，APS）等自身免疫性疾病［1］。研究表明，血管內(nèi)皮細(xì)胞異常增殖、遷移及新生血管生成是AS相關(guān)血管粥樣斑塊形成過(guò)程中的重要病理變化［2-3］。作為AS的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，oxLDL）能夠識(shí)別并結(jié)合β2糖蛋白Ⅰ（β2 glycoprotein-Ⅰ，β2GPⅠ）的第Ⅴ結(jié)構(gòu)域，進(jìn)而形成oxLDL/β2GPⅠ復(fù)合物，參與AS病程中的巨噬細(xì)胞泡沫化［4］。臨床研究顯示，APS患者易并發(fā)AS、心肌梗死等心血管疾病，這可能與APS患者體內(nèi)高水平的抗β2糖蛋白Ⅰ抗體（anti-β2 glycoprotein Ⅰ antibody， aβ2GPⅠ）及其與oxLDL/β2GPⅠ復(fù)合物特異性結(jié)合形成oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物有關(guān)［5］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物能夠通過(guò)Toll樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）/p38分裂原激活的蛋白激酶（mitogen activated protein kinases，MAPK）途徑誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥［6］。鑒于血管內(nèi)皮細(xì)胞異常增殖、遷移及血管生成在AS血管病變中的作用，本研究擬探討oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）增殖、遷移和血管生成的影響及相關(guān)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 HUVEC購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞研究所；DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清（fetal-bovine serum，F(xiàn)BS）購(gòu)自以色列BI公司；胰蛋白酶購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）重組蛋白購(gòu)自Protein Tech公司；TRIzol、聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher公司；熒光定量PCR（qPCR）試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自南京Vazyme公司；VEGF、血管內(nèi)皮鈣黏蛋白（vascular endothelial cadherin，VE-cadherin）、基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloprotein，MMP）-2、MMP-9及β-actin引物購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司；CCK-8試劑盒購(gòu)自日本同仁公司；Transwell小室、Matrigel基質(zhì)膠、Calcein AM熒光探針購(gòu)自美國(guó)Corning公司；oxLDL購(gòu)自廣州奕元公司；TLR4、MyD88、核因子（NF）-κB p65、p-NF-κB p65兔抗人單克隆抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；兔抗人β-actin多克隆抗體、RIPA蛋白裂解液及辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG購(gòu)自杭州碧云天公司；人β2GPⅠ和aβ2GPⅠ由本實(shí)驗(yàn)室制備；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組 將HUVEC培養(yǎng)于DMEM完全培養(yǎng)基（含10% FBS、100 U/mL青霉素和0.1 g/L鏈霉素），在37 ℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HUVEC進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)到80%時(shí)，用2.5 g/L胰蛋白酶消化細(xì)胞，終止消化后收集細(xì)胞。在細(xì)胞遷移、侵襲及血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)中，將HUVEC分為4組：對(duì)照組（正常培養(yǎng)）、oxLDL組（50 mg/L oxLDL處理）、oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組（50 mg/L oxLDL與100 mg/L β2GPⅠ在37 ℃培養(yǎng)箱孵育30 min后加100 mg/L aβ2GPⅠ，混勻后處理）、VEGF組（100 μg/L VEGF處理），其中oxLDL組為AS體外研究常用的細(xì)胞處理模型［7］，VEGF組為血管內(nèi)皮細(xì)胞血管生成效應(yīng)的陽(yáng)性對(duì)照［8］，細(xì)胞處理時(shí)間根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定。在探究oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物誘導(dǎo)HUVEC增殖和血管生成相關(guān)因子表達(dá)的實(shí)驗(yàn)中，將HUVEC分為3組：對(duì)照組、oxLDL組、oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組，細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)按照處理0、24、48、72、96 h設(shè)置時(shí)間梯度，血管生成相關(guān)因子表達(dá)實(shí)驗(yàn)處理時(shí)間參照血管生成實(shí)驗(yàn)。在探究oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ對(duì)TLR4相關(guān)信號(hào)通路的激活實(shí)驗(yàn)中，將HUVEC分為2組：對(duì)照組和oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組，處理時(shí)間參照血管生成實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 qPCR法檢測(cè)VEGF、VE-cadherin、MMP-2及MMP-9 mRNA表達(dá)水平 HUVEC以3×105/mL、1.5 mL/孔的密度接種在6孔板中并按照1.2.1進(jìn)行分組處理。培養(yǎng)箱中孵育6 h后，TRIzol法提取細(xì)胞總RNA并用20 μL DEPC水溶解，分光光度計(jì)檢測(cè)濃度及純度。根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書配制20 μL逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系，制備cDNA。按照PCR試劑盒說(shuō)明書配制20 μL反應(yīng)體系，進(jìn)行qPCR反應(yīng)。qPCR引物序列見表1，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性10 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸10 s，40個(gè)循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCt法計(jì)算血管生成相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力 HUVEC以3×105/mL、100 μL/孔的密度接種到96孔板中并進(jìn)行分組處理。培養(yǎng)箱中孵育24 h后，每孔加入10 μL CCK-8試劑，并與培養(yǎng)液充分混勻后在37 ℃培養(yǎng)箱中孵育1～4 h。使用酶標(biāo)儀測(cè)量細(xì)胞在450 nm波長(zhǎng)處的光密度（OD）值，設(shè)置空白調(diào)零孔（只加DMEM培養(yǎng)基和CCK-8溶液），檢測(cè)細(xì)胞增殖活力。

1.2.4 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞遷移率 HUVEC以3×105/mL、1.5 mL/孔的密度接種在6孔板中。培養(yǎng)箱中孵育24 h使孔中細(xì)胞長(zhǎng)至完全融合，選取200 μL無(wú)菌槍頭垂直于6孔板迅速劃線，用PBS沖洗脫落細(xì)胞，并按照1.2.1進(jìn)行分組處理。在37 ℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)3、6、12、24 h后通過(guò)光學(xué)顯微鏡對(duì)劃痕進(jìn)行成像，計(jì)算細(xì)胞遷移率。遷移率=（0 h劃痕寬度-24 h劃痕寬度）/0 h劃痕寬度×100%。

1.2.5 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力 Transwell小室上室預(yù)包被基質(zhì)膠（在培養(yǎng)基中稀釋至1 g/L）。消化、制備密度為3×105/mL的HUVEC細(xì)胞懸液，將HUVEC按照100 μL/孔接種在上室并進(jìn)行分組處理，下室加500 μL含體積分?jǐn)?shù)20% FBS的培養(yǎng)基。培養(yǎng)箱中孵育24 h后取出Transwell小室，用棉簽擦拭除去小室底部聚乙烯膜上表層的細(xì)胞，用4%多聚甲醛固定下表面的細(xì)胞30 min，用5 g/L的結(jié)晶紫染色10 min。在倒置光學(xué)顯微鏡下觀察染成紫色細(xì)胞的數(shù)量并拍照記錄，在高倍鏡視野中隨機(jī)讀取5個(gè)視野計(jì)數(shù)遷移細(xì)胞的個(gè)數(shù)。

1.2.6 Matrigel基質(zhì)膠法檢測(cè)管腔形成能力 將96孔板放在4 ℃冰箱進(jìn)行預(yù)冷處理，每孔加入100 μL基質(zhì)膠，在37 ℃下放置30 min固化。每孔加入3×104個(gè)HUVEC，并進(jìn)行分組處理，培養(yǎng)箱中孵育24 h后隨機(jī)讀取5個(gè)高倍鏡視野拍照，使用Image J軟件計(jì)數(shù)各組細(xì)胞管腔的分支數(shù)，并計(jì)算其與對(duì)照組的比例。

1.2.7 Western blot檢測(cè)TLR4通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水" " " 平 HUVEC分別以3×105/mL、1.5 mL/孔的密度接種在6孔板中，并進(jìn)行分組處理。細(xì)胞在培養(yǎng)箱中孵育24 h后，利用RIPA裂解緩沖液裂解并提取細(xì)胞總蛋白，通過(guò)BCA法檢測(cè)蛋白濃度。取總蛋白100 μg與上樣緩沖液混合，經(jīng)SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)后將蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜。50 g/L牛奶室溫封閉1 h，置于TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65（上述抗體稀釋比例1∶1 000）和β-actin（稀釋比例1∶2 000）一抗中，4 ℃孵育過(guò)夜；次日，TBST洗膜3次，采用羊抗兔二抗（1∶3 000）室溫孵育1 h，TBST洗膜3次，ECL顯色系統(tǒng)曝光并記錄條帶圖像，圖像分析軟件LANE 1D分析條帶并測(cè)定灰度值。以β-actin為內(nèi)參，計(jì)算蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Graphpad prism 9.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（[x] ±s）表示，2組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用Turkey法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物對(duì)HUVEC增殖活力的影響 CCK-8結(jié)果顯示，處理24 h后，與對(duì)照組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組HUVEC增殖活力無(wú)明顯變化（P＞0.05），與oxLDL組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組HUVEC增殖活力下降（P＜0.05）；處理48 h后，與對(duì)照組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組細(xì)胞增殖活力升高（P＜0.05），與oxLDL組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組HUVEC增殖活力無(wú)明顯變化（P＞0.05）；處理72 h后，與對(duì)照組、oxLDL相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組細(xì)胞增殖活力下降（P＜0.05）；處理96 h后，各組間的細(xì)胞增殖活力無(wú)明顯差異（P＞0.05），見表2。

2.2 oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物對(duì)HUVEC遷移、侵襲的影響 與對(duì)照組、oxLDL組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組的細(xì)胞遷移率升高（P＜0.05），該效應(yīng)與VEGF相似。與對(duì)照組、oxLDL組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組侵襲細(xì)胞數(shù)量均明顯增加（P＜0.05）；與對(duì)照組相比，VEGF組侵襲細(xì)胞數(shù)量增加（P＜0.05），見圖1、2，表3。

2.3 oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物對(duì)HUVEC血管生成的影響 與對(duì)照組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組新生管腔節(jié)點(diǎn)增多（P＜0.05），該效應(yīng)與VEGF組類似；與oxLDL組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組新生管腔節(jié)點(diǎn)無(wú)明顯變化（P＞0.05），見圖3、表3；與對(duì)照組、oxLDL組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組VE-cadherin和MMP-2 mRNA水平均明顯升高（P＜0.05）；與對(duì)照組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組VEGF和MMP-9 mRNA水平升高（P＜0.05），見表4。

2.4 oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物對(duì)TLR4/MyD88/NF-κB通路的影響 Western blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組TLR4和MyD88蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05），見圖4、表5；與對(duì)照組相比，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ組p-NF-κB p65/NF-κB p65水平升高（P＜0.05），見圖5、表5。

3 討論

AS起始于氧化脂質(zhì)等損傷因子導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常［9］。APS是以反復(fù)動(dòng)靜脈血栓為主要特征的系統(tǒng)性自身免疫性疾病。臨床研究發(fā)現(xiàn)，APS患者更加易患動(dòng)脈粥樣硬化，提示自身免疫因素在其發(fā)生中的作用［1，10］。血管生成是血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生增殖和遷移，逐漸分化重構(gòu)形成新的小血管的過(guò)程［11］，過(guò)度的血管生成是AS易損斑塊形成的關(guān)鍵特征，被認(rèn)為是心血管疾病的重要病理過(guò)程［12］。因此，本研究擬探討自身免疫因素在血管生成過(guò)程中的作用及機(jī)制，為理解APS相關(guān)AS血管病變提供理論基礎(chǔ)。

有研究發(fā)現(xiàn)，APS患者外周循環(huán)中高水平的aβ2GPⅠ是促進(jìn)AS加速發(fā)展的重要因素，但具體機(jī)制尚不明確［13］。在自身免疫性AS患者中，β2GPⅠ能夠識(shí)別oxLDL表面的7-酮基膽固醇并通過(guò)相互作用形成oxLDL/β2GPⅠ復(fù)合物，該復(fù)合物被認(rèn)為是具有促AS血栓形成的作用［14］。筆者前期研究顯示，oxLDL/β2GPⅠ與aβ2GPⅠ組成的oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ免疫復(fù)合物能夠通過(guò)TLR4途徑促進(jìn)巨噬細(xì)胞來(lái)源的泡沫細(xì)胞的形成［15］。此外，該免疫復(fù)合物也被證實(shí)能夠通過(guò)抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激［16］。本研究發(fā)現(xiàn)，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物處理能夠誘導(dǎo)HUVEC的增殖活力增強(qiáng)，提高HUVEC細(xì)胞遷移能力，提示oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物能夠通過(guò)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，進(jìn)而參與AS中的不穩(wěn)定斑塊形成。有研究報(bào)道，血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常時(shí)存在的VEGF、VE-cadherin等生長(zhǎng)因子以及趨化因子的過(guò)度表達(dá)［17-18］。本研究發(fā)現(xiàn)，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物能夠明顯增強(qiáng)HUVEC的血管生成能力。此外，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物處理能夠上調(diào)HUVEC中VEGF、VE-cadherin、MMP-2和MMP-9的mRNA表達(dá)，表明oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物可能是通過(guò)表達(dá)和分泌VEGF、VE-cadherin、MMP-2和MMP-9等細(xì)胞因子和趨化分子，進(jìn)而促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和血管生成，與文獻(xiàn)中VEGF的促血管生成效應(yīng)一致［7］。此外，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物對(duì)HUVEC細(xì)胞遷移和血管生成能力的促進(jìn)作用高于oxLDL組，提示oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物的形成可能是自身免疫性AS患者病程加速的重要原因。

TLR4是APS中血管內(nèi)皮細(xì)胞活化的關(guān)鍵分子，主要是通過(guò)激活NF-κB p65信號(hào)從而觸發(fā)促炎、促黏附相關(guān)基因的過(guò)度表達(dá)［19］。本研究顯示，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物能夠促進(jìn)HUVEC中TLR4和MyD88蛋白高表達(dá)，上調(diào)NF-κB p65的磷酸化水平，提示oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物可能是通過(guò)TLR4/MyD88/NF-κB通路參與AS不穩(wěn)定斑塊中的血管內(nèi)皮細(xì)胞異常增殖、遷移及血管生成。但oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移及血管生成過(guò)程中是否還存有其他信號(hào)調(diào)控機(jī)制，抑制或者阻斷該信號(hào)通路能否改善免疫復(fù)合物的效應(yīng)尚不明確，這也將是下一步探究的方向。

綜上所述，oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和新生血管生成，其分子機(jī)制可能與TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路激活有關(guān)；oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ復(fù)合物可能是內(nèi)皮細(xì)胞功能異常及血管病變的誘導(dǎo)因素。因此，本研究為探索自身免疫性動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的分子機(jī)制提供了參考。

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（2024-05-29收稿 2024-07-10修回）

（本文編輯 李國(guó)琪）