纖維素酶和乳酸菌對雜交象草青貯結構性碳水化合物影響

摘要：為解決雜交象草［（Pennisetum ameri-canum ×P.purpureum）×P.durpureum schum］青貯粗纖維含量高的難題，本研究以纖維素酶和耐高溫乳酸菌為添加劑，45℃青貯1，3，7，14，60 d，解析其對雜交象草青貯料結構性碳水化合物影響。結果表明：添加劑處理組乳酸含量較高（Plt;0.05），pH值，乙酸，丙酸和氨態氮含量較低（Plt;0.05）。商業乳酸菌組乳酸含量最高，乙酸含量最低（Plt;0.05）。添加劑處理組的中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、半纖維素和纖維素含量較低（Plt;0.05），水溶性碳水化合物、葡萄糖和蔗糖含量較高（Plt;0.05）。纖維素酶組的中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、半纖維素和纖維素含量最低（Plt;0.05），水溶性碳水化合物、葡萄糖和蔗糖含量最高（Plt;0.05），耐高溫乳酸菌組次之。綜上所述，在雜交象草青貯飼料中添加纖維素酶和乳酸菌均能降解結構性碳水化合物并促進乳酸發酵，其中以纖維素酶添加效果最佳。

關鍵詞：‘桂牧1號’雜交象草；纖維素酶；乳酸菌；青貯發酵品質；結構性碳水化合物

中圖分類號：S816.53""" 文獻標識碼：A""""" 文章編號：1007-0435（2024）07-2314-09

doi：10.11733/j.issn.1007-0435.2024.07.033

引用格式：

武齊豐， 陳" 晨， 黃沁驕，等.纖維素酶和乳酸菌對雜交象草青貯結構性碳水化合物影響［J］.草地學報，2024，32（7）：2314-2322

WU Qi-feng， CHEN Chen， HUANG Qin-jiao，et al.A Effects of Cellulase and High-temperature Tolerant Lactic Acid Bacteria on

Structural Carbohydrate of （Pennisetum ameri-canum×P.purpureum）×P.durpureum schum. ［J］.Acta Agrestia Sinica，2024，32（7）：2314-2322

收稿日期：2024-03-28；修回日期：2024-05-10

基金項目：國家自然科學基金（32001401）；四川省科技廳國際合作項目（2021YFH0155）資助

作者簡介：

武齊豐（1997-），女，漢族，寧夏吳忠人，博士研究生，主要從事飼草生產與加工利用研究，E-mail：1018609775@qq.com;*通信作者Author for correspondence，E-mail：yanyh@sicau.edu.cn

A Effects of Cellulase and High-temperature Tolerant Lactic Acid Bacteria on

Structural Carbohydrate of （Pennisetum ameri-canum×P.purpureum）×

P.durpureum schum.

WU Qi-feng1， CHEN Chen1， HUANG Qin-jiao1， ZHANG Yun-fei1， LI Xiao-mei1，

CHEN Yuan-hang1， WEN Xing-jin2， YAN Yan-hong1*

（1. College of Grassland Science and Technology， Sichuan Agricultural University， Chengdu， Sichuan Province 611130， China;

2. Sichuan Academy of Grassland Science， Chengdu， Sichuan Province 6l1731， China）

Abstract：In order to solve the problem of high crude fiber content of hybrid napier grass ［（Pennisetum ameri-canum ×P.purpureum）×P.durpureum schum. ‘Guimu No.1’］，cellulase and high-temperature resistant lactic acid bacteria （LAB） were used as additives to analyze their effects on structural carbohydrates of hybrid napier grass silage for 1，3，7，14 and 60 days at 45℃.The results showed that additive treatments had higher （Plt;0.05） lactic acid content and lower （Plt;0.05） pH value，acetic acid，propionic acid，and ammoniacal nitrogen contents. The commercia LAB group had the highest （Plt;0.05） lactic acid and the lowest （Plt;0.05） acetic acid contents. Neutral detergent fiber，acid detergent fiber，hemicellulose，and cellulose contents were lower （Plt;0.05），whereas water-soluble carbohydrates，glucose，and sucrose contents were higher （Plt;0.05） in all additive treatment groups. The cellulase group had the lowest （Plt;0.05） content of fibrous components and the highest （Plt;0.05） content of soluble carbohydrates，followed by the high-temperature resistant LAB group. In summary，the addition of cellulase and LAB to the napier silage could degrade structural carbohydrates and promote lactic acid fermentation，and the effects of cellulase was better.

Key words：（Pennisetum ameri-canum ×P.purpureum）×P.durpureum schum. ‘Guimu No.1’;Cellulase;Lactic acid bacteria;Fermentation quality;Structural carbohydrates

‘桂牧1號’雜交象草［（Pennisetum ameri-canum ×P.purpureum）×P.durpureum schum. ‘Guimu No.1’］再生性強，產量高、營養豐富，是牛、羊和其它草食動物喜食的優質飼草，在我國南方地區（福建、湖南、四川等地）廣泛種植［1-2］。將其加工制成干草或青貯飼料，以供家畜全年食用，對我國畜牧業發展尤為關鍵。但由于我國南方地區降雨豐富、常年空氣相對濕度高，不利于干草調制，青貯是保存飼草的可行途徑之一。然而，雜交象草水溶性碳水化合物含量低，粗纖維含量高，且表面附著乳酸菌數量低，常規青貯難以成功［3-4］。因此，使用外源添加劑是提高雜交象草青貯發酵品質的重要手段。

雜交象草在酸解或酶解作用下能降低青貯飼料中pH值和木質纖維含量，提高干物質和粗蛋白含量，改善雜交象草青貯發酵品質［5］。此外，將其飼喂家畜后還可改善家畜屠宰性能［6］、酮體品質及肉品質［7］。研究發現，添加乳酸菌制劑可加速青貯飼料中結構性碳水化合物的降解，保留較高含量的水溶性碳水化合物，進而促進乳酸發酵，有效抑制丁酸產生，提高青貯飼料發酵品質［8-10］。然而乳酸菌接種劑的添加效果并不穩定，常受到環境因素的限制［11-12］。大部分乳酸菌的適宜生長溫度在20℃～30℃，過高溫度（≥40℃）會使其失活，進而導致青貯發酵不完全［13-14］。纖維素酶是一種綠色安全的添加劑，能破壞植物細胞壁，將復雜的多糖降解為可被微生物直接利用的單糖，現已被廣泛用于青貯飼料中。研究發現，添加纖維素酶能降低青貯飼料中pH值、中性洗滌纖維（Neutral detergent fiber，NDF）和酸性洗滌纖維（Acid detergent fiber，ADF）含量，提高乳酸菌豐度和水溶性碳水化合物（Water-soluble carbohydrates，WSC）含量［15-16］。但目前研究發現在不同青貯原料中添加纖維素酶的效果差異較大［17-18］。

近期，作者團隊從南方牧草青貯樣品中篩選的植物乳桿菌149（Lactiplantibacillus plantarum 149，LP149），其高溫適應性（45℃）良好，生長速度快，且產酸能力強［19］。此外，支頂孢屬（Acremonium）纖維素酶是纖維素酶的一種，其最佳反應溫度是45℃～60℃［17］。然而，針對高溫（45℃）環境下添加乳酸菌制劑和纖維素酶對雜交象草青貯發酵品質效果并不清楚。因此，本試驗以‘桂牧1號’雜交象草為研究對象，探究添加耐高溫植物乳桿菌149和纖維素酶對青貯發酵品質和結構性碳水化合物降解的影響，為雜交象草的合理青貯提供科學依據。

1" 材料與方法

1.1" 試驗地概括

試驗地點位于四川省崇州市榿泉鎮，處于103.645 214 E、30.556 776 N之間。全區海拔514～520 m，亞熱帶濕潤性季風氣候，年平均氣溫17.5℃，年平均降水量1 112.4 mm，多集中在7—9月，8月最多，年平均太陽總輻射量87.6 kcal·cm-2。土壤以水稻土為主。雜交象草種植方式為扦插種植，種植面積5 m×6 m，每個小區60株，每株施30 g復合肥（N∶P2O5∶K2O=15∶15∶15）。

1.2" 試驗材料

試驗材料為‘桂牧1號’雜交象草［（Pennisetum ameri-canum×P.purpureum）×P.durpureum schum. ‘Guimu No.1’］，于2020年8月26日在四川農業大學崇州現代農業研發基地使用鐮刀刈割，刈割時植株高達1.8 m～2.0 m，處于營養生長期。

試驗所用支頂孢屬（Acremonium）纖維素酶采購自日本東京明治制果藥業株式會社，該酶的總酶活性超過1 000 U·g-1蛋白，且主要由α-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-半乳糖苷酶、β-木聚糖酶和α-異丙嗪酶組成；商業植物乳桿菌（Lactiplantibacillus plantarum，LPC，參考菌株）采購自四川成都高福記生物科技有限公司；耐熱植物乳桿菌149（Lactiplantibacillus plantarum，LP149，GenBank登記號為MH337263）來自四川農業大學草業科技學院。

1.3" 試驗設計

試驗設4個處理組分別為：（1）無菌水（CK，對照）；（2）支頂孢屬纖維素酶處理組（AC，添加量為0.03％ FM）；（3）商業植物乳桿菌處理組（LPC，添加量為5×106 cfu·g-1 FM）；（4）耐熱植物乳桿菌149（LP149，添加量為5×106 cfu·g-1 FM）。每個處理設3個重復。

1.4" 試驗方法

1.4.1" 青貯調制 "將刈割的雜交象草揉絲（9YDB系列創富款，山東新圣泰機械制造有限公司）至2～3 cm后平鋪在室外通風的地方進行晾曬（約4 h），每隔 15 min測定一次含水量，當雜交象草的水分含量達到70％時，分別經不同添加劑處理后再次混勻。隨機稱取300 g雜交象草裝入青貯袋，真空密封。用聚乙烯袋（25 cm×35 cm）進行青貯，置于45℃厭氧培養箱（智能培養箱MJM-80，寧波江南儀器廠）中青貯1，3，7，14和60 d后分別開袋取樣測定。

1.4.2" 青貯原料及青貯料發酵品質及化學成分分析" 將青貯料充分混勻后，稱取20 g青貯樣品置于250 mL玻璃錐形瓶中，加入180 mL蒸餾水，用保鮮膜進行封口后放置于4℃冰箱中浸提24 h，通過雙層紗布和定性濾紙對浸提后的樣品進行過濾得到浸提液，用于測定樣品的pH值（pH value，pH），剩余樣品浸提液保存于-20℃冰箱用于后續測定樣品的氨態氮（Ammonia nitrogen，AN）及有機酸（Organic acids）含量。pH值使用211型精密pH計對青貯飼料浸提液pH值進行測定［20］。氨態氮含量采用苯酚-次氯酸鈉比色法測定［21］。有機酸含量采用島津高效液相色譜儀（島津LC20A型；SHIMADZU（島津）制作所）測定，配備Shodex Rspak KC-811 S-DVB gel column色譜柱（流動相：3 mmol·L-1高氯酸溶液；流速：1.0 mL·min-1；溫度：50℃；檢測的波長為：210 nm，進樣量：5 μL，進樣時間：35 min［22］。用平板計數法對樣品中的微生物進行計數［23］。分別采用MRS（De Man Rogosa Sharpe）瓊脂培養基進行乳酸菌計數，馬鈴薯葡萄糖瓊脂（Potato dextrose agar，PDA）培養基用于酵母菌和霉菌計數，結晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養基（VRBA）用于腸桿菌計數。

取100 g左右的原料或青貯料于紙袋中，放置在105℃的鼓風干燥箱殺青0.5 h，隨后將溫度調至65℃烘干至恒重，測定干物質（Dry matter，DM）含量，將烘干后的樣品用粉碎機粉碎后過篩，用于后續測定結構性碳水化合物，包括中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維（和酸性洗滌木質素（Acid detergent lignin，ADL）；非結構性碳水化合物，包括水溶性碳水化合物、葡萄糖、果糖和蔗糖的含量。采用蒽酮—硫酸比色法測定青貯飼料中的水溶性碳水化合物含量［24］。采用Van Soest等［25］的方法測定青貯飼料的中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維和酸性洗滌木質素含量。根據Li等人［3］的方法計算纖維素（Cellulose）和半纖維素（Hemicellulose））含量。蔗糖、葡萄糖、果糖的含量使用試劑盒（G0545 W，蘇州格銳思生物科技有限公司，中國）進行測定，該試劑盒采用己糖激酶法，通過檢測340 nm下NADPH（還原型輔酶Ⅱ）的增加量，分別計算得到蔗糖、葡萄糖和果糖的含量。

1.5" 數據處理

基礎數據利用Excel軟件進行統計和分析，采用SPSS軟件對試驗數據進行方差分析（ANOVA）。采用Turkey對處理組平均值進行比較。Plt;0.05被認為差異具有統計學意義。

2" 結果與分析

2.1" 青貯原料的化學成分

雜交象草原料化學成分和微生物組成如表1所示。雜交象草的干物質含量為258.82 g·kg-1 FM；WSC含量為72.82 g·kg-1 DM；NDF，ADF和ADL含量分別為618.35，362.61和362.61 g·kg-1 DM；葡萄糖、果糖、蔗糖含量分別為16.63，11.57和3.01 g·kg-1 DM；雜交象草表面附著的乳酸菌、腸桿菌、酵母菌和霉菌數量分別為3.79，4.40，1.98，1.60 lg cfu·g-1 FM。

2.2" 添加劑和時間對雜交象草發酵品質的影響

如表2所示，添加劑與青貯天數的交互作用和青貯天數對pH值、LA、AA、PA、BA和氨態氮有顯著影響（Plt;0.05）。添加劑對pH值、LA、AA、丙酸和氨態氮有顯著影響（Plt;0.05）。隨青貯時間的延長，CK和LPC處理pH值先下降后上升，AC和LP149處理的pH值呈下降趨勢，且添加劑處理組的pH值顯著低于對照組（Plt;0.05）。青貯60 d后，AC處理的pH值最低（4.18），其次為LP149處理（4.20）。各處理組的LA，AA，PA，BA和氨態氮含量呈上升趨勢。乳酸菌添加處理組的LA含量高于對照組和AC處理；其中LPC處理的LA含量最高。LPC處理組AA含量低于其他處理組（Plt;0.05）。發酵過程中僅產生少量的PA和BA（lt;3.5 g·kg-1DM）。添加劑處理組的氨態氮含量顯著低于對照組（Plt;0.05），且LPC和LP149處理中NH3-N濃度較低（Plt;0.05）。

2.3" 添加劑和時間對雜交象草結構性碳水化合物的影響

如表3所示，添加劑與青貯天數的交互作用對NDF，ADF和纖維素有顯著影響（Plt;0.05）。添加劑對NDF，ADF，ADL，半纖維素和纖維素有顯著影響（Plt;0.05）。青貯天數對NDF，ADF，半纖維素和纖維素有顯著影響（Plt;0.05）。隨青貯時間的延長，各處理的NDF，ADF，半纖維素和纖維素呈下降趨勢。與對照相比，添加劑處理降低了NDF，ADF，半纖維素和纖維素的含量（Plt;0.05）。AC處理的NDF，ADF，半纖維素和纖維素含量最低（Plt;0.05），其次為LP149處理。

2.4" 添加劑和時間對雜交象草非結構性碳水化合物的影響

如表4所示，添加劑與青貯天數的交互作用對葡萄糖含量有顯著影響（Plt;0.05）。添加劑、青貯天數對水溶性碳水化合物、葡萄糖、果糖和蔗糖有顯著影響（Plt;0.05）。

隨著青貯時間的延長，各處理的WSC、葡萄糖、果糖和蔗糖呈下降趨勢。與對照相比，添加劑處理增加了青貯飼料的WSC、葡萄糖、果糖和蔗糖的含量。除果糖外，AC處理的WSC、葡萄糖和蔗糖含量顯著高于其他處理組（Plt;0.05）；青貯7 d后葡萄糖含量與其他處理組呈倍數關系（Plt;0.05）。青貯14 d后，LP149處理中的WSC、葡萄糖和果糖含量高于LPC處理。

3" 討論

通常認為原料中的乳酸菌數量gt; 105 cfu·g-1 FM時更有利于青貯飼料的保存［26］。然而，本研究中‘桂牧一號’雜交象草表面附著的乳酸菌數量較低（3.69 lg cfu·g-1 FM），無法滿足優質青貯發酵的要求。因此，青貯添加劑的使用對于提高濕熱地區雜交象草青貯飼料品質尤為重要。

pH值和有機酸作為評價青貯飼料發酵品質好壞的重要指標，能直觀的反映不同處理對雜交象草青貯品質的影響［27］。一般認為，當pH值小于≤4.2時青貯發酵良好［28-29］。本研究中AC和LPC處理組的pH值在青貯60 d后≤ 4.2。青貯發酵過程中，有機酸的累積是導致pH值降低的主要原因［30］，尤其是乳酸的生成［31］。青貯過程中，添加劑處理組的乳酸含量高于對照。乳酸菌添加劑處理組能夠促進乳酸菌發酵產生大量乳酸進而導致pH值快速降低［32］；且LP149處理組pH值更低，這與潘俊歆等［33］添加耐高溫乳酸菌于柱花草（Stylosanthes guianensis）青貯中的試驗結果一致。說明溫帶地區常用植物乳桿菌在高溫地區的效果不佳［34］，而自選乳酸菌在高溫條件下活性更好，能夠快速建立酸性環境。AC處理組的pH值最低，這與王嘯林等［35］研究結果一致。這是由于纖維素酶能夠裂解木質纖維結構的β-1，4-鍵，提高原料細胞壁的降解速率，降低纖維素聚合度，半纖維素降解轉化為水溶性碳水化合物，為乳酸菌發酵提供充足的發酵底物，促進乳酸發酵，降低pH值［16］。乙酸是異型發酵LAB的主產物之一，不僅能促進pH值的降低，還能有效抑制酵母菌和霉菌的生長，進而提高青貯飼料的有氧穩定性［36-37］。LPC處理的乙酸含量低于其他添加劑處理，這與Pitiwittayakul等［38］人的結果一致。原因可能是LPC菌株是同型發酵乳酸菌，利用底物廣泛，產酸和耐酸能力強［39］，促進了同型乳酸發酵。與LPC處理不同，LP149處理組的乙酸含量較高，可能是青貯過程中添加LP149促進了具有抑菌活性的代謝產物的產生，如1，2-丙二醇等。青貯飼料中高濃度的氨態氮歸因于蛋白質過度分解［40］。青貯過程中，所有添加劑處理組的AN濃度均顯著低于對照組，這與趙苗苗等［9］的研究結果一致。表明在雜交象草青貯中添加纖維素酶和乳酸菌能更好的抑制不良微生物對蛋白質的分解，提高青貯品質。且相較于AC處理組，LPC和LP149處理的AN濃度更低，可能是因為相比酶制劑，添加乳酸菌能夠提高乳酸菌的相對豐度，促進乳酸發酵，抑制了丁酸梭菌與植物蛋白的活性，減少蛋白質的降解，這與吳征敏等人［41］的結果一致。

結構性碳水化合物不能被青貯微生物直接利用，但可通過酶解、酸解或微生物活動釋放出水溶性碳水化合物為微生物發酵提供底物，因此結構性碳水化合物又被稱為間接發酵底物［29］。青貯過程中結構性碳水化合物最易降解組分的是半纖維素，其次是纖維素。青貯過程中，AC處理組的NDF、ADF、纖維素和半纖維素含量均顯著低于其他處理，這與陳凌華等［42］的研究結果一致。目前已有研究證明纖維素酶含有一種或多種結合域（CBM）和域間連接肽，它能夠促進纖維素酶與纖維素底物的結合，增加纖維素酶在底物上的濃度，從而提高纖維素酶的催化能力，降低粗纖維含量［43］。在青貯14 d后，LP149青貯飼料中NDF、ADF和纖維素含量低于LPC處理。有研究發現厭氧細菌能夠分泌多酶聚合體降解木質素結構［10］。本試驗中，與常溫地區乳酸菌LPC相比LP149菌株在高溫條件下可能會產生更多的多酶聚合體［44］。

非結構性碳水化合物是青貯發酵過程中可供微生物直接利用的重要底物來源，常見的非結構性碳水化合物有葡萄糖、果糖、蔗糖、果聚糖等，這類碳水化合物可溶于水，又被稱為水溶性碳水化合物，LAB可直接利用WSC進行厭氧發酵［45］。青貯過程中，青貯飼料的WSC、葡萄糖、果糖和蔗糖呈下降趨勢。其中葡萄糖和果糖含量下降是乳酸菌發酵和微生物利用的結果，而蔗糖含量下降是由于底物不足使蔗糖分解成葡萄糖和果糖。葡萄糖、果糖等己糖可通過6-磷酸葡萄糖酸代謝途徑轉化為二分子乳酸［28］。青貯過程中，AC處理的非結構性碳水化合物含量顯著高于其他處理，尤其是葡萄糖含量在青貯7 d后與其他處理組呈倍數關系，纖維素酶在青貯前期酶解作用劇烈，產生的葡萄糖含量比微生物發酵消耗的多［3］ ，這一結果與李福厚等人［17］研究結果一致。青貯14 d后，LP149青貯飼料中WSC、葡萄糖和果糖含量高于LPC處理，這可能是因為LP149處理組中結構性碳水化合物的降解效果更好，破壞了細胞壁結構，使細胞內糖類擴散到細胞外，還能夠直接或間接地促進了具有降解結構性碳水化合物能力的微生物活動［46］。

4" 結論

添加纖維素酶和乳酸菌均能促進雜交象草青貯飼料中結構性碳水化合物的降解，維持較高水溶性碳水化合物含量，進而促進乳酸發酵，降低pH值和氨態氮含量，明顯改善了雜交象草青貯發酵品質，其中以纖維素酶添加效果最佳。

參考文獻

［1］" 賈燕霞，玉柱，邵濤，等. 添加酶制劑對象草青貯發酵品質的影響［J］. 草地學報，2009，17（1）：121-124

［2］" 黃佩珊，張超，陳丹丹，等. 辣木葉提取物對柱花草和象草青貯品質的影響［J］. 草地學報，2023，31（7）：2194-2202

［3］" LI F H，KE W C，BAI J，et al. Pretreatment of Pennisetum sinese silages with ferulic acid esterase-producing lactic acid bacteria and cellulase at two dry matter Contents：Fermentation characteristics，carbohydrates composition and enzymatic saccharification［J］. Bioresource Technology，2020（295）：122261

［4］" 李莉，吳漢葵，解祥學，等. 添加纖維素酶和淀粉對象草青貯發酵品質的影響［J］. 動物營養學報，2021，33（9）：5025-5035

［5］" 趙金鵬. 添加劑對水稻秸稈青貯發酵品質及碳水化合物的影響［D］. 南京：南京農業大學，2018：3-8

［6］" 姚娜，賴志強，滕少花，等. 桂閩引象草對肉鵝生長性能的影響［J］. 中國草地學報，2016，38（3）：96-100

［7］" 黃志朝，易顯鳳，龐天德，等. 紫色象草發酵料對桂科黑豬育肥效果分析［J］. 飼料研究，2021.44（13）：35-39

［8］" 何瑋，冉啟凡.添加纖維素酶和乳酸菌對‘桂牧1號’雜交狼尾草青貯品質的影響［J］. 中國飼料，2022（3）：129-132

［9］" 趙苗苗，玉柱. 添加乳酸菌及纖維素酶對象草青貯品質的改善效果［J］. 草地學報，2015，23（1）：205-210

［10］ 李君風. 牦牛瘤胃中高效纖維素降解菌的分離，鑒定及其在青貯中的應用研究［D］. 南京：南京農業大學，2018：18-22

［11］ KUNG L M，SHAVER D R，GRANTR J，et al. Silage review：Interpretation of chemical，microbial，and organoleptic components of silages［J］. Journal of Dairy Science，2018（101）：4020-4033

［12］ TABSCCO E，PIANO S，REVELLO A，et al. Effect of Lactobacillus buchneri LN4637 and Lactobacillus buchneri LN40177 on the aerobic stability，fermentation products，and microbial populations of corn silage under farm Conditions［J］. Journal of Dairy Science，2011（94）：5589-5598

［13］ YAN Y H，LI X L，GUAN H，et al. Microbial community and fermentation characteristic of Italian ryegrass silage prepared with corn stover and lactic acid bacteria［J］. Bioresource Technology，2019（79）：166-173

［14］ CHEN C，XIN Y F，LI X，et al. Effects of Acremonium cellulase and heat-resistant lactic acid bacteria on lignocellulose degradation，fermentation quality，and microbial community structure of hybrid elephant grass silage in humid and hot areas［J］. Frontiers in microbiology，2022（13）：1066753

［15］ KHOTA W，PHOLSEN S，HIGG D，et al. Natural lactic acid bacteria population of tropical grasses and their fermentation factor analysis of silage prepared with cellulase and inoculant-ScienceDirect［J］. Journal of Dairy Science，2016（99）：9768-9781

［16］ BAI B，QIU R，WANG Z，et al. Effects of Cellulase and Lactic Acid Bacteria on Ensiling Performance and Bacterial Community of Caragana korshinskii Silage［J］. Microorganisms，2023（11）：337

［17］ 李福厚. 產阿魏酸酯酶乳酸菌對青貯飼料纖維降解、家畜消化及健康的影響及作用機制研究［D］. 蘭州：蘭州大學，2021：40-62

［18］ 黃小云，陳長福，黃勤樓，等. 乳酸菌和纖維素酶對狼尾草和圓葉決明混合青貯品質的影響［J］. 畜牧與獸醫，2022（54）：2

［19］ 關皓，曾泰儒，帥楊，等. 西南高溫高濕地區青貯中天然乳酸菌群落結構特征及優質乳酸菌的篩選［J］. 草業科學，2019，36（12）：202-212

［20］ 劉秦華，張建國，盧小良. 乳酸菌添加劑對王草青貯發酵品質及有氧穩定性的影響［J］. 草業學報，2009，18（4）：31-137

［21］ BRODERICK G A，KANG J H. Automated simultaneous determination of ammonia and total amino acids in ruminal fluid and in vitro media［J］. Journal of Dairy Science，1980（63）：64-75

［22］ ZONG C，WU Q，WU A，et al. Exploring the diversity mechanism of fatty acids and the loss mechanisms of polyunsaturated fatty acids and fat-soluble vitamins in alfalfa silage using different additives［J］. Animal Feed Science and Technology，2021（280）：115044

［23］ YAN Y H，LI J L，GUO X S，et al. A study on fermentation quality of Italian ryegrass and soybean straw mixed silage［J］. Acta Prataculturae Sinica，2014（4）：38

［24］ SOEST PJ VAN，ROBERTSON J B，LEWIS B A. Methods for dietary fiber，neutral detergent fiber，and nonstarch polysaccharides in relation to animal nutrition［J］. Journal of Dairy Science，1991（74）：3583-3597

［25］ LI F，DING Z，KE W，et al. Ferulic acid esterase-producing lactic acid bacteria and cellulase pretreatments of corn stalk silage at two different temperatures：Ensiling characteristics，carbohydrates composition and enzymatic saccharification［J］. Bioresource Technology，2019（282）：211-221

［26］ NI K，WANG F，ZHU B，et al. Effects of lactic acid bcteria and molasses additives on the microbial community and fermentation quality of soybean silage［J］. Bioresource Technology，2017（238）：706-715

［27］ 金麗娜，蔣蘇蘇，敬淑燕，等. 黃芪藥渣與全株玉米混合青貯對飼料感官、發酵品質及營養成分的影響［J］. 草地學報，2024，32（2）：630-636

［28］ HE L，WANG C，XING Y，et al. Dynamics of proteolysis，protease activity and bacterial community of Neolamarckia cadamba leaves silage and the effects of formic acid and Lactobacillus farciminis［J］. Bioresource Technology，2019（294）：122127

［29］ MCDONALD P，HENDERSON A R，HERON S J E. The biochemistry of silage［M］. Marlow：Chalcombe Publication，1991：250-251

［30］ WANG C，ZHENG M，WU S，et al. Effects of gallic acid on fermentation parameters，protein fraction，and bacterial community of whole plant soybean silage［J］. Frontiers in Microbiology，2021（12）：662966

［31］ NWS A L，ZHAO J，DONG Z H，et al. Microbial diversity and fermentation profile of red clover silage inoculated with reconstituted indigenous and exogenous epiphytic microbiota［J］. Bioresource Technology，2020（314）：123606

［32］ XIONG H，ZHU Y，WEN Z，et al. Effects of cellulase， Lactobacillus plantarum，and sucrose on fermentation parameters，chemical composition，and bacterial community of hybrid Pennisetum silage［J］. Fermentation，2022（8）：356

［33］ 潘俊歆，李雪楓，龍仕和，等. 柱花草耐高溫優質乳酸菌的篩選及對其青貯發酵品質的改善效果［J］. 草業科學，2024，41（2）：1-12

［34］ SILVA P V，PEREIRA G O，LEANDRO S E，et al. Effects of lactic acid bacteria with bacteriocinogenic potential on the fermentation profile and chemical composition of alfalfa silage in tropical Conditions［J］. Journal of Dairy Science，2016（99）：1895-1902

［35］ 王嘯林，馮冠智，張城瑞，等. 乳酸菌和纖維素酶對馬鈴薯渣與玉米秸稈混合青貯發酵品質，有氧穩定性和體外發酵參數的影響［J］. 中國畜牧雜志，2022，58（4）：201-207

［36］ KLEINWSCHMIT D H，JR L K. A Meta-Analysis of the Effects of Lactobacillus buchneri on the fermentation and aerobic stability of corn and grass and small-grain silages［J］. Journal of Dairy Science，2006（89）：4005-4013

［37］ LI J F，YUAN X J，SEARE D，et al. Characterization of Enterococcus faecalis JF85 and Enterococcus faecium Y83 isolated from Tibetan yak （Bos grunniens） for ensiling Pennisetum sinese［J］. Bioresource Technology，2018（2）：70

［38］ PITIWITTAYALUI N，BUREENOK S，SCHONEWILLE J T，et al. Selective thermotolerant lactic acid Bacteria isolated from fermented juice of epiphytic lactic acid bacteria and their effects on fermentation quality of stylo silages［J］. Frontiers in Microbiology，2021（12）：673946

［39］ 朱春娟，原現軍，董志浩，等. 添加劑對飼料型四倍體刺槐青貯發酵品質和體外消化率的影響［J］. 南京農業大學學報，2017，40（4）：725-731

［40］ 黃莉瑩，崔衛東，田靜，等. 大豆秸和稻草對甜玉米秸稈和濕啤酒糟混合青貯的影響［J］. 草地學報，2024，32（3）：945-951

［41］ 吳征敏，彭蘇，王志敬，等. 添加乳酸菌和纖維素酶對菠蘿渣青貯發酵品質和體外發酵的評價［J］. 動物營養學報，2022，34（12）：981-992

［42］ MU L，XIE Z，HU L，et al. Cellulase interacts with Lactobacillus plantarum to affect chemical composition，bacterial communities，and aerobic stability in mixed silage of high-moisture amaranth and rice straw［J］. Bioresource Technology，2020（315）：123772

［43］ 陳凌華，楊志堅，程祖鋅. 添加酶制劑和乳酸菌對水稻秸稈青貯質量的影響［J］. 中國飼料，2018（20）：81-85

［44］ KURNIASIH S D，ALFI A，NATALIA D，et al. Construction of individual，fused，and co-expressed proteins of endoglucanase and β -glucosidase for hydrolyzing sugarcane bagasse［J］. Microbiological Research，2014（169）：725-732

［45］ LI J F，YUAN X J，DONG Z H，et al. The effects of fibrolytic enzymes，cellulolytic fungi and bacteria on the fermentation characteristics，structural carbohydrates degradation，and enzymatic Conversion yields of Pennisetum sinese silage［J］. Bioresource Technology，2018（264）：123-130

［46］ ZHAO J，DONG Z H，LI J F，et al. Ensiling as pretreatment of rice straw：The effect of hemicellulase and Lactobacillus plantarum on hemicellulose degradation and cellulose conversion［J］. Bioresource Technology，2018（266）：158-165

（責任編輯" 劉婷婷）