烏梅抗肝纖維化的作用及機(jī)制研究

中圖分類號 R285；R965 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2025）02-0172-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.02.07

摘要 目的 探討烏梅抗肝纖維化（HF）的作用及機(jī)制。方法 將雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組（n＝10）與造模組（n＝50），造模組大鼠以四氯化碳誘導(dǎo)建立HF模型。將成模大鼠分為模型組（生理鹽水）、陽性對照藥組[秋水仙堿，0.09 mg/（kg·d）]及烏梅低、中、高劑量組[1.35、2.70、5.40 g/（kg·d）]，每組9 只。大鼠每天灌胃相應(yīng)藥物/生理鹽水1 次，持續(xù)8 周。末次給藥后，計算大鼠肝臟指數(shù)，檢測其肝功能指標(biāo)、肝纖維化四項、氧化應(yīng)激指標(biāo)及炎癥因子水平，采用蘇木精-伊紅（HE）染色法觀察大鼠肝組織病理改變、Masson 染色法觀察大鼠HF 程度、透射電鏡法觀察大鼠肝組織超微結(jié)構(gòu)、TUNEL 染色法檢測大鼠肝細(xì)胞凋亡水平，并采用Western blot法檢測大鼠肝組織中轉(zhuǎn)化生長因子β（1 TGF-β1）、血小板源性生長因子（PDGF）蛋白的表達(dá)。結(jié)果 與正常對照組相比，模型組大鼠丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素、丙二醛、Ⅲ型前膠原蛋白、Ⅳ型前膠原酶、層粘連蛋白、透明質(zhì)酸、白細(xì)胞介素6、腫瘤壞死因子α水平和TGF-β1、PDGF蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.01），超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化酶水平均顯著降低（P＜0.01）；HE、Masson 染色及透射電鏡觀察結(jié)果均提示模型組大鼠出現(xiàn)了明顯的HF特征。與模型組比較，烏梅各劑量組大鼠上述指標(biāo)均有不同程度改善，其中烏梅中、高劑量組大鼠上述指標(biāo)均被顯著逆轉(zhuǎn)（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論烏梅具有抗HF的作用，該作用可能是通過抗氧化、抗炎、減少膠原產(chǎn)生、抑制PDGF表達(dá)及調(diào)控TGF-β1信號通路等機(jī)制實(shí)現(xiàn)的。

關(guān)鍵詞 烏梅；肝纖維化；轉(zhuǎn)化生長因子β1；血小板源性生長因子

肝纖維化（hepatic fibrosis，HF）是在各種原因致肝細(xì)胞受損時，細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）發(fā)生的病理變化。HF是慢性肝病發(fā)展到肝硬化的必經(jīng)階段，若未得到有效治療，可顯著增加肝衰竭和肝細(xì)胞癌的發(fā)生率。研究指出，早期干預(yù)HF 的發(fā)生發(fā)展或促使其逆轉(zhuǎn)，是預(yù)防肝硬化及其他惡性肝病發(fā)生的重要措施[1]。然而，目前西醫(yī)治療HF的手段較為單一，主要為抗病毒、保肝及對癥治療，療效欠佳[2]。因此，探索新的HF防治藥物具有重要意義。

中醫(yī)學(xué)尚無“肝纖維化”的病名記載，但根據(jù)其臨床特征，HF 當(dāng)歸于“積聚”“癥瘕”“臌脹”“死肌”等范疇。研究表明，中藥在防治HF 方面療效明確，且具有多成分、多靶點(diǎn)、多角度及長期服用副作用較小的優(yōu)勢[3]。烏梅為臨床常用藥，《神農(nóng)本草經(jīng)》言其具有治療“死肌”之功效，《本草綱目》認(rèn)為其可治“惡肉”，且有研究證實(shí)重用烏梅的烏梅丸對息肉、瘢痕等有很好的療效[4—5]。此外，烏梅中含多種黃酮類化合物，而黃酮類化合物具有較低的毒性和廣泛的藥理活性，已有研究證實(shí)其具有抗HF作用[6]。由此可見，烏梅具有一定的抗HF潛力。

HF 的發(fā)生發(fā)展是一個復(fù)雜的病理過程，其中肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells，HSC）的激活是HF 發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而HSC的激活與促炎或促纖維化因子密切相關(guān)[7]。研究指出，肝細(xì)胞可直接激活HSC，釋放轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、血小板源性生長因子（platelet-derived growth factor，PDGF）等促纖維化因子以及腫瘤壞死因子α（tumor necrosisfactor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）等炎癥因子，促使HSC向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)HSC合成ECM的能力并抑制ECM的分解，從而促進(jìn)HF的發(fā)生發(fā)展[8]。同時，有研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激過程是包括HF在內(nèi)的諸多疾病發(fā)生的重要環(huán)節(jié)，細(xì)胞自由基產(chǎn)生與消除的失衡可使大量氧化自由基蓄積，導(dǎo)致肝損傷及炎癥發(fā)生，繼而誘發(fā)HF[9]。基于此，本研究擬通過動物實(shí)驗評價烏梅抗HF 的作用并觀察其對促炎因子、促纖維化因子及氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響，初步探討其抗HF的作用機(jī)制，以期為烏梅的臨床應(yīng)用及相關(guān)新藥研發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有ME203E/02 型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]、KZ-Ⅱ型高速組織研磨儀（武漢賽維爾生物科技有限公司）、D3024R型臺式高速冷凍離心機(jī)和SCI-VS型渦旋混合器[大龍興創(chuàng)實(shí)驗儀器（北京）股份公司]、G20 TWIN型透射電子顯微鏡（美國FEI 公司）、FV3000 型共聚焦顯微鏡（日本Olympus 公司）、DK-8B型電熱恒溫水槽（上海精宏實(shí)驗設(shè)備有限公司）、Epoch 型酶標(biāo)檢測儀（美國BioTek 公司）、PBC22A Plus 型全自動生化分析儀（深圳市活水床旁診斷儀器有限公司）、5430R型離心機(jī)（德國Eppendorf公司）。

1.2 主要藥品與試劑

烏梅飲片（批號20240101）購自江西齊仁堂中藥飲片有限公司，由江西齊仁堂中藥飲片有限公司質(zhì)檢合格并鑒定為薔薇科植物梅Prunus mume（Sieb.）Sieb. etZucc.的干燥近成熟果實(shí)。

秋水仙堿片（批號20221006，規(guī)格0.5 mg）購自云南植物藥業(yè)有限公司；肝功能酶及肝代謝物測定試劑盒（批號分別為20220901、20220901）均購自深圳市活水床旁診斷儀器有限公司；Ⅲ型前膠原蛋白（procollagentype Ⅲ protein，PCⅢ）、Ⅳ型前膠原酶（Ⅳ-type pre collagenase，Ⅳ-C）、層粘連蛋白（laminin，LN）、透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（批號均為2023-06）均購自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司；IL-6、TNF-α定量檢測試劑盒（批號分別為RX302856R、RX302058R）均購自泉州市睿信生物科技有限公司；丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化酶（glutathioneperoxidase，GSH-Px）檢測試劑盒（批號分別為20221020、20230520、20230224）均購自南京建成生物工程研究所有限公司；BCA蛋白定量試劑盒（批號20220820）購自北京蘭杰柯科技有限公司；兔源TGF-β1、PDGF、β-肌動蛋白（β-actin）抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG 二抗（ 批號分別為21898-1-AP、14075-1-AP、66009-1-Ig、SA00001-2）均購自美國Proteintech公司。

1.3 動物及飼料

本研究所用動物為雄性SPF級SD大鼠，共60 只，體重（180±20） g，6～8 周齡，購自江西中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗科技中心，動物使用許可證號為SYXK（贛）2022-0002。購入后，所有大鼠均架籠飼養(yǎng)，實(shí)驗室自然采光、通風(fēng)良好且溫度和濕度適宜。實(shí)驗飼料由江西中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗科技中心提供，動物實(shí)驗方案符合江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗動物倫理委員會條例（倫理批號為20220301016）。

2 方法

2.1 烏梅藥液的制備

取烏梅飲片，以10 倍量水浸泡0.5 h，武火快速煮沸，然后轉(zhuǎn)文火煎煮30 min，過濾，重復(fù)操作1 次。將2次煎煮所得藥液混合均勻后蒸發(fā)濃縮，得每1 mL含生藥量0.54 g 的藥液，4 ℃下保存，臨用時稀釋至所需濃度。

2.2 HF大鼠模型制備

將60 只大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，隨機(jī)分為正常對照組（10 只）和造模組（50 只）。其中，造模組大鼠使用四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)建立HF 模型：大鼠皮下注射首劑為5mL/kg 的40%CCl4-橄欖油溶液，而后每隔3 d 皮下注射40%CCl4-橄欖油溶液（3 mL/kg）1 次，連續(xù)8 周[10]；正常對照組大鼠皮下注射等體積橄欖油。8 周后，隨機(jī)選取造模組大鼠5 只和正常對照組大鼠1 只，麻醉后取肝組織進(jìn)行HE及Masson 染色，若肝組織可見明顯的纖維化病變和炎癥細(xì)胞浸潤，則確認(rèn)HF大鼠模型復(fù)制成功。

2.3 分組與給藥

依據(jù)2020 年版《中國藥典》（一部）所載烏梅參考用量、文獻(xiàn)報道臨床常用劑量及古今度量衡[11]，本研究按成人日服烏梅30 g 生藥量給藥，折算得到大鼠等效給藥劑量為2.7 g/（kg·d）。

模型建立成功后，將造模組大鼠隨機(jī)分為模型組、陽性對照藥組[秋水仙堿，0.09 mg/（kg·d）[12]]和烏梅低、中、高劑量組[1.35、2.70、5.40 g/（kg·d），分別為0.5、1、2倍臨床等效劑量]，每組9 只。各給藥組大鼠灌胃相應(yīng)藥物，灌胃體積均為10 mL/kg；正常對照組和模型組大鼠灌胃等體積生理鹽水；每天1 次，連續(xù)8周。

2.4 體重、肝臟質(zhì)量記錄及取材

末次給藥結(jié)束后，稱定各組大鼠的體重，麻醉后打開腹腔，于腹主動脈取血，血樣靜置后于4 ℃下以3 000r/min 離心10 min，獲得上層血清，于－20 ℃下保存，備用。取血后，將肝臟充分暴露，快速分離其周圍組織，取出整個肝臟，稱重并記錄。分別于各組大鼠肝臟相同部位剪取部分肝組織，洗凈，吸干，以4% 多聚甲醛溶液固定，待后續(xù)行肝組織HE、Masson 染色和超微結(jié)構(gòu)觀察；剩余肝組織于－80 ℃下凍存，用于后續(xù)相關(guān)指標(biāo)及蛋白的提取與檢測。

2.5 大鼠肝臟指數(shù)測定

根據(jù)大鼠體重、肝臟質(zhì)量計算肝臟指數(shù)：肝臟指數(shù)（%）＝肝臟質(zhì)量（g）/體重（g）×100%。

2.6 大鼠肝功能、肝纖維化四項及氧化應(yīng)激、炎癥因子指標(biāo)測定

使用全自動生化分析儀，分別測定各組大鼠血清中肝功能指標(biāo)[丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase，ALT）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）及總膽紅素（total bilirubin，TBIL）]水平，使用酶標(biāo)儀以ELISA 法檢測各組大鼠血清中纖維化四項指標(biāo)（PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HA）水平。稱取“2.4”項下各組大鼠凍存的肝組織適量，按照相應(yīng)試劑盒說明書要求操作，使用酶標(biāo)儀檢測肝組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)（SOD、MDA、GSH-Px）、炎癥因子（IL-6、TNF- α）水平。

2.7 大鼠肝組織病理改變觀察

取“2.4”項下固定于4% 多聚甲醛溶液中48 h 的各組大鼠肝組織，用流水沖洗；經(jīng)乙醇脫水、石蠟包埋、切片后，分別進(jìn)行蘇木精染色和伊紅染色，脫水后封片，使用顯微鏡觀察其肝組織病理改變并拍照。

2.8 大鼠肝組織纖維化程度觀察

取“2.4”項下固定于4% 多聚甲醛溶液中的各組大鼠肝組織，常規(guī)制備石蠟切片，經(jīng)脫蠟復(fù)水后，依次行Weigert 鐵蘇木精染液染核（5 min）、鹽酸乙醇分化（30s）、水沖洗（1 min）、Masson 藍(lán)化液返藍(lán)（1 min）、水漂洗（2 min）、麗春紅品紅染液染色（5 min）、弱酸（即水與弱酸溶液以體積比2∶1 配出的弱酸工作液，下同）清洗（1min）、磷鉬酸溶液漂洗（1 min）、弱酸工作液漂洗（1min）、苯胺藍(lán)染液染色（2 min）、弱酸工作液漂洗（1min），然后進(jìn)行梯度乙醇脫水（3 次，每次10 s）、二甲苯透明后，以中性樹膠封片，待封固、晾干后，使用顯微鏡觀察其肝組織纖維化程度并拍照。

2.9 大鼠肝組織超微結(jié)構(gòu)觀察

取“2.4”項下固定于4% 多聚甲醛溶液中48 h 的各組大鼠肝組織，以磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗15 min×3次，再于1% 鋨酸固定液中固定2 h，以漂洗液漂洗15min×3 次；于4 ℃下行梯度乙醇脫水，再用無水丙酮室溫脫水20 min×3 次；于室溫下，將組織置于由無水丙酮和包埋液以體積比1∶1 組成的混合液中包埋3 h，再在由無水丙酮與包埋液以體積比1∶2 組成的混合液中靜置過夜，最后在37 ℃包埋液中放置3 h；將組織依次置于37 ℃烘箱內(nèi)過夜、45 ℃烘箱內(nèi)12 h、60 ℃烘箱內(nèi)48 h；以超薄切片機(jī)切片后，行3% 醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色，使用透射電鏡觀察其肝組織超微結(jié)構(gòu)并拍照。

2.10 大鼠肝細(xì)胞凋亡水平檢測

采用TUNEL法檢測。取“2.4”項下固定于4% 多聚甲醛溶液中的各組大鼠肝組織，常規(guī)制備石蠟切片，依次在二甲苯溶液中浸泡15 min×3 次、無水乙醇中浸泡10 min×2 次、90% 乙醇中浸泡2 min×1 次、水中浸泡2min×1 次，擦干；加入20 μg/mL 不含DNase 的蛋白酶K，于37 ℃下孵育后用PBS 在搖床上清洗3 min×3 次，擦干；加入50 μL 的TUNEL檢測液，37 ℃下避光孵育2h，用PBS 在搖床上洗3 min×3 次，擦干；以抗熒光淬滅封片劑封片，使用共聚焦顯微鏡觀察各組大鼠肝細(xì)胞凋亡情況并采集圖像。TUNEL 染色后，正常細(xì)胞核以藍(lán)染為主，凋亡細(xì)胞核呈棕褐色。按下式計算細(xì)胞凋亡率：細(xì)胞凋亡率（%）＝凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

2.11 大鼠肝組織中TGF-β1、PDGF蛋白表達(dá)檢測

采用Western blot 法檢測。取“2.4”項下各組大鼠凍存的肝組織適量，提取總蛋白，以BCA法測定蛋白的濃度。將蛋白高溫變性，依次進(jìn)行分離膠配制、上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、洗膜、封閉等操作；分別加入TGF-β1、PDGF抗體（稀釋比例均為1∶1 000）及內(nèi)參β-actin 抗體（稀釋比例為1∶50 000），孵育過夜；洗膜后，加入相應(yīng)二抗（稀釋比例為1∶50 000），室溫下?lián)u床振搖0.5 h，孵育60 min；洗膜后，加入ECL化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行顯色，置于凝膠成像系統(tǒng)成像。采用Image J 軟件進(jìn)行灰度值檢測和數(shù)據(jù)分析，以目的蛋白與內(nèi)參蛋白（β-actin）的灰度值比值表示目的蛋白的表達(dá)水平。

2.12 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 25.0 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)以x±s 表示，采用單因素方差分析進(jìn)行多組間比較，采用LSD-t檢驗進(jìn)行進(jìn)一步兩兩比較。檢驗水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 大鼠體重、肝臟質(zhì)量、肝臟指數(shù)比較

與正常對照組相比，模型組大鼠體重顯著減少（P＜0.05）。與模型組相比，各給藥組大鼠體重和烏梅中劑量組大鼠肝臟質(zhì)量均顯著增加（P＜0.01 或P＜0.05）；與陽性對照藥組相比，烏梅高、中、低劑量組大鼠體重和肝臟質(zhì)量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。各組大鼠的肝臟指數(shù)相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

3.2 大鼠血清中肝功能指標(biāo)比較

與正常對照組相比，模型組大鼠血清中AST、ALT、TBIL、ALP水平均顯著升高（P＜0.01）。與模型組相比，各給藥組大鼠血清中ALT 水平以及陽性對照藥組和烏梅中、高劑量組大鼠血清中AST、TBIL、ALP水平均顯著降低（P＜0.05 或P＜0.01）；與陽性對照藥組相比，烏梅高劑量組大鼠血清中ALT、TBIL 水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表2。

3.3 大鼠血清中肝纖維化四項指標(biāo)比較

與正常對照組相比，模型組大鼠血清中PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HA水平均顯著升高（P＜0.01）。與模型組相比，陽性對照藥組和烏梅中、高劑量組大鼠血清中PCⅢ、Ⅳ-C水平以及各給藥組大鼠血清中LN、HA水平均顯著降低（P＜0.05 或P＜0.01）；與陽性對照藥組相比，烏梅高劑量組大鼠血清中Ⅳ-C水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表3。

3.4 大鼠肝組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)比較

與正常對照組相比，模型組大鼠肝組織中MDA水平顯著升高（P＜0.01），SOD、GSH-Px 水平均顯著降低（P＜0.01）。與模型組相比，陽性對照藥組及烏梅中、高劑量組大鼠肝組織中MDA水平均顯著降低（P＜0.01），SOD 水平顯著升高（P＜0.05）；各給藥組大鼠肝組織中GSH-Px 水平均顯著升高（P＜0.05 或P＜0.01）。與陽性對照藥組相比，烏梅中、高劑量組大鼠肝組織中MDA水平和烏梅高劑量組大鼠肝組織中SOD水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表4。

3.5 各組大鼠肝組織中炎癥因子比較

與正常對照組相比，模型組大鼠肝組織中IL-6、TNF-α水平均顯著升高（P＜0.01）。與模型組相比，陽性對照藥組和烏梅高劑量組大鼠肝組織中IL-6、TNF-α水平以及烏梅中劑量組大鼠肝組織中IL-6 水平均顯著降低（P＜0.01）；與陽性對照藥組相比，烏梅高劑量組大鼠肝組織中IL-6、TNF-α水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表5。

3.6 大鼠肝組織病理形態(tài)比較

正常對照組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)未見明顯異常。模型組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變，可見匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤，輕度擴(kuò)張；肝小葉結(jié)構(gòu)受損，小葉中央靜脈難以辨認(rèn)；肝細(xì)胞變性壞死，出現(xiàn)空泡改變且排列紊亂，細(xì)胞核染色加深；肝竇狹窄，出現(xiàn)明顯橋接纖維化，可見多條交錯的纖維間隔，將肝細(xì)胞分隔包繞。與模型組相比，各藥物組大鼠肝組織病理結(jié)構(gòu)明顯改善，空泡明顯減少，肝小葉結(jié)構(gòu)改善，肝細(xì)胞排列尚存一定規(guī)律，肝索結(jié)構(gòu)較清晰，肝竇結(jié)構(gòu)較明顯，未見假小葉結(jié)構(gòu)形成，匯管區(qū)纖維組織增生明顯減少。結(jié)果見圖1。

3.7 各組大鼠肝組織纖維化程度比較

正常對照組大鼠肝結(jié)構(gòu)組織清晰，肝細(xì)胞胞質(zhì)完整，細(xì)胞核清晰，僅在匯管區(qū)及中央靜脈可見藍(lán)染的膠原纖維，肝細(xì)胞間未見明顯纖維增生，肝竇未擴(kuò)張，肝細(xì)胞呈放射狀整齊排列。模型組大鼠肝組織可見大量膠原纖維（呈藍(lán)色）沉積，纖維條索（呈深藍(lán)色）較粗。與模型組相比，各藥物組大鼠匯管區(qū)可見不同程度膠原纖維增生，但纖維著色較淺，纖維條索較細(xì)。結(jié)果見圖2。

3.8 各組大鼠肝組織超微結(jié)構(gòu)比較

正常對照組大鼠肝細(xì)胞線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)及分布正常，排列緊密，線粒體嵴清晰、致密，基質(zhì)均勻。與正常對照組相比，模型組大鼠肝細(xì)胞線粒體大多畸形且明顯腫脹，內(nèi)部結(jié)構(gòu)融合，嵴明顯減少甚至消失。與模型組相比，各藥物組大鼠肝細(xì)胞線粒體損傷顯著改善，正常形態(tài)結(jié)構(gòu)的線粒體數(shù)量顯著增加。結(jié)果見圖3。

3.9 大鼠肝細(xì)胞凋亡情況比較

與正常對照組[細(xì)胞凋亡率（0.56±0.06）%]比較，模型組大鼠肝組織細(xì)胞凋亡率[（4.15±0.30）%]顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，陽性對照藥組和烏梅低、中、高劑量組大鼠肝組織細(xì)胞凋亡率[ 分別為（1.93±0.11）%、（1.70±0.48）%、（1.62±0.48）%、（1.53±0.25）%]均顯著降低（P＜0.05），且烏梅各劑量組與陽性對照藥組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見圖4。

3.10 大鼠肝組織中TGF-β1、PDGF蛋白表達(dá)比較

與正常對照組相比，模型組大鼠肝組織中TGF-β1、PDGF 蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.01）。與模型組相比，各藥物組大鼠肝組織中TGF-β1、PDGF 蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.01）；與陽性對照藥組相比，烏梅高劑量組大鼠肝組織中TGF-β1蛋白表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見圖5、表6。

4 討論

ALT 及AST 是臨床常用來間接判斷肝細(xì)胞損傷情況的重要標(biāo)志物，二者血清水平的升高提示肝細(xì)胞發(fā)生損傷，能夠在一定程度上反映肝臟功能狀態(tài)；ALP 與TBIL 也能反映肝臟功能狀態(tài)，其水平的升高同樣可提示肝細(xì)胞損傷壞死；肝纖維化四項包括PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HA，均參與了HF 的發(fā)生及進(jìn)展，是目前評估HF 水平、直觀反映HF進(jìn)展的指標(biāo)之一[13]。當(dāng)HF發(fā)生時，上述指標(biāo)會發(fā)生明顯的變化，且其水平下調(diào)后HSC的激活及膠原蛋白的蓄積將受到抑制，繼而延緩或抑制HF 的進(jìn)展[14]。肝細(xì)胞過度凋亡也被認(rèn)為是肝損傷的特征，也是HF的關(guān)鍵誘因[15]，故常使用TUNEL染色法觀察肝細(xì)胞凋亡情況，以判斷HF程度。此外，秋水仙堿能較好地改善HF，是抗HF 藥物研究中的常用陽性對照藥，因此本研究也以其為陽性對照藥開展藥效研究。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠AST、ALT、TBIL、ALP、PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HA水平均較正常對照組顯著升高；各藥物組大鼠的ALT、LN、HA水平以及陽性對照藥組和烏梅中、高劑量組大鼠的AST、TBIL、ALP、PCⅢ、Ⅳ-C水平均較模型組顯著降低，并且烏梅高劑量組大鼠部分指標(biāo)與陽性對照藥組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，再結(jié)合HE、Masson、TUNEL染色及透射電鏡觀察結(jié)果，提示烏梅對大鼠HF 具有一定的改善作用。

氧化應(yīng)激損傷能促進(jìn)HF 的進(jìn)展。GSH-Px 可減少過量自由基產(chǎn)生，進(jìn)而抑制HF進(jìn)程；SOD及MDA水平是反映氧化應(yīng)激損傷的重要指標(biāo)[16]。肝臟在發(fā)生纖維化時，會伴有不同程度炎癥的發(fā)生。TNF-α是由巨噬細(xì)胞分泌的具有肝臟毒性的促炎細(xì)胞因子，可直接促進(jìn)HSC活化、增殖以及ECM的合成；作為一種經(jīng)典的促炎因子，IL-6 也常被用于判斷慢性HF的程度[17]。HF發(fā)生的關(guān)鍵因素之一是HSC激活。PDGF由血小板、巨噬細(xì)胞、肌成纖維細(xì)胞和HSC產(chǎn)生，是促進(jìn)HSC活化的一種生長因子；TGF-β1是一種重要的細(xì)胞因子，可在慢性肝損傷過程中促進(jìn)HF的發(fā)生發(fā)展[18]，是最為有效的促HF因子之一。本研究結(jié)果顯示，與正常對照組相比，模型組大鼠MDA、IL-6、TNF-α水平及TGF-β1、PDGF蛋白表達(dá)水平均顯著升高，SOD、GSH-Px水平均顯著降低。給藥后，烏梅各劑量組大鼠上述指標(biāo)均有不同程度改善，其中以烏梅高劑量組效果最好，并且烏梅高劑量組大鼠部分指標(biāo)與陽性對照藥組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。這提示烏梅改善HF的機(jī)制可能與抗氧化、抗炎等多種作用有關(guān)。

綜上所述，烏梅對HF具有較好的改善作用，其作用可能是通過抗氧化、抗炎、減少膠原產(chǎn)生、抑制PDGF表達(dá)及調(diào)控TGF-β1信號通路等機(jī)制實(shí)現(xiàn)的。

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（收稿日期：2024-07-06 修回日期：2024-11-05）

（編輯：林靜）