甲基蓮心堿對帕金森病細胞線粒體自噬的影響

中圖分類號 R965；R742.5 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2025）02-0197-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.02.11

摘要 目的 探究甲基蓮心堿（NEF）調(diào)節(jié)腺苷一磷酸活化的蛋白激酶（AMPK）/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/UNC-51 樣激酶1（ULK1）信號通路對帕金森病（PD）細胞線粒體自噬的影響，從而探討該藥改善PD的作用機制。方法 用100 μmol/L 的1-甲基-4-苯基吡啶離子（MPP+）處理SH-SY5Y細胞24 h 以構(gòu)建PD細胞模型，將PD模型細胞分為模型組（PD組）和NEF低、中、高濃度處理組（NEF-L、NEF-M、NEF-H組，2.5、5.0、10.0 μmol/L）以及NEF高濃度+AMPK抑制劑組（NEF-H+Compound C組，10.0 μmol/LNEF和50 μmol/L Compound C）；另取未經(jīng)MPP+、NEF處理的細胞作為對照組。觀察各組細胞的超微形態(tài)，檢測其自噬體數(shù)量、存活率、凋亡率、線粒體膜電位的變化情況，胱天蛋白酶3（Caspase-3）、微管相關(guān)蛋白1 輕鏈3（LC3）、Beclin-1 蛋白的表達水平，以及mTOR、AMPK、ULK1 蛋白的磷酸化水平。結(jié)果 與PD組比較，NEF-L、NEF-M、NEF-H組細胞自噬體明顯增多，膜電位有所升高，存活率、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1 蛋白的表達和AMPK、ULK1 蛋白的磷酸化水平均顯著升高或上調(diào)，凋亡率和Caspase-3、p62 蛋白的表達及mTOR蛋白的磷酸化水平均顯著降低或下調(diào)，且上述改善作用均呈濃度依賴性（P＜0.05）；Compound C能顯著逆轉(zhuǎn)高濃度NEF的上述改善作用（P＜0.05）。結(jié)論 NEF通過上調(diào)AMPK、ULK1 蛋白的磷酸化水平，下調(diào)mTOR蛋白的磷酸化水平來促進PD模型細胞的線粒體自噬，抑制細胞凋亡，從而發(fā)揮神經(jīng)細胞保護作用。

關(guān)鍵詞 甲基蓮心堿；帕金森病；線粒體自噬；AMPK/mTOR/ULK1 信號通路

帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是全球第二常見的神經(jīng)退行性疾病，全球患病人數(shù)超過600 萬[1]。由于老年人口不斷增長，PD發(fā)病率逐漸升高，其預(yù)防及治療以藥物為主，但副作用較多、療效有限[1]。PD 病理機制復(fù)雜且高度多樣，以靜止性震顫、肌肉僵硬、運動遲緩等多種運動癥狀為主要臨床表現(xiàn)；此外，非運動癥狀在PD患者中也較為常見，包括認知和行為障礙、睡眠不規(guī)律、感覺和自主神經(jīng)功能障礙[2―3]。

甲基蓮心堿（neferine，NEF）是從蓮種子中提取的雙芐基異喹啉生物堿成分，具有抗炎、抗氧化、抗心律失常、抗高血壓、抗血栓形成、抗血小板聚集、改善遺忘等多種藥理活性，已被用于高熱、心律失常、高血壓、血小板聚集、肥胖和睡眠不足等癥的治療[4]。據(jù)報道，NEF可通過阻斷核因子κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)來抑制脂多糖介導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞活化，進而抑制慢性神經(jīng)炎癥，對PD小鼠具有一定的保護作用[5]，但具體作用機制尚不完全清楚。

研究指出，自噬是負責細胞清除和維持細胞穩(wěn)態(tài)的生物學(xué)過程，可能是PD發(fā)病機制的重要組成部分[6]。腺苷一磷酸活化的蛋白激酶（adenosine monophosphateactivated protein kinase，AMPK）/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）/UNC-51 樣激酶1（UNC-51-like kinase 1，ULK1）信號通路與自噬調(diào)節(jié)相關(guān)。其中，AMPK為高度保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是調(diào)節(jié)代謝過程和炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵能量傳感器，可直接磷酸化mTOR 復(fù)合物1（mTOR complex 1，mTORC1）信號通路的若干組分，從而導(dǎo)致mTORC1 活性下調(diào)，減少mTOR的表達，下調(diào)的mTOR則可通過磷酸化促使ULK1 活化并促進自噬的發(fā)生[7]。據(jù)報道，厚樸酚可通過激活A(yù)MPK/mTOR/ULK1 信號通路促進自噬，從而改善阿爾茨海默病相關(guān)病理損傷[8]。但NEF是否能夠通過調(diào)節(jié)AMPK/mTOR/ULK1 信號通路來影響PD 細胞的線粒體自噬尚不清楚。為此，本研究基于AMPK/mTOR/ULK1 信號通路，初步探討NEF 對PD 細胞線粒體自噬的影響，旨在為闡明NEF改善PD的作用機制提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括GENios Plus 型酶標儀（成都市科邁普生物科技有限公司）、FormaTM Steri-CycleTM i160 型CO2 培養(yǎng)箱和Talos L120C TEM 型透射電鏡（美國Thermo Fisher Scientific 公司）、BX51 型熒光顯微鏡（日本Olympus 公司）、FACSymphonyTM A5 型流式細胞儀（美國BD公司）、Tanon EPS 600 型電泳儀（上海天能科技有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

NEF對照品（批號SN8050，純度≥98%）購自北京索萊寶科技有限公司；AMPK抑制劑Compound C的對照品（批號HY-13418A，純度99.91%）、1-甲基-4-苯基吡啶離子（1-methyl-4-phenylpyridinium ion，MPP+；批號HYW008719，純度99.94%）均購自美國MCE公司；兔源胱天蛋白酶3（Caspase-3）、磷酸化AMPK（phosphorylatedAMPK，p-AMPK）、磷酸化mTOR（phosphorylatedmTOR，p-mTOR）、磷酸化ULK1（phosphorylated ULK1，p-ULK1）、AMPK、mTOR、ULK1、Beclin-1、β-肌動蛋白（β-actin）抗體和辣根過氧化物酶標記的羊抗兔免疫球蛋白G二抗、DMEM培養(yǎng)基（批號分別為MA5-45039、PA5-104982、44-1125G、PA5-78249、PA5-105297、PA5-34663、MA5-32699、PA1-16857、PA1-183、31460、11965092）均購自美國Thermo Fisher Scientific 公司；兔源p62、微管相關(guān)蛋白1 輕鏈3（microtubule-associated protein 1 lightchain 3，LC3）抗體（批號分別為ab109012、ab192890）均購自英國Abcam 公司；Annexin Ⅴ-FITC 細胞凋亡檢測試劑盒（批號WK304）購自北京百奧萊博科技有限公司；單丹磺酰尸胺（monodansyl cadaverine，MDC）試劑盒、線粒體膜電位試劑盒（批號分別為C3018S、C2006）均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

1.3 細胞

人神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY5Y（批號SNL-092）購自武漢尚恩生物技術(shù)有限公司。

2 方法

2.1 SH-SY5Y細胞培養(yǎng)與PD細胞模型建立

取SH-SY5Y細胞，在常規(guī)條件下培養(yǎng)，待其生長、融合至80%～90% 時進行實驗。取上述SH-SY5Y細胞，用100 μmol/L 的MPP+誘導(dǎo)培養(yǎng)24 h，以構(gòu)建PD細胞模型（經(jīng)MTT法檢測，若誘導(dǎo)后的細胞存活率較正常細胞顯著降低，則說明PD細胞模型構(gòu)建成功）[9]。

2.2 NEF干預(yù)濃度篩選

依據(jù)相關(guān)文獻[6]及前期實驗結(jié)果，將構(gòu)建成功的PD模型細胞用不同濃度的NEF（0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L）處理24 h，另設(shè)不加MPP+、NEF 的對照組以及不加藥物、不加細胞的空白組，每組設(shè)置6 個復(fù)孔。處理后，每孔細胞加入MTT溶液10 μL，孵育4 h，加二甲基亞砜混勻，用酶標儀于490 nm波長下檢測其吸光度，并按下式計算細胞存活率：細胞存活率＝（實驗組吸光度－空白組吸光度）/（對照組吸光度－空白組吸光度）×100%。根據(jù)細胞存活率檢測結(jié)果篩選最優(yōu)藥物干預(yù)濃度，用于后續(xù)實驗。

2.3 細胞分組與給藥

將PD 模型細胞隨機分為PD 組和NEF 低、中、高濃度處理組（NEF-L、NEF-M、NEF-H 組）以及NEF 高濃度+AMPK 抑制劑組（NEF-H+Compound C 組），另取未經(jīng)MPP+、NEF處理的SH-SY5Y細胞作為對照組，每組設(shè)6 個復(fù)孔。NEF-L、NEF-M、NEF-H組細胞分別用2.5、5.0、10.0 μmol/L 的NEF（濃度根據(jù)“2.2”項下結(jié)果設(shè)置）處理24 h，NEF-H+Compound C組細胞用10.0 μmol/L 的NEF和50 μmol/L的Compound C[10]共同處理24 h。

2.4 細胞增殖檢測

采用MTT法檢測。取對數(shù)生長期SH-SY5Y細胞，按1×104個/孔接種至96 孔板內(nèi)，按“2.1”“2.3”項下方法造模、分組、處理。24 h 后，按“2.2”項下方法檢測各組細胞的存活率。

2.5 細胞超微形態(tài)觀察

采用透射電鏡觀察。取對數(shù)生長期SH-SY5Y 細胞，按1×104個/孔接種至96 孔板內(nèi)，按“2.1”“2.3”項下方法造模、分組、處理。24 h后，以1 500 r/min離心5 min，收集細胞，以3% 戊二醛溶液固定，再經(jīng)醋酸雙氧鈾和枸櫞酸鉛染色后，使用透射電鏡觀察各組細胞的超微形態(tài)。

2.6 細胞自噬體數(shù)量檢測

采用MDC 染色法檢測。取對數(shù)生長期SH-SY5Y細胞，按5×105個/孔接種至6 孔板內(nèi)，按“2.1”“2.3”項下方法造模、分組、處理。24 h 后，收集細胞，用磷酸鹽緩沖液清洗，每孔加入5×10－5 mol/L 的MDC試劑，于室溫下避光孵育15 min，使用熒光顯微鏡觀察各組細胞內(nèi)自噬體（呈綠色熒光）數(shù)量的變化情況。

2.7 細胞凋亡檢測

采用流式細胞術(shù)檢測。取對數(shù)生長期SH-SY5Y細胞，按5×105個/孔接種至6 孔板內(nèi)，按“2.1”“2.3”項下方法造模、分組、處理。24 h 后，收集細胞，用磷酸鹽緩沖液清洗3 次，離心，棄上清液，細胞用培養(yǎng)基調(diào)整密度后，依次加入Annexin Ⅴ-FITC 緩沖液、PI 染液，于室溫下避光孵育30 min，使用流式細胞儀檢測各組細胞的凋亡情況，并記錄凋亡率（即流式圖右上和右下象限細胞百分率之和）。

2.8 細胞線粒體膜電位檢測

采用JC-1 探針法檢測。取對數(shù)生長期SH-SY5Y細胞，按5×105個/孔接種至6 孔板內(nèi)，按照“2.1”“2.3”項下方法造模、分組、處理。24 h 后，收集細胞，用磷酸鹽緩沖液清洗，于37 ℃下加入0.5 μmol/L 的JC-1 探針試劑，避光染色1 h；收集細胞，用乙二胺四乙酸-胰蛋白酶分散后，使用熒光顯微鏡觀察細胞線粒體膜電位的變化情況（JC-1 為單體時，呈綠色熒光，提示線粒體發(fā)生損傷，膜電位較低；JC-1 為聚合物時，呈紅色熒光，提示線粒體損傷緩解，膜電位較高）。

2.9 細胞中凋亡、自噬相關(guān)蛋白表達檢測

采用Western blot 法檢測。取對數(shù)生長期SH-SY5Y細胞，按1×106個/孔接種至6 孔板內(nèi)，按照“2.1”“2.3”項下方法造模、分組、處理。24 h 后，收集細胞，提取蛋白，檢測濃度后加熱變性。取變性蛋白適量，經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜上，于室溫下以脫脂牛奶封閉；洗膜后，加入Caspase-3、p-mTOR、mTOR、p62、LC3、Beclin-1、p-AMPK、AMPK、p-ULK1、ULK1、β-actin 一抗（稀釋比例分別為1∶5 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶10 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶1 000、1∶5 000、1∶2 000），于4 ℃下孵育過夜；洗膜后，加入相應(yīng)二抗（稀釋比例為1∶10 000），于室溫下孵育2 h；洗膜后，以ECL發(fā)光顯影、成像。使用Quantity One 軟件分析蛋白條帶的灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參蛋白（β-actin）的灰度值比值表示目的蛋白的表達水平，再以LC3-Ⅱ與LC3-Ⅰ、p-mTOR 與mTOR、p-AMPK 與AMPK、p-ULK1 與ULK1 的表達水平比值分別表示自噬活性和mTOR、AMPK、ULK1 蛋白的磷酸化水平。

2.10 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 25.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。實驗數(shù)據(jù)以x±s 表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用SNK-q檢驗。檢驗水準α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 NEF干預(yù)濃度篩選結(jié)果

與對照組（100%）比較，經(jīng)MPP+誘導(dǎo)而未經(jīng)NEF處理的細胞的存活率[（53.64±5.21）% ] 顯著降低（P＜0.05）。經(jīng)MPP+誘導(dǎo)并經(jīng)1.0、2.5、5.0、10.0、20.0 μmol/L的NEF 處理后，細胞的存活率分別為（56.47±6.25）%、（67.19±7.03）% 、（79.24±8.18）% 、（88.37±9.09）% 、（89.76±9.20）%；當NEF≥2.5 μmol/L 時，對應(yīng)組別細胞的存活率均顯著高于未經(jīng)NEF 處理的細胞（P＜0.05），且經(jīng)10.0、20.0 μmol/L NEF處理的細胞的存活率組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。基于此，本研究選擇2.5、5.0、10.0 μmol/L作為后續(xù)實驗NEF的干預(yù)濃度。

3.2 細胞增殖變化

與對照組（100%）比較，PD 組細胞的存活率[（52.79±5.18）% ]顯著降低（P＜0.05）；與PD 組比較，NEF-L、NEF-M、NEF-H 組細胞的存活率[（68.23±7.09）%、（80.48±8.21）%、（89.78±9.14）%]均顯著升高，且呈濃度依賴性（P＜0.05）；與NEF-H組比較，NEF-H+Compound C 組細胞的存活率[（72.62±7.35）%]顯著降低（P＜0.05）。

3.3 細胞超微形態(tài)變化

對照組細胞較為完整，形態(tài)正常，自噬體較少；與對照組比較，PD組細胞內(nèi)可見自噬體形成，線粒體中空明顯；與PD組比較，NEF-L、NEF-M、NEF-H組細胞內(nèi)部分線粒體中空并呈多膜樣結(jié)構(gòu)，自噬體明顯增多，且上述變化有一定的濃度依賴趨勢；與NEF-H組比較，NEF-H+Compound C 組細胞內(nèi)線粒體中空減少，自噬體明顯亦減少。結(jié)果見圖1。

3.4 細胞內(nèi)自噬體數(shù)量變化

對照組細胞內(nèi)綠色熒光較弱，自噬體較少；與對照組比較，PD組細胞內(nèi)綠色熒光增強，自噬體增多；與PD組比較，NEF-L、NEF-M、NEF-H組細胞內(nèi)綠色熒光進一步增強，自噬體進一步增多，且上述變化有一定的濃度依賴趨勢；與NEF-H組比較，NEF-H+Compound C 組細胞內(nèi)綠色熒光減弱，自噬體減少。結(jié)果見圖2。

3.5 細胞凋亡情況

與對照組[（2.28±0.26）%]比較，PD 組細胞的凋亡率[（39.72±4.13）%]顯著升高（P＜0.05）；與PD組比較，NEF-L、NEF-M、NEF-H 組細胞的凋亡率[（32.58±3.31）%、（27.02±2.57）%、（21.04±2.10）%]均顯著降低，且呈濃度依賴性（P＜0.05）；與NEF-H組比較，NEF-H+Compound C 組細胞的凋亡率[（30.86±3.23）%]顯著升高（P＜0.05）。各組細胞凋亡的流式圖略。

3.6 細胞線粒體膜電位變化

與對照組比較，PD組細胞的綠色熒光較強，紅色熒光較弱，線粒體發(fā)生損傷，膜電位較低；與PD 組比較，NEF-L、NEF-M、NEF-H組細胞的綠色熒光減弱，紅色熒光增強，線粒體損傷有所緩解，膜電位有所升高，且上述變化有一定的濃度依賴趨勢；與NEF-H組比較，NEF-H+Compound C組細胞的綠色熒光增強，紅色熒光減弱，線粒體發(fā)生損傷，膜電位降低。結(jié)果見圖3。

3.7 細胞中凋亡、自噬相關(guān)蛋白表達比較

與對照組比較，PD 組細胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1 蛋白的表達水平均顯著降低，Caspase-3、p62 蛋白的表達水平均顯著升高（P＜0.05）；與PD組比較，NEFL、NEF-M、NEF-H組細胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1 蛋白的表達水平均顯著升高，Caspase-3、p62 蛋白的表達水平均顯著降低，且呈濃度依賴性（P＜0.05）；與NEFH組比較，NEF-H+Compound C 組細胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1 蛋白的表達水平均顯著降低，Caspase-3、p62 蛋白的表達水平均顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見圖4、表1。

3.8 細胞中AMPK/mTOR/ULK1 信號通路相關(guān)蛋白表達比較

與對照組比較，PD 組細胞中AMPK、ULK1 蛋白的磷酸化水平均顯著降低，mTOR蛋白的磷酸化水平顯著升高（P＜0.05）；與PD 組比較，NEF-L、NEF-M、NEF-H組細胞中AMPK、ULK1 蛋白的磷酸化水平均顯著升高，mTOR蛋白的磷酸化水平均顯著降低，且呈濃度依賴性（P＜0.05）；與NEF-H組比較，NEF-H+Compound C組細胞中AMPK、ULK1 蛋白的磷酸化水平均顯著降低，mTOR蛋白的磷酸化水平顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見圖5、表2。

4 討論

PD 發(fā)病率高，影響我國近2% 老年人的生活質(zhì)量[11]。研究指出，PD的神經(jīng)病理學(xué)特征是黑質(zhì)中多巴胺能神經(jīng)元的進行性丟失，伴有路易體和神經(jīng)突的積累，其主要成分是聚集的α-突觸核蛋白（由SNCA 基因編碼），從而導(dǎo)致黑質(zhì)紋狀體神經(jīng)變性[11]。現(xiàn)有治療方法可以緩解PD 患者的早期癥狀，但不能阻止疾病進展或逆轉(zhuǎn)現(xiàn)有病情[11]。因此，尋找新的藥物對于PD 的臨床治療至關(guān)重要。

蓮子心是蓮種子的綠色胚，是一種可食用的中草藥，具有多種營養(yǎng)和藥用價值，可用于治療神經(jīng)退行性疾病、失眠、高燒和心血管疾病[12]。NEF 是蓮子心所含的主要雙芐基異喹啉生物堿成分，具有抗心律失常、抗高血壓、抗癌、抗氧化、抗炎、治療神經(jīng)退行性疾病等作用[4]。Wu 等[13]研究表明，NEF 可顯著提高SH-SY5Y 細胞的活力并降低其活性氧水平，抑制β淀粉樣蛋白和tau蛋白誘導(dǎo)的毒性，并增強線蟲的抗應(yīng)激能力，具有神經(jīng)保護作用。自噬是一種高度保守的分解代謝過程，可將異常蛋白和細胞器隔離到自噬體中，并將其遞送到溶酶體進行降解和回收，對細胞穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)、壓力適應(yīng)和生存至關(guān)重要[14]。一項缺血性腦損傷研究指出，NEF可顯著抑制LC3-Ⅱ、Beclin-1 和p62 等自噬相關(guān)蛋白表達的上調(diào)，并阻止自噬體的形成[15]。本研究通過構(gòu)建PD 細胞模型發(fā)現(xiàn)，細胞出現(xiàn)線粒體損傷并發(fā)生凋亡，自噬體明顯增加，說明經(jīng)MPP+誘導(dǎo)后細胞發(fā)生了自噬和凋亡；經(jīng)2.5、5.0、10.0 μmol/L 的NEF干預(yù)后，PD細胞中自噬體增多，自噬加重，凋亡率顯著降低，Caspase-3、p62 蛋白的表達顯著下調(diào)，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1 蛋白的表達顯著升高或上調(diào)，線粒體損傷有所改善，且上述作用具有濃度依賴性，提示NEF能夠促進細胞線粒體自噬進而緩解細胞凋亡。這一結(jié)果與文獻[15]有所不同，可能與所用模型不同、所涉疾病發(fā)生機制不同有關(guān)。然而，無論是促進自噬還是抑制自噬，兩項研究均證明了NEF對缺血性腦損傷和PD有一定的改善作用。

AMPK是能量代謝、細胞生長和自噬的重要調(diào)節(jié)因子[16]。AMPK作為關(guān)鍵的能量傳感器，可通過磷酸化來激活ULK1 蛋白，以維持細胞能量穩(wěn)態(tài)并促進自噬，而mTOR是細胞生長的中樞調(diào)節(jié)劑和自噬的關(guān)鍵制動器，具有抑制ULK1 激活的能力[16]。研究報道，AMPK被激活后，ULK1 蛋白可以被磷酸化的AMPK直接激活，也可以通過mTOR的失活間接激活，進而導(dǎo)致顆粒細胞自噬[17]。據(jù)報道，激活A(yù)MPK/mTOR/ULK1 信號通路可提高LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1 水平，降低p62 水平，從而促進自噬[8]。Zaki 等[18]研究發(fā)現(xiàn)，羅氟司特可通過上調(diào)p-AMPK、p-ULK1、Beclin-1 蛋白的表達和LC3- Ⅱ/LC3-Ⅰ，以及下調(diào)p62、p-mTOR蛋白的表達來恢復(fù)細胞的自噬功能。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)NEF處理后，PD模型細胞中AMPK、ULK1 蛋白的磷酸化水平均顯著升高，mTOR蛋白的磷酸化水平均顯著降低，與上述研究的結(jié)果基本一致。為明確NEF 的作用是否與AMPK/mTOR/ULK1信號通路有關(guān)，本研究在高濃度NEF 的基礎(chǔ)上聯(lián)用了AMPK抑制劑Compound C，結(jié)果顯示，該抑制劑逆轉(zhuǎn)了NEF對PD模型細胞各定量指標的改善作用。

綜上所述，NEF通過上調(diào)AMPK蛋白的磷酸化水平而使其活化，活化的AMPK蛋白可使下游ULK1 蛋白的磷酸化水平升高、mTOR蛋白的磷酸化水平降低，進而促進PD模型細胞線粒體自噬，抑制細胞凋亡，從而發(fā)揮神經(jīng)細胞保護作用。本研究為未來NEF治療PD提供了可參考的實驗依據(jù)，但本研究僅通過體外細胞實驗初步證實了NEF與PD細胞自噬的關(guān)系，該成分能否在體內(nèi)也發(fā)揮相同的作用及具體機制尚需相關(guān)動物實驗進一步驗證。

參考文獻

[ 1 ] LIZAMA B N，CHU C T. Neuronal autophagy and mitophagy

in Parkinson’s disease[J]. Mol Aspects Med，

2021，82：100972.

[ 2 ] MINCHEV D，KAZAKOVA M，SARAFIAN V. Neuroinflammation

and autophagy in Parkinson’s disease-novel

perspectives[J]. Int J Mol Sci，2022，23（23）：14997.

[ 3 ] NECHUSHTAI L，F(xiàn)RENKEL D，PINKAS-KRAMARSKI

R. Autophagy in Parkinson’s disease[J]. Biomolecules，

2023，13（10）：1435.

[ 4 ] LI S J，ZHANG Y Y，ZHANG J，et al. Neferine exerts

ferroptosis-inducing effect and antitumor effect on thyroid

cancer through Nrf2/HO-1/NQO1 inhibition[J]. J Oncol，

2022，2022：7933775.

[ 5 ] LI T，ZHAI Y X，ZHENG T Y，et al. Neferine exerts antiinflammatory

activity in BV-2 microglial cells and protects

mice with MPTP-induced Parkinson’s disease by inhibiting

NF-κB activation[J]. Mol Med Rep，2023，28

（6）：235.

[ 6 ] KINET R，DEHAY B. Pathogenic aspects and therapeutic

avenues of autophagy in Parkinson’s disease[J]. Cells，

2023，12（4）：621.

[ 7 ] HAN D，KIM D，KIM H，et al. Methylsulfonylmethane

ameliorates metabolic-associated fatty liver disease by

restoring autophagy flux via AMPK/mTOR/ULK1 signaling

pathway[J]. Front Pharmacol，2023，14：1302227.

[ 8 ] WANG X C，JIA J P. Magnolol improves Alzheimer’s

disease-like pathologies and cognitive decline by promoting

autophagy through activation of the AMPK/mTOR/

ULK1 pathway[J]. Biomed Pharmacother，2023，161：

114473.

[ 9 ] 彭秀華，柳明杰. MiR-486-5p 靶向TRPM2 對帕金森病

模型細胞自噬和凋亡的影響[J]. 中國老年學(xué)雜志，2021，

41（1）：115-122.

PENG X H，LIU M J. Effect of miR-486-5p targeting

TRPM2 on autophagy and apoptosis in Parkinson’s disease

model cells[J]. Chin J Gerontol，2021，41（1）：115-122.

[10] 時延龍，周鵬，王雪凱，等. 銀杏內(nèi)酯K 調(diào)節(jié)AMPK/

mTOR/ULK1 信號通路對乳腺癌細胞自噬和凋亡的影

響[J]. 西部醫(yī)學(xué)，2024，36（1）：42-46.

SHI Y L，ZHOU P，WANG X K，et al. Influences of

ginkgolide K on autophagy and apoptosis in breast cancer

cells by regulating AMPK/mTOR/ULK1 signaling pathway[

J]. Med J West China，2024，36（1）：42-46.

[11] MA Z W，LIANG H，HU B C，et al. Autophagy-regulating

miRNAs：novel therapeutic targets for Parkinson’s disease：

review[J]. Int J Mol Med，2023，51（6）：50.

[12] WANG M Y，ZHANG S S，AN M F，et al. Neferine ameliorates

nonalcoholic steatohepatitis through regulating

AMPK pathway[J]. Phytomedicine，2023，114：154798.

[13] WU M C，GAO Y H，ZHANG C，et al. Liensinine and

neferine exert neuroprotective effects via the autophagy

pathway in transgenic Caenorhabditis elegans[J]. BMC

Complement Med Ther，2023，23（1）：386.

[14] TU H Y，YUAN B S，HOU X O，et al. α-synuclein suppresses

microglial autophagy and promotes neurodegeneration

in a mouse model of Parkinson’s disease[J]. Aging

Cell，2021，20（12）：e13522.

[15] SENGKING J，OKA C，WICHA P，et al. Neferine protects

against brain damage in permanent cerebral ischemic

rat associated with autophagy suppression and AMPK/

mTOR regulation[J]. Mol Neurobiol，2021，58（12）：6304-

6315.

[16] YANG C L，DENG Z W，ZENG Q H，et al. BMAL1 involved

in autophagy and injury of thoracic aortic endothelial

cells of rats induced by intermittent heat stress through

the AMPK/mTOR/ULK1 pathway[J]. Biochem Biophys

Res Commun，2023，661：34-41.

[17] LIN M L，HUA R，MA J，et al. Bisphenol A promotes autophagy

in ovarian granulosa cells by inducing AMPK/

mTOR/ULK1 signalling pathway[J]. Environ Int，2021，

147：106298.

[18] ZAKI E S，SAYED R H，SAAD M A，et al. Roflumilast

ameliorates ovariectomy-induced depressive-like behavior

in rats via activation of AMPK/mTOR/ULK1-dependent

autophagy pathway[J]. Life Sci，2023，327：121806.

（收稿日期：2024-07-04 修回日期：2024-12-24）

（編輯：鄒麗娟）