血清APOC1和Klotho表達對腎癌后腹腔鏡下腎部分切除術患者預后的預測價值

摘要：目的探討載脂蛋白C1（APOC1）和Klotho表達預測腎癌后腹腔鏡下腎部分切除術患者預后的臨床價值。方法選擇確診為腎癌并行后腹腔鏡腎部分切除術的患者80例，根據預后情況分為預后良好組（61例）和預后不良組（19例），另擇健康體檢者78例為對照組。收集一般臨床資料，采用熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）檢測血清APOC1、Klotho表達。采用Pearson法分析患者血清APOC1與Klotho水平的相關性，Cox回歸分析影響患者預后的因素，受試者工作特征（ROC）曲線評估APOC1、Klotho水平對患者預后的預測效能。結果預后不良組和預后良好組臨床分期和病理分級差異有統計學意義（P＜0.05）。對照組、預后良好組和預后不良組血清APOC1表達水平依次升高，Klotho表達水平依次降低（P＜0.05）。患者血清APOC1與Klotho表達水平呈負相關（r=-0.577，P＜0.001）。Cox回歸分析結果顯示，Klotho表達水平降低、APOC1表達水平升高、病理分級2級、臨床分期Ⅱ期是導致患者預后不良的獨立危險因素（P＜0.05）。ROC曲線結果顯示，血清APOC1、Klotho聯合預測腎癌患者術后預后不良的臨床價值優于單一指標（P＜0.05）。結論腎癌后腹腔鏡下腎部分切除術預后不良患者血清APOC1水平升高，Klotho水平降低，二者聯合對患者預后具有較高的臨床價值。

關鍵詞：腎腫瘤；載脂蛋白C1；Klotho；后腹腔鏡腎部分切除術；預后

中圖分類號：R737.11文獻標志碼：A DOI：10.11958/20240969

Predictive value of serum APOC1 and Klotho expression for prognosis in patients undergoing laparoscopic partial nephrectomy for renal cancer

WU Yameng，LI Liangliang，WANG Yangang，XING Defu

Department of Urology，Anhui Medical University Affiliated Fuyang Hospital，Fuyang 236000，China

Abstract：Objective To explore the clinical value of apolipoprotein C1（APOC1）and Klotho expression levels in predicting the prognosis of patients with renal cancer after laparoscopic partial nephrectomy.Methods Eighty patients diagnosed as renal cell carcinoma and underwent laparoscopic partial nephrectomy were collected as the study subjects.According to the prognosis，patients were separated into the good prognosis group（61 cases）and the poor prognosis group（19 cases）.Seventy-eight healthy individuals underwent physical examination were collected as the control group.The general clinical data of the subjects were collected，and serum levels of APOC1 and Klotho were tested and analyzed in three groups.Pearson method was applied to analyze the correlation between serum APOC1 and Klotho levels in patients.Cox regression was applied to analyze factors affecting the prognosis of patients.Receiver operating characteristic（ROC）curve was applied to analyze the predictive efficacy of APOC1 and Klotho levels on the prognosis of patients.Results There were significant differences in clinical stage and pathological grade between the poor prognosis group and the good prognosis group（Plt;0.05）.Compared with the control group，the serum APOC1 levels were significantly increased in the good prognosis group and the poor prognosis group（P＜0.05），while the Klotho expression levels were obviously reduced（P＜0.05）.And the serum APOC1 level in the control group，the poor prognosis group and the good prognosis group was increased successively（Plt;0.05），while the serum Klotho level was obviously decreased successively（P＜0.05）.The serum APOC1 expression level of patients was negatively correlated with Klotho level（r=-0.577，P＜0.001）.The Cox regression results showed that decreased expression level of Klotho and elevated expression level of APOC1，pathologic grading 2 and clinical staging stageⅡwere all independent risk factors for poor prognosis（P＜0.05）.The area under the curve（AUC）of serum APOC1 and Klotho levels，and their combined application in predicting poor postoperative prognosis in renal cancer patients was 0.863，0.850 and 0.953，respectively，and the clinical value of combination of the two in predicting the prognosis of patients was superiorto that of APOC1 and Klotho alone.Conclusion Patients with poor prognosis after retroperitoneal laparoscopic partial nephrectomy have a obvious increase in serum levels of APOC1 and a obvious decrease in serum level of Klotho.The combination of the two has high clinical significance in predicting the prognosis of patients with retroperitoneal laparoscopic partial nephrectomy.

Key words：kidney neoplasms;apolipoprotein C1;Klotho;retroperitoneal laparoscopic partial nephrectomy for renal cancer;prognosis

腎癌具有高發病率、高致死率等特點，是十大惡性腫瘤之一。腹腔鏡腎部分切除術具有失血少、恢復快、并發癥少等優點，近幾年已經成為傳統開放式腎部分切除術的替代方法［1］。但對于該術式，患者預后存在較大差異［2］，并且尚缺乏預測預后的有效指標。載脂蛋白C1（Apolipoprotein C1，APOC1）是載脂蛋白C家族中最小的載脂蛋白，參與膽固醇代謝、膜重建、神經元凋亡和重組等多種生物學過程，且APOC1在多種癌癥的發生和發展中發揮重要作用［3］。已有研究證明，抗衰老因子Klotho具有抗炎、抗纖維化和抗氧化特性，在腎臟疾病中發揮了關鍵作用［4］，同時可抑制腎癌的進展［5］。目前關于APOC1和Klotho表達與腎癌后腹腔鏡下腎部分切除術患者預后的關系尚未明確。本研究通過檢測后腹腔鏡腎部分切除術患者血清APOC1、Klotho表達，探討APOC1、Klotho預測患者預后的臨床價值。

1對象與方法

1.1研究對象選取2018年10月—2020年6月于我院泌尿外科確診為腎癌并行后腹腔鏡腎部分切除術的患者80例，其中男53例，女27例，年齡42～75歲，平均（61.52±11.44）歲。腎癌參照《2016版WHO腎臟腫瘤新分類解讀》［6］的相關診斷標準，并經實驗室、影像學、病理學確診。納入標準：（1）首次發病，行后腹腔鏡腎部分切除術。（2）臨床資料完整。（3）生存期≥6個月。（4）符合腎腫瘤保留腎單位手術（Nephron sparing surgery，NSS）適應證，并順利完成手術者。排除標準：（1）精神系統疾病。（2）有意識障礙。（3）冠心病、肺炎等其他器質性疾病。（4）其他惡性腫瘤。（5）肝腎功能不全者。另選擇本院同期健康體檢者78例為對照組，其中男45例，女33例，年齡43～78歲，平均（61.53±10.95）歲。腎癌患者行后腹腔鏡腎部分切除術后對其進行3年隨訪，根據預后情況分為預后良好組（無復發、遠處轉移等情況，61例）和預后不良組（出現腎癌復發11例、轉移5例、死亡3例，19例）。所有研究對象均知情同意，本研究經過醫院倫理委員會批準（BY201805-003）。

1.2方法

1.2.1一般資料收集收集并記錄入組患者的年齡、性別、病程、腫瘤類型、病理分級、TNM分期等指標。

1.2.2血液學指標采集腎癌患者術前（對照組為體檢當日）空腹靜脈血3～5 mL，血液靜置30 min后以3 000 r/min離心獲得血清，置于-80℃下保存備用。采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平，試劑盒購自南京卡米洛生物公司（貨號：2H-KMLJh315349，2H-KMLJh315447），操作嚴格遵循試劑盒說明書。

1.2.3熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）檢測血清APOC1、Klotho表達取部分血清樣本，使用TRIzol試劑（上海源葉生物科技有限公司）提取血清總RNA。采用反轉錄試劑盒（北京伊塔生物科技有限公司）將總RNA反轉錄為cDNA，并進行定量分析。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列見表1。qRT-PCR反應體系20μL：10.0μL SYBR Green Master Mix（北京伊塔生物科技有限公司）、2.0μL cDNA、0.5μL上游引物、0.5μL下游引物和7.0μL無RNA酶水。反應條件：97.5℃8 min；97.5℃30 s，60℃20 s，72.5℃10 s，共40個循環。以GAPDH為內參，采用2-ΔΔCt法計算APOC1、Klotho相對表達量。

1.3統計學方法采用SPSS 27.0軟件對數據進行分析。符合正態分布的計量資料以均數±標準差（x±s）表示，2組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較行SNK-q檢驗；計數資料采用例或例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Pearson法分析血清APOC1和Klotho水平的相關性；采用Cox回歸分析影響后腹腔鏡腎部分切除術患者預后的因素；采用受試者工作特征（ROC）曲線分析APOC1、Klotho表達對患者預后的預測效能，曲線下面積（AUC）比較行Delong檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 3組一般資料比較預后良好組、預后不良組和對照組的性別、年齡差異均無統計學意義；預后良好組和預后不良組患者的病程及腫瘤類型差異無統計學意義。與對照組相比，預后良好組和預后不良組Scr和BUN水平呈現不同程度的升高（P＜0.05）；與預后良好組相比，預后不良組病理分級為2級、TNM分期Ⅱ期占比較高（P＜0.05），見表2。

2.2 3組血清APOC1、Klotho表達水平比較對照組、預后良好組和預后不良組血清APOC1水平依次升高，Klotho水平依次降低（P＜0.05），見表3。

2.3血清APOC1、Klotho表達水平相關性腹腔鏡腎部分切除術患者血清APOC1（1.53±0.46）與Klotho表達水平（0.78±0.21）呈負相關（r=-0.577，Plt;0.001）。

2.4后腹腔鏡腎部分切除術患者預后的影響因素分析以腎癌患者行后腹腔鏡腎部分切除術后的預后情況為因變量（預后不良=1，預后良好=0），以血清APOC1、Klotho表達水平和表2單因素分析結果中表現出顯著性差異的指標病理分級（1級=1，2級=2）、TNM分期（Ⅰ期=1，Ⅱ期=2）、Scr、BUN為自變量，構建Cox回歸模型。結果顯示，Klotho表達水平降低、APOC1表達水平升高、病理分級2級、TNM分期Ⅱ期是導致患者預后不良的獨立危險因素（Plt;0.05），見表4。

2.5血清APOC1、Klotho表達對后腹腔鏡腎部分切除術后預后的預測價值以腎癌患者行后腹腔鏡腎部分切除術后的預后作為狀態變量（預后不良=1，預后良好=0），APOC1、Klotho表達水平為檢驗變量，繪制ROC曲線評價血清APOC1、Klotho水平對患者預后的預測效能。結果顯示，血清APOC1、Klotho聯合預測腎癌患者術后預后不良的臨床價值優于APOC1、Klotho單獨檢測（Z分別為2.545、2.045，Plt;0.05），見表5、圖1。

3討論

腎癌發病率約占所有新發癌癥的4.1%，術后預防復發或轉移是提高患者生存期的關鍵，因此，尋找特異性指標預測患者術后預后十分重要［7-8］。APOC1是載脂蛋白C家族成員之一，主要由肝臟合成，也可由皮膚、肺和腸道等其他器官合成［9］。APOC1存在于乳糜粒、極低密度脂蛋白和高密度脂蛋白中，作為一種能夠在不同類型的脂蛋白間轉移的載脂蛋白，在維持脂質穩態及血漿脂蛋白（如高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等）代謝中起重要作用，其還被證實可抑制血漿中膽管酯轉移蛋白［10-11］。有研究表明，APOC1參與膜重建、膽固醇分解代謝、樹突狀細胞凋亡和重組等多種生物學過程［4］，且被認為與2型糖尿病、糖尿病腎病、阿爾茨海默病和腎小球硬化的發生有關［9，12］。另外，越來越多的證據表明，APOC1參與癌癥的發生和發展。例如，APOC1在胃癌［13］、結直腸癌［14］中高表達，其高表達與患者預后不良有關。本研究結果顯示，預后不良組血清APOC1表達水平顯著高于預后良好組，且APOC1表達水平升高是導致后腹腔鏡腎部分切除術患者預后不良的獨立危險因素，提示APOC1水平升高與后腹腔鏡腎部分切除術患者預后不良有關，這可能與APOC1參與樹突狀細胞的凋亡和重組等生理過程有關；ROC曲線結果顯示，APOC1預測后腹腔鏡腎部分切除術患者預后不良的AUC為0.863，敏感度為68.42%，特異度為91.80%，提示APOC1可作為臨床預測該類患者預后的輔助指標。

Klotho基因主要在腎臟和大腦組織中表達，可產生膜結合受體和體液調節因子［15］。研究表明，小鼠缺乏Klotho基因時，會出現類似于人動脈粥樣硬化、癌癥和骨質疏松癥的癥狀，隨后的臨床研究也發現了類似于Klotho缺乏癥的功能障礙，特別是在癌癥、心血管和腎臟疾病方面［16］。有研究表明，Klotho作為一種腫瘤抑制因子，在肝細胞癌、胰腺癌、乳腺癌和肺癌等腫瘤進展中發揮重要作用［17-19］。此外，由于Klotho具有抗炎、抗纖維化、抗衰老和抗氧化的特性，亦對多種腎臟疾病的進展有重要影響［5］。Gigante等［5］研究發現，腎癌組織中Klotho表達水平顯著低于正常組織，且低表達的Klotho參與癌癥的發生和轉移過程。本研究結果顯示，預后良好組和預后不良組患者血清Klotho表達水平顯著低于對照組，且Klotho表達水平降低是后腹腔鏡腎部分切除術患者預后不良的獨立危險因素，提示患者術后Klotho水平降低會在一定程度上導致其預后不良，Klotho具有抑癌、抗炎等作用；ROC曲線結果顯示，Klotho可作為臨床預測該類患者預后的輔助指標。

此外，本研究中患者血清APOC1與Klotho表達水平呈負相關，且ROC曲線分析發現二者聯合預測預后的效能優于單獨檢測，提示臨床上可將該兩指標納入檢測范圍并用于預后判斷，以利于患者的及時治療和預后改善。

綜上所述，后腹腔鏡腎部分切除術后發生預后不良患者的血清APOC1水平升高，Klotho水平降低，二者呈負相關，且二者聯合對預后具有較高的預測價值。后續將擴大樣本量進一步驗證此結論，并探討APOC1、Klotho影響后腹腔鏡腎部分切除術患者預后的具體作用機制。

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（2024-08-01收稿2024-10-11修回）

（本文編輯陳麗潔）