腎衰寧膠囊對5/6腎切除大鼠微炎癥狀態及腎纖維化的影響

摘要：目的"探討腎衰寧膠囊對慢性腎衰竭大鼠微炎癥狀態及腎纖維化的影響。方法"采用5/6腎切除法復制慢性腎衰竭模型，按照隨機數字表法隨機分為5組：正常組、模型組、腎衰寧低劑量組、腎衰寧高劑量組、陽性對照組（代文），對大鼠進行連續4周的藥物干預后留取腎臟組織，采用HE、Masson染色法觀察腎臟病理學改變；生化法評估腎功能變化；ELISA法檢測IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。結果"①與正常組比較，模型組肌酐、尿素氮濃度明顯增加，差異有統計學意義（Plt;0.05）；相較于模型組，各藥物干預組肌酐、尿素氮明顯降低，結果有統計學差異（Plt;0.05）。②模型組相較于正常組IL-1β、IL-6、TNF-α的表達明顯上調，結果有統計學意義（Plt;0.05）；與模型組相比，腎衰寧高劑量組和陽性對照組IL-1β、IL-6、TNF-α表達下調，結果具有統計學意義（Plt;0.05）；腎衰寧低劑量組IL-1β、IL-6表達明顯下調，結果有統計學差異（Plt;0.05）。結論 腎衰寧膠囊可以有效改善大鼠腎功能，下調IL-1β、IL-6、TNF-α表達，減輕大鼠微炎癥狀態，抑制腎纖維化，從而延緩慢性腎衰竭的病情進展。

關鍵詞：慢性腎衰竭；腎衰寧膠囊；微炎癥；腎纖維化

中圖分類號：R692 """"""""文獻標識碼：A"""""""""""文章編號：1672-4437（2025）01-0048-05

慢性腎衰竭（Chronic Renal Failure，CRF）不僅是造成患者死亡的直接原因，也是多種疾病的并發癥和危險因素，其發病率在全球范圍內呈逐漸增長趨勢，已成為主要的公共健康問題之一[1-2]。腎纖維化與CRF的進展有直接相關性，從早期腎功能損傷至終末期腎臟病均有腎纖維化參與。腎纖維化是CRF的一個關鍵病理過程，其主要特征是細胞外基質異常沉積，如纖維連接蛋白、肌成纖維細胞等積聚增加[3-4]。而微炎癥與腎纖維化密切相關，持續的微炎癥狀態能夠導致腎功能喪失和腎纖維化，在CRF進展中起著至關重要的作用[5-6]。腎組織細胞受損后，會釋放白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）等炎癥因子，介導炎性反應，促進腎纖維化進展。反之，腎纖維化又進一步促進炎癥因子的釋放，形成惡性循環，加速腎臟疾病的進展。因此，減少炎癥因子的過度表達，減輕微炎癥狀態，是抑制腎纖維化，延緩CRF進展的關鍵靶點。

我國中醫學中并無明確關于“慢性腎衰竭”“腎纖維化”等相關病名的記載，根據其病因病機、發病特點、臨床表現等，當屬 “關格”“癃閉”“腎勞”等病證范疇［7］。腎纖維化的病因病機仍以本虛標實為關鍵，治療上以健脾益腎、通腑泄濁、化瘀利水等原則為主[8]。腎衰寧主要由丹參、大黃、太子參、黃連、牛膝、制半夏、紅花、茯苓、陳皮、甘草等幾味藥物組成，相較于常規西醫治療，腎衰寧在提升臨床療效、改善腎功能等方面更有優勢，且安全性更好[9]，但其發揮作用的具體機制尚不明確。本研究擬以大鼠5/6腎切除模型為研究對象，觀察腎衰寧膠囊干預前后腎臟形態結構的改變以及腎功能、炎癥因子的變化等，探究腎衰寧膠囊對5/6腎切除大鼠微炎癥狀態及腎纖維化的影響，以期為臨床中醫藥治療腎臟病提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

60只6～8周的SD雄性大鼠，體重180～220g，由遼寧長生生物技術股份有限公司提供[許可證號：SCXK（遼）2020-0001]，飼養環境溫度、濕度適宜，置于12h光照、黑暗交替環境中，自由飲食飲水。

1.2 主要實驗試劑與儀器

主要實驗試劑：腎衰寧膠囊（云南雷允上藥業有限公司），纈沙坦膠囊（又名代文，諾華制藥），肌酐、尿素氮測定試劑盒（雷杜/長春匯力），IL-1β 、IL-6、TNF-α酶聯免疫吸附測定試劑盒（Reed Biotech）等。主要實驗儀器：酶標檢測儀（BioTeK），全自動生化分析儀（深圳雷杜生命科技），高精度移液器（Thermo Scientific），高速低溫離心機（Servicebio）等。

1.3 實驗方法

1.3.1 慢性腎衰竭模型制作與鑒定

60只SD雄性大鼠適應性飼養7天，術前12 h禁食，自由飲水。隨機選取6只大鼠作為正常組（N組，6只），其余54只采用5/6腎切除法復制慢性腎衰竭模型，實驗分兩步法進行，先行左腎2/3切除術，1周后行右腎切除術。在第2次術后4周檢測腎功能進行模型鑒定。

1.3.2"分組與給藥方法

選取24只慢性腎衰竭模型建模成功的實驗大鼠，按照隨機數字表法隨機分為4組：模型組（M組，6只），腎衰寧低劑量組（L組，6只），腎衰寧高劑量組（H組，6只），陽性對照組（C組，6只）。將腎衰寧膠囊按照人和大鼠體表面積折算，折算系數為0.018，腎衰寧低劑量組給予0.095g/kg灌胃，腎衰寧高劑量組給予0.378g/kg灌胃，陽性藥物對照組給予代文1.44mg/kg灌胃，正常組予以生理鹽水2ml，各實驗組每日灌胃、連續4周。

1.3.3 HE、Masson染色法觀察腎臟病理學改變

取固定的大鼠腎臟組織，常規脫水、石蠟包埋、切片、脫蠟至水，分別行蘇木精-伊紅（HE）染色和Masson染色，顯微鏡下觀察腎臟組織形態學改變。

1.3.4 生化法評估腎功能變化

各組大鼠股動脈取血，常溫靜置，高速低溫離心機3500r/min，離心10min，取上清。在全自動生化儀上設置好相應參數進行自動測定。

1.3.5 ELISA法檢測IL-1β、IL-6、TNF-α的含量

取各組大鼠血清，按照酶聯免疫吸附測定試劑盒說明，分別設定標準孔、空白孔和樣本孔，加樣后覆膜，37℃孵育90分鐘；洗滌3次，加生物素化抗體工作液，覆膜，37℃孵育60分鐘；洗板3次，加HRP酶結合物工作液，覆膜，37℃溫育30 分鐘，重復此步驟1次；加底物，覆膜，37℃避光孵育15分鐘左右；加終止液，終止反應；立即用酶標儀在5分鐘內測定每個孔450nm的光密度值。

1.4 統計學方法

采用SPSS 26.0統計軟件對數據進行統計分析。符合正態分布的計量資料以表示，兩組比較采用獨立樣本t檢驗，多組比較用方差分析；計數資料以頻數n表示，用χ2檢驗進行統計分析。以Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 實驗結果

2.1 實驗大鼠一般情況

實驗過程中觀察大鼠的活動、尿量、死亡、存活等情況，發現在模型制備過程中，實驗大鼠死亡原因主要包括麻醉不當、失血性休克、腹水、腸脹氣、感染等，還包括被其它大鼠啃咬而死，推測是術后血腥氣激發了大鼠的動物獸性所致。實驗大鼠死亡原因總結見表1。

2.2 慢性腎衰竭模型鑒定

在造模術后4周進行大鼠眼底靜脈叢取血檢測腎功能。結果顯示，模型組與正常組大鼠血肌酐（t=2.03，Plt;0.05）和尿素氮（t=2.03，Plt;0.05）含量差異均具有統計學意義。模型組有24只大鼠血肌酐和尿素氮含量均高于正常組的2～3倍，提示造模成功[10]（見表2）。

2.3 腎臟組織病理改變

HE、Masson染色均顯示正常組腎臟未見明顯異常，模型組可見腎小管代償性擴張，腎間質炎性細胞浸潤，藍色膠原纖維沉淀明顯，纖維化組織增多等病理改變。各藥物治療組相較于模型組，上述病理現象均有不同程度的減輕。提示腎衰寧可以改善慢性腎衰竭大鼠腎臟的纖維化情況（如圖1）。

2.4 各組腎功能變化

各組肌酐（F=2.78，Plt;0.05）和尿素氮（F=2.84，Plt;0.05）的檢測結果提示各組組間具有明顯統計學差異。與正常組比較，模型組肌酐（t=2.26，Plt;0.05）、尿素氮（t=2.23，Plt;0.05）濃度明顯增加，差異有統計學意義。與模型組相比，腎衰寧低劑量組（t=2.26，Plt;0.05；t=2.20，Plt;0.05）、高劑量組（t=2.23，Plt;0.05；t=2.20，Plt;0.05）和陽性對照組（t=2.31，Plt;0.05；t=2.62，Plt;0.05）均能夠明顯降低大鼠的肌酐、尿素氮濃度，結果有統計學差異，提示腎衰寧能夠保護殘余腎功能，尤以高劑量效果顯著（見表3）。

2.5 各組IL-1β、IL-6、TNF-α的含量變化

各組IL-1β（F=3.01，Plt;0.05）、IL-6（F=2.97，Plt;0.05）、TNF-α（F=2.84，Plt;0.05）的檢測結果提示各組組間具有明顯統計學差異。與正常組相比，模型組IL-1β（t=2.37，Plt;0.05）、IL-6（t=2.57，Plt;0.05）、TNF-α（t=2.26，Plt;0.05）的表達明顯上調，結果有統計學意義。與模型組相比，腎衰寧高劑量組IL-1β（t=2.78，Plt;0.05）、IL-6（t=2.57，Plt;0.05）、TNF-α（t=2.26，Plt;0.05）表達下調，結果具有統計學差異。腎衰寧低劑量組IL-1β（t=2.31，Plt;0.05）、IL-6（t=2.57，Plt;0.05）、TNF-α（t=2.26，Plt;0.05）表達呈下調趨勢，其中IL-1β、IL-6的下調更為明顯，結果具有統計學意義。陽性對照組相較于模型組，IL-1β（t=2.45，Plt;0.05）、IL-6（t=2.57，Plt;0.05）、TNF-α（t=2.26，Plt;0.05）表達下調，結果具有統計學意義。見表4。

3 討論

腎纖維化是CRF的典型特征，微炎癥反應普遍存在于CRF患者，此外，炎癥反應也是導致腎間質纖維化的重要原因之一，微炎癥狀態貫穿纖維化發生發展的全過程[11]，持續的微炎癥狀態會導致腎臟對促炎因子及炎癥因子的清除能力下降，直接影響腎臟疾病的進展。IL-1β、IL-6、TNF-α是體內關鍵炎癥因子，研究發現[12-13]炎癥因子可通過參與腎纖維化的免疫刺激途徑、調節促纖維化因子的表達等，造成腎小球系膜異常氧化和增厚、細胞增殖，從而導致腎臟細胞外基質的異常沉積，促進腎纖維化的發展，損害患者的腎功能。而降低TNF-α、IL-6等炎癥因子的表達，減輕微炎癥狀態和腎纖維化，可以有效減緩慢性腎臟疾病的進展[14]。本研究通過5/6腎切除的方法，成功復制慢性腎衰竭模型，使用腎衰寧膠囊對大鼠進行干預，結果發現相較于模型組，腎衰寧高劑量組和陽性對照組IL-1β、IL-6、TNF-α表達明顯下調，腎衰寧低劑量組IL-1β、IL-6含量明顯減少，表明腎衰寧膠囊可以有效減少炎癥因子的釋放，減輕微炎癥狀態，這也與近期的臨床研究結果相一致[15-16]。

中醫藥能夠有效改善CRF患者病情，提高生活質量，減少并發癥，在CRF的治療中越來越受到大家的重視[17]。腎衰寧是目前臨床治療慢性腎衰竭的常用藥，多年的臨床使用實踐證明，腎衰寧具有明顯的改善腎功能的作用[18-19]。本研究通過檢測各組大鼠腎功能，發現與模型組相比，各治療組均能夠明顯降低大鼠的肌酐、尿素氮濃度，提示腎衰寧膠囊能夠保護殘余腎功能，尤以高劑量效果顯著。另外，多項研究表明，腎衰寧的主要藥物組分具有明顯抗炎、抗纖維化的作用，可以有效延緩腎纖維化進展[20-22]。本研究模型組腎臟組織HE、Masson染色結果可見腎小管代償性擴張，腎間質炎性細胞浸潤，藍色膠原纖維沉淀明顯，纖維化組織增多等病理現象，各藥物治療組相上述病理現象均有不同程度的減輕。這一結果提示腎衰寧膠囊可以有效改善慢性腎衰竭大鼠腎臟的纖維化情況。

綜上所述，本研究通過復制5/6腎切除模型來評估腎衰寧膠囊對慢性腎衰竭大鼠微炎癥狀態及腎纖維化的影響，實驗數據分析結果顯示腎衰寧膠囊可以有效改善大鼠腎功能，延緩慢性腎衰竭的病情進展，這可能與腎衰寧膠囊減輕大鼠微炎癥狀態、抑制腎纖維化有關，但其具體調控的信號通路和發生機制還需要進一步研究。

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收稿日期：2024-07-11

基金項目：安徽省高?？茖W研究重點項目（2023AH052419）。

作者簡介：鮑芳（1973-），女，安徽阜陽人，阜陽職業技術學院副主任醫師，主要研究方向：中醫及中西醫結合治療腎臟病。