黃巖本地早橘多倍體新種質創制及分子鑒定

中圖分類號：S666 文獻標志碼：A 文章編號：1009-9980（2025）07-1389-08

Abstract： 【Objective】 Bendizao tangerine （Citrus succosa Hort. ex Tanaka）， originally from Huangyan， Zhejiang Province，is a representative variety of the regional brand Huangyan Miju. It is an excellent variety for both fresh consumption and processing for canned fruit.In the 198Os，the Bendizao tangerine experienced its peak development period in Huangyan. However， due to long-term asexual propagation， problems such as the decline in yield and quality have emerged in recent years.And due to the seedy nature of Bendizao tangerine and the introduction of numerous of seedless varieties from abroad over the past few decades，the production and planting area of the Bendizao tangerine in Huangyan have declined sharply. Therefore， conducting genetic improvement to produce new seedless germplasms with application potential is an effective strategy to solve the above industrial problems of the Bendizao tangerine and enhance the brand value of Huangyan Miju.The creation of triploids through

When allotetraploids are used as parents in crosses with diploids，the resulting triploid hybrids are expected to inherit excellent traits from allthree parental genomes， except for sedlessness. This would facilitates the selection of new varieties that combine seedless fruits with other desirable traits.Based on this strategy， Huazhong Agricultural University previously generated over 3500 triploid plants from more tan 80 interploidy crosses，utilizing allotetraploid somatic hybrids as male parents and some local diploid seedy varieties as female parents.However， the creation of alotetraploids using cellfusion is relatively difficult.In contrast，exploring autotetraploids from seedlings based on their morphology is relatively straightforward due to the characteristic of nucellar cells in polyembryonic cultivars being prone to natural doubling. Moreover， utilizing autotetraploids as parents to cross with its corresponding diploids in interploidy crosses can generate autotriploids.This approach is expected to produce seedless fruit without altering other traits of the original variety，thereby enhancing its application value.Therefore，in this study，cellengineering techniques including interploidy hybridization and exploring polyploids from seedlings based on their morphology were utilized to produce or explore new polyploid germplasms from Bendizao tangerine for breeding elite resources for the healthy development of Huangyan tangerine.【Methods】For tetraploid exploration， the seeds of Bendizao tangerine were sown inthe pots after peeling off the seed coats and being accelerated germination in a thermostat， then cultivated in a plant growth chamber. After the seedlings grew with three or more leaves，putative polyploids were screened according to the morphological feature of polyploid plants and their ploidy level were further confirmed by flow cytometric analysis.For triploid production， interploidy hybridization and embryo rescue were employed. In this study，an interploidy cross was conducted with Bendizao tangerine as female parent and a sexual allotetraploid hybrid （abbreviated as BDZNS） from the cross between Bendizao tangerine and NS as male parent. The young fruits were collected 9O days after pollination. After extracted from the young fruits，the immature seeds were in vitro cultured in medium germination. When the seedling regenerated，their ploidy level was determined by the flow cytometry and their genetic origin were determined using SSR markers. 【Results】For tetraploid exploration， more than 1500 mature fruits of Bendizao tangerine were collcted， and more than 75oo seeds were obtained. The seeds were sowed in the pots and cultivated in a plant growth chamber for approximately one month， and over 90o0 seedlings were obtained. Based on the morphology trait screening，51 suspected polyploids were screened from the seedlings.23 tetraploids and one triploid were totally obtained through analyzing the ploidy level using flow cytometry. For triploid production，an interploidy cross was conducted with Bendizao tangerine as the female parent and allotetraploid BDZNS as the male parent. Totally 155 flowers were pollinated，and 35 fruits were set. On the 9Oth days after pollination，all young fruits were picked and 105 young ovules were extracted and subjected to in vitro rescue culture. After shooting and rooting induction，78 regenerated plants were obtained，among them eight plants were proved triploids by flow cytometry analysis.The genetic origin of allthe polyploids obtained was carried out with SSR molecular markers.Among the polyploids identified from the sedlings，19 tetraploids exhibited an identical band pattern to that of Bendizao tangerine，suggesting that they might originate from the natural doubling of nucellar cells in Bendizao tangerine.The remaining four tetraploids and one triploid exhibited an additional band that was not present in Bendizao tangerine， indicating that they were likely sexual hybrids of Bendizao tangerine with other citrus Varieties.The eight triploids produced by interploidy hybridization contained both female-specific and male-specific bands，indicating that they were sexual offspring resulting from contributions of both parents.【Conclusion】 The novel polyploid germplasms developed in this study would provide a valuable material foundation for the seedless breeding of Bendizao tangerine and for enhancing the fruit quality of Huangyan Miju. Key Words： Citrus; Bendizao tangerine; Polyploid; Seedless breeding; SSR marker

本地早橘（CitrussuccosaHort.exTanaka），原產浙江黃巖，是“黃巖蜜橘\"區域品牌的代表品種，味甜酸少，有香氣，是鮮食和制罐兼優品種[1]。20世紀80年代，本地早橘在黃巖地區進入發展鼎盛時期，當前柑橘園中的橘樹多為當時所種。然而，長期無性繁殖導致本地早橘種性衰退，產量與品質明顯下降；同時由于本地早橘果實有核和近幾十年國外無核寬皮柑橘的大量引進，本地早橘生產受到市場沖擊，導致其在黃巖乃至浙江地區種植面積和產量銳減，甚至面臨市場淘汰的困境，“黃巖蜜橘”品牌效益也受到很大沖擊。因此，對本地早橘進行品質提升，創制具有應用潛力的無核新種質，是解決黃巖本地早橘果實有核和品質退化等產業問題和提升“黃巖蜜橘”品牌價值的有效策略。

二倍體與四倍體倍性雜交創制三倍體是轉移有益農藝性狀和培育無核柑橘新品種的有效途徑，對豐富柑橘資源和進行無核品種改良具有重要意義。特別是以異源四倍體為親本與二倍體倍性雜交創制的三倍體有望在無核的基礎上，實現3個親本優良性狀聚合，遺傳變異將更加豐富，更易培育出果實無核且性狀優良的柑橘新品種4。華中農業大學前期通過細胞融合技術創制了大批柑橘異源四倍體，并以其為父本與中國一些地方特色有核品種為母本進行倍性雜交，創制獲得了3500余株三倍體后代[5-。但利用細胞融合技術創制異源四倍體技術難度較高，與之相比，基于多胚品種珠心細胞易自然加倍的特點發掘雙二倍體（同源四倍體）相對容易，且以雙二倍體為親本與其對應二倍體有性雜交創制同源三倍體，有望在不改變原有品種其他性狀條件下，實現果實無核，更具應用價值。若能發掘本地早橘雙二倍體資源，通過開展本地早橘二倍體與其雙二倍體間的倍性雜交創制同源三倍體，有望在維持原有品種性狀的基礎上，培育獲得果實無核的本地早橘新品種。基于此，筆者在本研究中擬以本地早橘為材料，通過實生播種、倍性雜交等手段，發掘和創制本地早四倍體和三倍體新種質，為本地早橘無核化品種選育及“黃巖蜜橘”品牌振興提供核心種質資源。

1材料和方法

1.1試驗材料

以本地早橘（CitrussuccosaHort.exTanaka）為材料開展四倍體資源發掘和倍性雜交創制三倍體工作。用于實生播種的本地早橘成熟種子采自浙江黃巖蜜橘種源研究中心自然授粉的果實。以本地早橘為母本，異源四倍體BDZNS[本地早橘（C.succosaHort.exTanaka）與異源四倍體體細胞雜種NS（C.re-ticulata ×C paradise +C. sinensis）倍性雜交獲得[]為父本進行倍性雜交，授粉地點為黃巖蜜橘種源研究中心，異源四倍體BDZNS的花粉采自華中農業大學柑橘種質資源圃。

1.2種子催芽及實生播種

本地早橘種子實生播種及多倍體發掘參考周銳等的方法。將種子從果實中剝出后，用 1mol?L^-1 NaOH溶液消毒后去掉外種皮，并置于 28^°C 暗培養箱中催芽2＼～3d，胚根露白后將其播種于營養缽，待幼苗長至2＼～3枚真葉時，利用“觀根辨葉看油胞”發掘多倍體的技術，篩選疑似四倍體植株并用流式細胞儀對其進行倍性鑒定。

1.3花粉制備與人工授粉

四倍體花粉制備參考解凱東等的方法，花粉制備好后暫置于 4^°C 冰箱保存備用。本地早橘盛花期前期，選擇晴朗無風的天氣進行授粉，優先選擇生長健壯且花量大的枝條，授粉時去除枝條上已經開放的花和小花蕾，選擇即將開放的花蕾進行人工去雄后授粉，授粉后套袋避免其他品種花粉干擾。授粉后1周進行保果處理（噴施 3% 赤霉酸2000倍液 +0.01% 蕓臺素內酯3000倍液 +KH₂PO₄1000 倍液）。

1.4幼胚離體挽救培養

于授粉后 90d ，采集授粉后的幼果用于幼胚離體挽救培養，具體參考Xie等[的方法。無菌條件下，用 75% 乙醇浸泡授粉的幼果 15min 后置于酒精燈上燃燒消毒；消毒完畢后剝取幼嫩胚珠并離體培養；幼胚萌發后，分別將其繼代至生芽培養基增殖生芽，長出2＼～3枚真葉后，將萌發的莖段切下轉移至生根培養基誘導生根。待植株生根后，用流式細胞儀對再生植株進行倍性鑒定篩選多倍體；最后對篩選出的多倍體幼苗進行煉苗并移栽至溫室保存。

1.5 植株倍性鑒定

用流式細胞儀（Cyflowspace，Sysmex，Japan）對實生發掘的疑似多倍體和幼胚離體挽救培養再生植株進行倍性分析，詳細過程參照解凱東等的方法，待測樣品的倍性分析圖由流式細胞儀自帶的FloMax軟件自動生成。根尖染色體計數參照謝善鵬等的方法，將 1mm 初生根尖在 20^°C 飽和對二氯苯溶液中水浴 3h 后，在 0.075mol?L^-1KCl 溶液中室溫處理 30min ，用新制卡諾固定液（乙醇：乙酸 ：=3：1 ，體積比）常溫固定 24h ，置于 70% 乙醇溶液 4^°C 保存備用。用 2% 纖維素酶 +20% 果膠酶（1：1）酶液

37^°C 水浴 90min 酶解根尖后制片觀察。

1.6 SSR分子標記鑒定

基因組DNA提取參考Cheng等的方法。用基于毛細管電泳（QIAxcel Advanced，Germany）的SSR分子標記對實生發掘的四倍體和倍性雜交創制的三倍體進行遺傳鑒定，詳細方法參考謝善鵬等[]的報道。SSR引物篩選標準：用于實生發掘四倍體后代遺傳鑒定的SSR引物需在本地早橘中能擴增出2條帶；用于倍性雜交后代遺傳鑒定的SSR引物需滿足父母間具有多態性且父本要有特異條帶。依據該標準，從前人發表的SSR引物[12-15]中篩選獲得5對多態性SSR引物（表1）對獲得的多倍體材料進行遺傳鑒定，所有引物由上海生物工程股份有限公司合成。

2 結果與分析

2.1基于實生播種和形態初選發掘本地早橘四倍 體23株

果實成熟期，采集本地早橘果實1500個，剝取獲得成熟種子7500余粒，催芽播種后獲得實生幼苗9000余株（圖1-A＼～B）。將其移入溫室后（圖1-C），根據多倍體具有植株矮化、葉片顏色變深和葉形指數變小等形態特點，從9000余株實生幼苗中篩選獲得51株疑似多倍體，利用流式細胞儀和根尖染色體計數對其倍性進行檢測，獲得23株四倍體和1株三倍體植株（圖1-D＼～J，多倍體形態初篩準確率為47.06% ，本地早橘多倍體自然發生率約 0.27% 。

2.2以本地早橘為母本倍性雜交創制三倍體8株

以本地早為母本、異源四倍體BDZNS為父本進行倍性雜交，授粉155朵花，坐果35個，坐果率22.58% ；于授粉后90d采集所有授粉果實（圖2-A），無菌條件下從中剝取幼嫩胚珠105粒（圖2-B），平均單果種子數3粒；對所有幼嫩胚珠進行幼胚離體培養（圖2-C＼～D）后獲得再生植株78株（圖2-E）；用流式細胞儀對所有再生植株進行倍性檢測，從78株再生植株中篩選獲得三倍體8株（圖2-F＼～G），多倍體發生率 10.26% ；其中5株三倍體可以直接生根，通過煉苗移栽（圖2-H）將其移入溫室；剩余3株難以生根，通過試管嫁接將其擴繁并移入溫室（圖2-I）。

2.3基于SSR分子標記的本地早橘三倍體和四倍體新種質遺傳鑒定

篩選獲得的5對多態性SSR引物中，3對mCrCIR05A05、mCrCI03D12a、Csin0342用于倍性雜交獲得的三倍體遺傳分析（圖3-A），3對mCrCI03D12a、TAA1、Ci02F07用于實生發掘獲得的多倍體遺傳分析（圖3-B）。由圖3可知，倍性雜交獲得的8株三倍體在3個SSR位點處均含有父本特異條帶，表明其均為雙親的有性后代。而本地早橘實生播種獲得23株四倍體后代中，19株四倍體后代在3個SSR位點處的帶型與本地早橘完全一致，推測這些四倍體為本地早橘珠心細胞自然加倍形成；而其余4個四倍體后代和1株三倍體后代至少在2個

A.本地早橘種子催芽播種;B.本地早橘實生幼苗;C.實生幼苗移入溫室后生長情況;D.不同倍性本地早橘植株株形對比（左：2x，中：3x，右： 4x） ;E-G.用流式細胞儀對疑似多倍體進行倍性鑒定（E：二倍體，熒光強度約為50;F：三倍體，熒光強度約為75;G：四倍體，熒光強度約為 100）;H＼～J.根尖染色體計數（H：二倍體， 三倍體， 2n=3x=27;J ：四倍體， 2n=4x=36） ，標尺 =2μm 。SSR位點處的帶型與本地早橘不一致，均含有異源條帶（圖3-B，第9、14、19、22號單株），推測其為本地早橘與周邊其他品種天然有性雜交形成。

3討論

針對黃巖地方特色品種本地早橘存在的果實有核、品質下降等問題，筆者在本研究中通過實生播種、倍性雜交結合幼胚離體挽救培養等技術，發掘或創制獲得具有本地早橘血統的四倍體新種質24株和三倍體新種質9株，為本地早橘無核新品種培育和重振“黃巖蜜橘”品牌提供了寶貴的種質資源。

三倍體果實一般無核，在鮮食市場具有較高的消費需求，且三倍體果實一般較二倍體更大，營養更豐富[，這些特點決定了三倍體在柑橘高品質鮮果市場具有較大的發展潛力，符合當前市場對鮮食柑橘的消費需求。前人通過分析不同三倍體有性群體果實糖酸含量，發現三倍體后代糖酸含量受四倍體父本影響較大[17-I8]，在本研究中，倍性雜交所用父本BDZNS遺傳物質1/2來自本地早橘，以其為父本倍性雜交創制的三倍體后代能夠在保證果實完全無核的基礎上，較大限度地保留本地早橘原有性狀，達到無核化與品質傳承雙重目標，進而實現本地早橘品種的提純復壯。此外，三倍體對低溫和干旱等非生物逆境脅迫[的耐受能力較強，利用倍性雜交策略創制的本地早橘三倍體資源可能在應對非生物脅迫方面表現優異。

柑橘四倍體植株與二倍體相比，通常表現植株矮、氣孔密度小、初生代謝物積累多等特點。在本研究中，通過實生發掘獲得的本地早橘四倍體植株株型較小、結構緊湊，利于密植栽培，未來有望能減少管理成本，為“黃巖蜜橘\"的輕簡化栽培提供了新方向。此外，本地早橘雙二倍體還可作為核心種源進一步與其二倍體親本進行倍性雜交，創制能最大限度保留本地早橘原有性狀的同源三倍體無核新種質，形成“四倍體-三倍體\"協同育種體系，為本地早橘品種品質提升和無核化改良奠定重要的種質基礎。

通過對實生發掘獲得的23株四倍體和1株三倍體進行多位點SSR遺傳鑒定，發現19株四倍體在所有位點的帶型與二倍體完全一致，推斷其可能為本地早橘珠心細胞自然加倍形成的同源四倍體4。發掘獲得的1株三倍體在TAA1位點由于存在異源特異條帶，且在該位點擴增的3條帶中，2條來自本地早橘，推斷該三倍體為本地早橘產生的 2n 雌配子與外來 n 雄配子受精產生，這也與目前柑橘中報道的天然三倍體多為 2n 雌配子受精形成的結論相符[19-21]。此外，發現有4株四倍體的帶型與本地早橘二倍體帶型不一致，根據其SSR帶型特點推斷其可能有如下來源：1）本地早橘形成的 2n 雌配子與附近四倍體形成的二倍體雄配子受精形成。但用流式細胞儀對本地早橘母本樹附近的柑橘植株進行了倍性分析，未發現四倍體植株，因此可排除該可能。2）本地早橘與周邊二倍體有性雜交的合子胚再自然加倍形成。通過該途徑形成的四倍體擴增條帶應該不超過2條，第9和22號四倍體單株在3個SSR位點處的條帶數均不超過2條，因此推斷這2株四倍體為本地早橘與其他二倍體品種有性雜交后再自然加倍形成。3）本地早橘形成的 2n 雌配子與周邊品種形成的 2n 雄配子受精形成。減數分裂異常產生的 2n 配子既可以純合也可雜合，通過該途徑產生的四倍體在不同位點的條帶數一般介于1＼～4條之間，根據第14和19號四倍體單株的SSR帶型，推斷其為本地早橘形成的 2n 雌配子與其他二倍體品種產生的 2n 雄配子受精形成。

4結論

筆者在本研究中針對黃巖本地早橘果實有核和品質下降等產業問題，利用實生播種發掘多倍體和倍性雜交創制三倍體的細胞工程育種技術，成功發掘或創制獲得了一批極具應用和育種價值的本地早橘多倍體新種質，為本地早橘品種提純復壯、無核化改良和“黃巖蜜橘”品牌重振奠定了寶貴的材料基礎。

參考文獻References：

[1] 鄧秀新.中國柑橘品種[M].2版.北京：中國農業出版社， 2023：15. DENG Xiuxin. Citrus varieties in China[M].2nd ed.Beijing： ChinaAgriculture Press，2023：15.

[2] 解凱東，彭珺，袁東亞，強瑞瑞，謝善鵬，周銳，夏強明，伍小萌， 柯甫志，劉高平，GROSSERJW，郭文武.以本地早橘和幔橘 為母本倍性雜交創制柑橘三倍體[J].中國農業科學，2020，53 （23）：4961-4968. XIEKaidong，PENGJun，YUANDongya，QIANGRuirui，XIE Shanpeng，ZHOU Rui，XIA Qiangming，WU Xiaomeng，KE Fuzhi，LIU Gaoping，GROSSER JW，GUO Wenwu. Production of citrus triploids based on interploidy crossing with Bendizao andMan tangerinesas female parents[J].ScientiaAgricultura Sinica，2020，53（23）：4961-4968.

[3] 陳昊，謝善鵬，解凱東，肖公傲，周銳，伍小萌，吳群，鄧家銳，敖 義俊，劉高平，郭文武.柑橘13個多胚品種同源四倍體高效 發掘與分子鑒定[J].果樹學報，2023，40（11）：2297-2306. CHEN Hao，XIE Shanpeng，XIE Kaidong，XIAO Gongao， ZHOU Rui，WU Xiaomeng，WU Qun，DENG Jiarui，AO Yijun， LIU Gaoping，GUO Wenwu. Efficient exploration and SSR identification of autotetraploids from the seedlingsof thirteen apomictic citrus genotypes[J]. Journal of Fruit Science，2023，40 （11）： 2297-2306.

[4] 謝善鵬.柑橘11個地方品種資源四倍體高效發掘及三倍體新 種質創制[D].武漢：華中農業大學，2022. XIE Shanpeng.Efficient exploration of tetraploid seedlings from 11 local citrus cultivars and production of triploid plants[D]. Wuhan：Huazhong Agricultural University，2022.

[5] 郭文武，葉俊麗，鄧秀新.新中國果樹科學研究70年：柑橘[J]. 果樹學報，2019，36（10）：1264-1272. GUO Wenwu，YE Junli，DENG Xiuxin.Fruit scientific research in new China in the past70 years：Citrus[J].Journal of Fruit Science，2019，36（10）：1264-1272.

[6] 張成磊，師小舒，陳昊，謝善鵬，盧鑫，伍小萌，劉高平，郭文武， 解凱東.浙江地方特色品種溫嶺高橙無核潛力新種質創制及 分子鑒定[J].果樹學報，2024，41（4）：590-597. ZHANG Chenglei， SHI Xiaoshu， CHEN Hao， XIE Shanpeng， LU Xin，WU Xiaomeng，LIU Gaoping，GUO Wenwu，XIE Kaidong.Production and molecular identification of potentially seedless germplasms derived from Wenling-Gaocheng，a citrus local cultivar in Zhejiang province[J].Journal of Fruit Science， 2024，41（4）：590-597.

[7] 謝善鵬，解凱東，夏強明，周銳，張成磊，鄭浩，伍小萌，郭文武， 柑橘6個地方品種資源四倍體高效發掘及分子鑒定[J].果樹 學報，2022，39（1）：1-9. XIE Shanpeng，XIE Kaidong，XIA Qiangming，ZHOU Rui， ZHANG Chenglei，ZHENG Hao，WU Xiaomeng，GUO Wenwu. Efficient exploration and SSR identification of 53 doubled diploid seedlings from six local citrus cultivars and germplasm resources[J]. Journal ofFruit Science，2022，39（1）：1-9.

[8] GROSSER JW，GMITTERFG.Protoplast fusion for production of tetraploids and triploids：Applications for scion and rootstock breeding in citrus[J]. Plant Cell，Tissue and Organ Culture （PCTOC），2011，104（3）：343-357.

[9] 周銳，解凱東，王偉，彭珺，謝善鵬，胡益波，伍小萌，郭文武．依 據多倍體形態特征快速高效發掘柑橘四倍體[J].園藝學報， 2020，47（12）：2451-2458. ZHOU Rui，XIE Kaidong，WANG Wei，PENG Jun，XIE Shanpeng，HU Yibo，WU Xiaomeng，GUO Wenwu.Eficient identification of tetraploid plants from seedling populations of apomictic citrus genotypes based on morphological characteristics[J]. Acta Horticulturae Sinica，2020，47（12）：2451-2458.

[10]XIEKD，YUANDY，WANGW，XIAQM，WUXM，CHEN C W，CHEN CL，GROSSER JW，GUO W W. Citrus triploid recovery based on 2x×4x crosses via an optimized embryo rescue approach[J]. Scientia Horticulturae，2019，252：104-109.

[11]CHENGYJ，GUO WW，YIHL，PANG X M，DENG XX.An efficient protocol for genomic DNA extraction from citrus species[J].Plant Molecular Biology Reporter，2003，21（2）：177-178.

[12]CUENCAJ，FROELICHERY，ALEZAP，JUAREZJ，NAVARROL，OLLITRAULTP.Multilocushalf-tetrad analysisand centromere mapping in citrus： Evidence of SDR mechanism for 2n megagametophyte production and partial chiasma interference inmandarincv.‘Fortune'[J].Heredity，2011，107（5）：462-470.

[13]XUQ，CHENLL，RUANXA，CHENDJ，ZHUAD，CHENC L，BERTRANDD，JIAOWB，HAOBH，LYONMP，CHENJ J，GAOS，XINGF，LANH，CHANGJW，GEXH，LEIY，HU Q，MIAOY，WANGL，XIAO SX，BISWASMK，ZENGWF， GUOF，CAO HB，YANG X M，XUX W，CHENGY J，XUJ， LIUJH，LUOOJ，TANGZH，GUOWW，KUANGHH， ZHANGHY，ROOSEML，NAGARAJANN，DENGXX，RUANYJ. The draft genome of sweet orange （Citrus sinensis）[J]. Nature Genetics，2012，45（1）：59-66.

[14]KIJAS JMH，THOMAS M R，FOWLER JC S，ROOSE ML. Integration of trinucleotide microsatelites into a linkage map of Citrus[J]. Theoretical and Applied Genetics，1997，94（5）： 701- 706.

[15]FROELICHER Y，DAMBIER D，BASSENE JB，COSTANTINO G，LOTFY S，DIDOUTC，BEAUMONTV，BROTTIER P， RISTERUCCI A M，LURO F， OLLITRAULT P. Characterizationof microsatellitemarkersinmandarin orange （Citrusreticulata Blanco）[J]. Molecular Ecology Resources，2008，8（1）： 119- 122.

[16]SDIRI S，CUENCAJ，NAVARRO P，SALVADOR A，BERMEJOA.New triploids late-maturing mandarins asa rich source of antioxidant compounds[J]. European Food Research and Technology，2020，246（1）：225-237.

[17]王婷婷，周陽廣，朱虹嫻，張苗，段耀園，曹惠祥，管書萍，解凱 東，伍小萌，龍春瑞，高俊燕，郭文武.2個柑橘三倍體有性群 體果實糖酸性狀遺傳評價[J].果樹學報，2022，39（7）：1147- 1156. WANG Tingting，ZHOU Yangguang，ZHU Hongxian，ZHANG Miao，DUAN Yaoyuan，CAO Huixiang，GUAN Shuping，XIE Kaidong，WUXiaomeng，LONGChunrui，GAOJunyan，GUO Wenwu.Inheritance of sugarand acid contents inthe fruitsof triploid hybrids originated from two 2x×4x crosses with Nadorcott tangor as a female parent[J]. Journal ofFruit Science，2022， 39（7）：1147-1156.

[18] 管書萍，王婷婷，周陽廣，朱虹嫻，伍小萌，龍春瑞，高俊燕，郭 文武，解凱東.柑橘2個三倍體有性后代群體果實品質性狀 的遺傳特點[J].果樹學報，2024，41（3）：369-378. GUAN Shuping，WANG Tingting，ZHOU Yangguang，ZHU Hongxian，WU Xiaomeng，LONG Chunrui，GAO Junyan，GUO Wenwu，XIE Kaidong.Inheritance of some quality traits of the fruits in triploid hybrids derived from two citrus 2x×4x interploidy crosses[J].Journal of Fruit Science，2024，41（3）：369-378.

[19]ALEZAP，FROELICHER Y，SCHWARZ S，AGUSTI M， HERNANDEZ M，JUAREZJ，LURO F，MORILLONR，NAVARROL，OLLITRAULTP.Tetraploidizationeventsbychromosome doubling of nucellar cells are frequent in apomictic citrus and are dependent on genotype and environment[J].Annals of Botany，2011，108（1）：37-50.

[20]解凱東，王曉培，王惠芹，梁武軍，謝宗周，郭大勇，伊華林，鄧 秀新，GROSSERJW，郭文武.以柑橘多胚性二倍體母本倍性 雜交培育三倍體[J].園藝學報，2014，41（4）：613-620. XIE Kaidong，WANG Xiaopei，WANG Huiqin，LIANG Wujun， XIE Zongzhou，GUO Dayong，YI Hualin，DENG Xiuxin， GROSSER JW，GUO Wenwu. High effcient and extensive production of triploid citrus plantsbycrossingpolyembryonic diploidswith tetraploids[J].Acta Horticulturae Sinica，2014，41（4）： 613-620.

[21]馮意斯，田嘯宇，楊崇山，陳香玲，鄧秀新，解凱東，郭文武，謝 宗周，柴利軍，葉俊麗.沃柑實生后代三倍體發掘及遺傳鑒 定[J].園藝學報，2024，51（10）：2231-2242. FENG Yisi，TIAN Xiaoyu，YANG Chongshan，CHEN Xiangling， DENG Xiuxin，XIE Kaidong，GUO Wenwu，XIE Zongzhou， CHAI Lijun，YE Junli. Exploitation and genetic identification of triploid plants from seedling populations of orah mandarin （Citrusreticulata）[J].Acta Horticulturae Sinica，2024，51（10）：2231- 2242.