聚乙二醇干擾素 ∝ 治療非活動性 HBsAg 攜帶者血清腫瘤壞死因子 α 水平的變化趨勢及其與HBsAg清除的關系

Abstract： ObjectiveTo observe the changes in the serum level of tumor necrosis factor- α （TNF- α ） during pegylated interferon alpha（PEG-IFN- α ）treatment in inactive HBsAg carriers （IHCs），to investigate the association between the dynamic changes of TNF- α and HBsAg clearance，and to assess the value of TNF- α as a potential biomarker for predicting the therapeutic efficacy ol

PEG-IFN- α .MethodsA prospective study was conducted among 455 IHCs who attended our hospital from January 2018 to March 2023，andtheywere dividedinto treatment groupandIHCcontrolgroup.The210IHCsinthetreatment group voluntarily received PEG-IFNα-2btreatmentfor48weeks，followed byfollow-upfor24 wees，and the245 IHCsin theIHCcontrol group were followedupfor72weekswithout treatment.The serumlevel ofTNF- α wasmeasured atbaseline（week O）and atweeks12， 24，48，and72，and atweek 72，the treatment group was furtherdividedinto HBsAgclearance groupand non-clearance group. The serum level of TNF- α at different time points was compared between groups.The logistic regression analysis was used to assess the value of TNF- α in predicting HBsAg clearance.The t -test was used for comparison of normallydistributed continuous data betwen twogroups，and aone-wayanalysis of variance usedfor comparison between multiple groups；the repeated measures analysisof variance wasusedforcomparisonof normallydistributedrepeated measurementdata withineach groupandbetwen groups；thechi-square testortheFisher’sexacttestwasusedforcomparisonofcategoricaldatabetweengroups.Univariateand multivariatelogisticregressionanalyses wereused toinvestigatethepredictivefactorsfor HBsAgclearance，andthereceiver operating characteristic（ROC）curve was used to determine the cut-off value of TNF- α in predicting HBsAg clearance. ResultsAt wek72，compared withthe IHCcontrolgroup，thetreatment group had significantlyhigher HBsAg clearance rate （ 46.2% vs 1.2% ， χ² =133.333， P lt;0.001）and seroconversion rate（34.8% us 0.8% ， χ² =9 4.650，P? lt;0.001）.TheHBsAgclearance group and the non-clearance group had a significant increase in the serum level of TNF- α during treatment，which gradually returned to the baseline level after drug withdrawal （ F=351.733 and 76.434，both Plt;0.001 ）. Comparisons between groups showed that the HBsAg clearance group had the highest serum level of TNF- α at weeks 12，24，and 48，followed by the non-clearance group and the IHC control group （all Plt;0.001 ）. The multivariate logistic regression analysis showed that baseline HBsAg level （oddsratio [OR]=0.329 ，95 % confidence interval ， P lt;0.001），baseline HBV DNA lt;2O IU/mL（OR=1.414， 95%CI ： 1.057—1.787， P =0.045），ALT≥2Xupper limit of normal at week 12（ OR 1.127，95%CI; 1.028—1.722， P =0.043），TNF- α （2 level at week 12 ，and TNF- α level at week 24 （0R=1.879，95%CI：1.477—2.391，Plt; 0.001）were independent predictive factors for HBsAg clearance.The ROC analysis showed that TNF- α level at week 12 had an area underthe ROC curve（AUC）of 0.846（95%CI：0.814—0.889）in predicting HBsAg clearance at week 72，with asensitivity of 76.3% （20 and a specificity of 81.0% ，while TNF- α level at week 24 had an AUC of 0.912（95%CI： 0.758—0.972），with a sensitivity of 81.4% （20 and a specificity of 96.2% .Conclusion PEG-IFN α can increase the serum level of TNF α in IHCs，and the serum level of TNF- α at weeks 12 and 24 can effectively predict HBsAg clearance induced by PEG-IFN- α

KeyWords： Interferon-alpha；Hepatitis B Surface Antigens；Tumor Necrosis Factor-alpha

Research funding：Youth Program of the Shanxi Provincial Natural Science BasicResearch Program（2O24JC-YBQN-0928）; FundoftheSecondAffiaedHospitalofXi'anJiaotongUniversity（YJ（QN）2023O9）；IITClinicalResearchFundoftheSecond Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong University（M094）

我國非活動性乙型肝炎表面抗原（ ?HBsAg） 攜帶者（inactiveHBsAgcarrier，IHC）在慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者中占比約為 36.08%^[1] ，推算IHC人群規模約為3096萬人。盡管IHC的疾病進展相對緩慢，但仍有部分患者面臨病毒再激活、肝功能惡化，進展為肝硬化或肝癌的風險[2]。聚乙二醇干擾素 ∝（PEG–IFN–α） 作為一種廣泛應用的免疫調節治療手段，其療效個體差異顯著[3-6]，迫切需要尋找可靠的療效預測生物標志物以優化治療決策。腫瘤壞死因子 ααα（TNF-αα） 作為一種重要的促炎細胞因子，參與機體免疫反應和炎癥過程，在HBV感染相關的免疫病理損傷及清除過程中發揮關鍵作用[7]。因此，本研究旨在探討PEG-IFN- σ?α?α?α?α 治療IHC過程中血清TNF- α?α∝ 水平的變化趨勢及其作為HBsAg清除預測指標的潛力，以期為臨床治療提供科學依據及新型預測工具，以提高HBsAg清除率并推動個體化治療策略的應用。

1資料與方法

1.1一般資料本研究納入2018年1月—2023年3月本院診治的IHC，所有患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》中IHC診斷標準[8]。納入標準包括年齡18～65歲、HBsAg陽性超過6個月 ??HBeAg 陰性、HBVDNA lt; 2.0×10³IU/mL 、ALT和AST水平正常、未接受過抗病毒治療、FibroScan值 lt;12.4kPa 、上腹部影像顯示無肝硬化。排除標準包括合并其他嗜肝病毒或HIV感染、嚴重系統性疾病、精神病史、酗酒或吸毒史、失代償期肝硬化、惡性腫瘤、妊娠、哺乳期及對干擾素過敏者。同時納入HBsAg陰性、抗-HBs陽性的健康人群作為健康對照組。

1.2研究方法入組的IHC根據其治療意愿分為治療組和IHC對照組。治療組接受PEG-IFNα-2b（派格賓，廈門特寶生物工程股份有限公司生產； 180μg/ 次，皮下注射，1次/周）治療，預期療程為48周，治療結束后隨訪24周。IHC對照組僅定期隨訪觀察72周。在0、12、24、48和72周時檢測血常規、肝功能、HBV標志物、HBVDNA及血清TNF- σ?α?α?α?α 水平。健康對照組僅在基線檢測血清TNF- σ?αα 水平。治療組患者于72周時進一步分為HBsAg清除組與未清除組。比較各組不同時間點TNF- σ?α∝ 水平，并分析血清TNF- σ?α?α?α?α 水平與HBsAg清除的關系。

1.3檢測方法血清HBVDNA檢測采用羅氏COBASAmpliPrep/TaqMan48系統及配套試劑（檢測下限為20IU/mL ；HBV標志物檢測使用雅培Architecti2000化學發光免疫分析儀及試劑（HBsAg檢測下限為 0.05IU/mL ）；肝功能檢測使用科華生物奧林巴斯AU2700生化儀；肝硬度測定由EchosensFibroScan502完成（單位kPa）。血清TNF- ∝ 的檢測由本院檢驗科完成（西門子公司生產的IMMULITE1000化學發光免疫分析儀）。HBsAg清除定義為血清 HBsAglt;0.05ΠU/mL 伴或不伴抗 ?HBs≥10mIU/mL ，且HBVDN VAlt;20IU/mL ;HBsAg血清學轉換定義為血清HBsAglt;0.05IU/mL 伴抗- ?HBs≥10mIU/mL ，且HBVDNAlt;20IU/mL 。

1.4統計學方法鑒于PEG-IFN- ∝ 相關副作用是導致本研究患者終止治療、脫落的最主要原因，因此本研究采用意向性分析（intention-to-treat，ITT）以提高臨床實際意義。對于脫落患者，根據ITT原則，治療結局定義為HBsAg未清除，缺失數據使用期望最大化法進行插補。計數資料組間比較采用 χ² 檢驗或Fisher確切概率法。符合正態分布的計量資料以 表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用Bonferroni檢驗；正態分布的重復測量數據的組間及組內比較采用重復測量數據的方差分析。使用單因素和多因素Logistic回歸分析HBsAg清除的預測因素，使用受試者操作特征曲線（ROC曲線）確定TNF- σ?α∝ 預測HBsAg清除的cut-off值。統計分析使用SPSS25.0軟件，制圖使用GraphPad Prism和Rstudio軟件。 Plt;0.05 為差異具有統計學意義。

2結果

2.1基線資料本研究納入455例IHC，男299例，女156例；年齡18～65歲，平均 37.0±10.4） 歲。其中治療組210例，IHC對照組245例。治療組有16例患者脫落，對照組有21例患者脫落。同時納入健康對照組47例，男30例，女17例，年齡19～60歲，平均 （37.5±9.8） 歲。根據ITT分析，72周時治療組中97例患者實現HBsAg清除（HBsAg清除組），113例未清除（HBsAg未清除組）。HBsAg 清除組的FibroScan值、基線 HBsAg 水平及基線HBVDNA陽性患者比例顯著低于未清除組和IHC對照組 P 值均 lt;0.05 （表1）。

2.2HBsAg清除率及血清學轉換率分析48周時，治療組的HBsAg清除率為 41.0%（86/210） ，血清學轉換率為28.6%（60/210） ，顯著高于IHC對照組的 0.8%（2/245） 和0.4% （1/245），差異均具有統計學意義 （χ² 值分別為116.766，77.257，P 值均 lt;0.001 ）。72周時，治療組的HBsAg清除率為 46.2% （97/210），血清學轉換率為 34.8% 0 73/ 210），均顯著高于對照組的 1.2%（3/245） 和 0.8%（2/245） ，差異亦均具有統計學意義 ?x² 值分別為133.333、94.650，P 值均 lt;0.001 ）（圖1）。

2.3基線血清TNF- α_?∝ 水平的比較HBsAg清除組、未清除組、IHC對照組和健康對照組的基線血清TNF- α_?α∝ 水平分別為 （6.2±2.4 ） log/mL （ 6.2±2.1 pg/mL、（ 6.2±2.2 pg/mL、（ 6.6±2.1 ） pg/mL ，各組間差異無統計學意義（ F=0.834 P=0.476 （圖2）。

表1HBsAg清除組、未清除組、IHC對照組和健康對照組的基線資料

Table1 Baseline characteristics ofHBsAg clearance，non-clearance，IHC control，and healthycontrol grou

注：與HBsAg清除組比較，1） Plt;0.05，

圖1治療組和IHC對照組的HBsAg清除率及血清學轉換率 比較 Figure1 Comparison ofHBsAgclearance rateand HBsAg seroconversionratebetweenthetreatmentandIHC control groups

圖2HBsAg清除組、未清除組、IHC對照組和健康對照組 基線TNF- α_αα_α 水平比較 Figure2 Comparison ofbaseline TNF- σ?α?α?α levelsbetween theHBsAgclearance，non-clearance，IHC control， and healthycontrol groups

2.4不同時間點血清TNF- ∝ 水平的動態變化將HBsAg清除組、未清除組和IHC對照組在不同時間點的血清TNF- σ?α?α?α?α 水平進行縱向分析。結果顯示，IHC對照組血清TNF- α 水平無顯著變化 （F=1.486，P=0.206 ；而HBsAg清除組和未清除組在治療期間血清TNF- α_?∝ 水平顯著升高，停藥后逐漸恢復至基線水平（ F 值分別為351.733、76.434，P 值均 lt;0.001 ）。組間比較顯示，12、24和48周時，血清TNF- σ?α?α?α?α 水平呈現HBsAg清除組 gt; 未清除組gt;IHC對照組的趨勢（ P 值均 lt;0.001 ）（表2）。

2.5治療早期血清TNF- α_?∝ 水平對72周時PEG-IFN- ∝ 誘導的HBsAg清除的預測作用通過單因素和多因素Logistic回歸分析評估治療早期（0、12、24周）血清TNF- α_?α∝ 水平對72周時 HBsAg 清除的預測價值。結果顯示，基線HBsAg水平 （log₁₀Π/mL 0 OR=0.329，95%CI;0.189～0.571 Plt;0.001 ）、基線HBVDNA lt;20 IU/mL （ OR=1.414 ， 95%CI ：1.057～1.787 P=0.045 ）、12周時 ALT?2 倍正常值上限（ULN） ?（OR=1.127，95%CI：1.028～1.722，P=0.043） 、12周時TNF- ∝ 水平 （OR=1.336，95%CI：1.018～1.754，P=0.037） 和24周時TNF- ∝ 水平 （OR=1.879，95%CI：1.477～2.391，Plt; 0.001）是HBsAg清除的獨立預測因素（表3）。

2.6血清TNF- α?α∝ 預測72周時PEG-IFN- ∝ 誘導的HBsAg清除的效能評價通過繪制12周和24周時血清TNF- σ?α∝ 的ROC曲線，評估其預測72周時 HBsAg 清除的效能（圖3）。12周和24周時，血清TNF- σ?α∝ 在區分72周HBsAg清除與未清除患者方面均表現出顯著診斷效能[12周：ROC曲線下面積（AUC） =0.846 ， 95%CI ：0.814～0.889;24周： AUC=0.912，95%CI：0.758～0.972] （表4）。

表2HBsAg清除組、未清除組及IHC對照組血清TNF- σ?α?α?α 水平隨時間的動態變化 mioohonaocincommTNE lovolcinthnHRcAaolooronon nonlaoronnnondI

注：組間比較：與 HBsAg 清除組比較，1） Plt;0.001 ；與 HBsAg 未清除組比較，2） Plt;0.001 。組內比較：與0周比較，a Plt;0.001 ;與12周比較，b，Plt;0.001；與24周比較， _{c，Plt;0.001} ；與48周比較，d ，Plt;0.001 。

σ?αα?αα at week 7

表4血清TNF- σ?α?α 預測72周時PEG-IFN- α_αα_α 誘導的HBsAg清除的ROC曲線分析

表3早期預測72周時PEG-IFN- α_α^′αα_α 誘導的HBsAg清除的因素分析 'able 3Factors analysis for earlypredictionof HBsAg clearance induced byPEG-IFN

┌able4ROCanalysisofserumTNF- α_αα_αα_βα_α forpredictingHBsAgclearance inducedbyPEG-IFN- σ?αα?αα atweek72

圖3血清TNF- σ?α?α?α?α 預測72周時PEG-IFN σ?α?α 誘導的HBsAg 清除的ROC曲線 Figure3ROC curve of serum TNF α_αα_αα_βα_αα_βα_βα_βα_βα_βα_βα_βα_βα_βα_βα_β for predicting HBsAg clearance inducedbyPEG-IFN- σ?α?α?α atweek72

3討論

近年來，追求IHC功能性治愈的探索成為目前慢性HBV感染研究的熱點。本研究前瞻性納入210例接受PEG-IFN- ∝ 單藥治療的IHC，并與245例未接受治療的IHC進行比較。結果顯示，治療組HBsAg清除率顯著提高（達 46.2% ），且治療安全性良好，進一步驗證了筆者前期的研究結論[4]，并與近期相關研究結果一致[9-1]。通過擴大樣本量，本研究鞏固了證據，表明PEG-IFN- ∝ 在實現IHC功能性治愈方面具有重要應用價值。

本研究首先探討了慢性HBV感染對IHC血清TNF- σ?α∝ 水平的影響。結果顯示，IHC組的血清TNF- σ?α∝ 水平與健康對照組相比，差異無統計學意義。這一結果雖與既往針對慢性乙型肝炎患者的研究結論有所不同[12]，但提示未經治療的IHC其體內炎癥狀態與健康人群相似。這可能與IHC較低的HBsAg和HBVDNA水平對免疫系統刺激較弱有關[13]

本研究進一步探討了PEG-IFN- σ?α?α 治療IHC過程中血清TNF- α_?∝ 水平的變化趨勢及其預測 HBsAg 清除的價值。結果顯示，在治療的前24周內， HBsAg 清除組的TNF- σ?α?α?α?α 水平在第12周和24周顯著高于其他組，隨后逐漸下降，并在治療結束后接近基線水平。未清除組亦呈現類似趨勢，但TNF- ∝ 峰值明顯較低，提示TNF- α 升高幅度與HBsAg清除顯著相關，表明TNF- ∝ 可能在免疫調節及HBsAg清除中發揮關鍵作用。此外，第12周和24周時血清TNF- ∝ 水平的升高與第72周HBsAg清除密切相關，特別是第24周的TNF- σ?α∝ 水平在ROC曲線分析中表現出較高的預測效能（ AUC=0.912 ），是早期預測HBsAg清除的可靠指標。與既往研究一致[14]，基線HBsAg水平、基線HBVDNA水平和第12周ALT升高也是 HBsAg 清除的重要預測因素。本研究的結果為臨床實踐提供了新策略：通過早期監測TNF- ∝ 水平及其他預測指標，醫生能夠更準確評估治療效果，優化個體化治療方案，從而提高HBsAg清除率。本研究創新之處在于系統評估了TNF- σ?α∝ 在治療中的作用，深化了對其在HBV免疫清除機制中的理解，并提供了指導臨床治療的新證據。

本研究揭示了PEG-IFN- ∝ 治療過程中血清TNF- ∝ 水平的動態變化及其與HBsAg清除之間的關系，但仍存在一定局限性。首先，作為單中心研究，樣本量相對有限，且部分患者脫落可能影響結果的穩健性。其次，隨訪時間較短，未能評估TNF- α_?∝ 水平變化對長期治療效果的影響。再者，研究未涉及其他可能影響HBsAg清除的免疫因子，可能限制結果的全面性。盡管本研究存在一定局限性，但整體證明了血清TNF- α?α∝ 水平在PEG-IFN- 治療IHC中的動態變化具有重要意義，并首次提出了基于TNF- ∝ 水平預測HBsAg清除的潛在可能性。該發現不僅為深人探討TNF- α_∝ 在HBV感染治療中的機制提供了新視角，也為個體化治療方案的制定奠定了基礎。未來研究應通過多中心、大樣本的驗證，進一步鞏固這些結果，推動其在臨床實踐中的應用與推廣。

倫理學聲明：本研究方案于2018年1月14日經由西安交通大學第二附屬醫院倫理委員會審批，批號：2018033，所納入患者均簽署了書面知情同意書。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻聲明：吳鳳萍負責課題設計，資料收集、分析，撰寫論文；何玲、王文浩參與收集臨床資料；劉晨瑞參與收集血液標本、修改論文；李茹參與收集血液標本及臨床資料；黨雙鎖負責擬定寫作思路，指導撰寫文章并最后定稿。

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收稿日期：2024-11-05：錄用日期：2025-04-14本文編輯：王亞南

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