牛病毒性腹瀉的病原學(xué)特征及中獸醫(yī)防治路徑研究

牛病毒性腹瀉又被稱為病毒性腹瀉黏膜病，是由牛病毒性腹瀉病毒侵染機(jī)體所引發(fā)的一種以消化道癥狀為主的接觸性病毒傳染性疾病，該類疾病屬于外來傳染性疾病的范疇，在很多規(guī)模化牛養(yǎng)殖場當(dāng)中具有極高的發(fā)生流行率，一旦出現(xiàn)一頭患病牛就可以通過多種渠道迅速向著整個(gè)牛群快速傳播蔓延，具有傳染性強(qiáng)、發(fā)病率高的特點(diǎn)，發(fā)生流行之后如若不能及時(shí)采取措施進(jìn)行針對有效的處理，還會導(dǎo)致疫病向著整個(gè)牛群快速傳播蔓延，損壞牛的機(jī)體，嚴(yán)重的會導(dǎo)致牛死亡。目前該種疾病在全國各地的牛養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)廣泛發(fā)生流行，一旦一頭牛群受到病毒感染，一周之內(nèi)，整個(gè)牛群都會出現(xiàn)典型的臨床癥狀，感染率能達(dá)到 80% 以上，牛攜帶的病毒可以通過分泌物、排泄物排出體外，健康牛群接觸了這些分泌物或者排泄物之后容易受到病毒的感染。防控工作難度較大，牛群感染該種疾病之后會表現(xiàn)出嚴(yán)重的脫水現(xiàn)象，最終給養(yǎng)殖戶帶來不可挽回的經(jīng)濟(jì)損失。

為更好控制各種疾病的發(fā)生流行，需要明確牛病毒性腹瀉的流行特征、臨床癥狀與詳細(xì)的發(fā)病原因，在臨床治療過程中要充分意識到當(dāng)前沒有針對性的治療手段，嘗試使用中獸醫(yī)治療手段治療牛病毒性腹瀉，以減少疫病傳播流行風(fēng)險(xiǎn)，并結(jié)合該疾病的發(fā)病特征，提出針對性的防控策略，進(jìn)一步降低感染率，保證整體養(yǎng)殖效益，最終促進(jìn)牛養(yǎng)殖業(yè)的現(xiàn)代化發(fā)展。一般牛病毒性腹瀉具有一定的潛伏期，在養(yǎng)殖場中也會存在隱性感染病例，隱性感染病例會持續(xù)向外排出病毒，造成該種疾病在牛生產(chǎn)中周期性的傳播蔓延。為更好防控牛病毒性腹瀉的發(fā)生流行，需要認(rèn)識到該種疾病所造成的嚴(yán)重危害，注重加強(qiáng)流行病學(xué)調(diào)查，掌握疾病的發(fā)生流行特點(diǎn)和典型有效的診斷方法，做到早發(fā)現(xiàn)早處置。

一、病原學(xué)特征

牛病毒性腹瀉（Bovineviraldiarrhea，簡稱BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒（Bovineviraldiarrheavirus，簡稱BVDV）引起的一種高度傳染性的疾病，該類病毒是黃病毒科（Flaviviridae）的瘟病毒屬（Pestivirus）的成員，根據(jù)病毒基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，BVDV分為兩個(gè)基因型：BVDV-1和BVDV-2，病毒粒子呈球形，直徑約為45～60納米，由一個(gè)單股正鏈RNA基因組包裹在一個(gè)脂質(zhì)膜中，該脂質(zhì)膜上鑲嵌有病毒蛋白。BVDV基因組全長約12.3千堿基對，基因組編碼一個(gè)大的多聚蛋白前體，該前體經(jīng)過蛋白酶切割后形成三個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白（E、C和M）和一個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（NS2）。BVDV主要在牛的肺、腸道和肝臟等器官中復(fù)制，復(fù)制過程中病毒RNA通過負(fù)鏈復(fù)制產(chǎn)生正鏈RNA，然后正鏈RNA作為模板合成病毒蛋白。病毒對乙醚、氯仿、胰酶敏感，耐低溫，56℃可滅活，對紫外線和干燥敏感。

二、流行特點(diǎn)

在養(yǎng)殖場中牛病毒性腹瀉的傳染源是感染了BVDV的牛，包括病牛和隱性感染牛，病牛的發(fā)熱、腹瀉、呼吸道癥狀等臨床癥狀明顯，隱性感染牛則無明顯癥狀，但能持續(xù)排毒。感染牛與未感染牛的混群、交配等直接接觸是BVDV傳播的主要途徑，同時(shí)病毒還可以通過污染的飼料、飲水、工具、衣物等間接接觸傳播，也可以通過空氣中的飛沫傳播，尤其是在牛群密集的環(huán)境中。牛病毒性腹瀉的易感動物主要是牛，包括奶牛、肉牛、水牛等，不同品種、年齡和性別的牛均可感染BVDV，但幼齡牛的感染率和死亡率較高。目前該種疾病在很多地區(qū)呈現(xiàn)地域流行特點(diǎn)，在全球范圍內(nèi)均有發(fā)生，但不同地區(qū)的流行情況存在差異，傳播無明顯季節(jié)性，但在某些地區(qū)，春季和秋季的發(fā)病率較高，感染BVDV的牛可長期排毒，成為牛群中的持續(xù)傳染源。

三、發(fā)病原因

1、不科學(xué)引種

在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，為了提高畜牧業(yè)的生產(chǎn)效率和經(jīng)濟(jì)效益，許多養(yǎng)殖戶不加選擇地引進(jìn)外來牛種，忽視了本土牛種的適應(yīng)性和抗病能力，這種不科學(xué)的引種行為對牛病毒性腹瀉的傳播起到了推波助瀾的作用。外來牛種往往帶有不同的病原體，當(dāng)這些牛種進(jìn)入新的環(huán)境時(shí)，本地牛群由于缺乏對這些病原體的免疫力，容易暴發(fā)疾病。此外，外來牛種的引入也可能帶來新的寄生蟲和病毒，病原體在新的環(huán)境中可能對本地牛種造成更大的威脅。

2、環(huán)境污染嚴(yán)重

環(huán)境污染對牛病毒性腹瀉的發(fā)生和傳播有著顯著的影響，現(xiàn)代工業(yè)的發(fā)展和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的集約化導(dǎo)致環(huán)境污染問題日益嚴(yán)重，水源污染、土壤污染和空氣污染等問題層出不窮，污染物質(zhì)進(jìn)入牛的生活環(huán)境后，不僅直接影響牛的健康，還可能通過食物鏈積累和傳遞，進(jìn)一步加重牛的疾病負(fù)擔(dān)。例如，水源污染會導(dǎo)致牛飲用受污染的水源，增加病原體的傳播風(fēng)險(xiǎn)；土壤污染會影響牧草的生長質(zhì)量，導(dǎo)致牛攝入有害物質(zhì)；空氣污染則可能通過呼吸系統(tǒng)影響牛的免疫力。

3、營養(yǎng)不良

營養(yǎng)不良不僅會降低牛的免疫力，還會影響牛的生長發(fā)育和生產(chǎn)性能，特別是在飼料質(zhì)量和營養(yǎng)搭配不合理的情況下，牛容易出現(xiàn)營養(yǎng)不良的問題，從而增加疾病的易感性。營養(yǎng)不良還可能導(dǎo)致牛的胃腸道功能紊亂，進(jìn)一步加重病毒性腹瀉的癥狀。缺乏維生素A和E會降低牛的抗病能力，使其更容易感染病毒；缺乏蛋白質(zhì)和能量則會影響牛的整體健康狀況，增加疾病的發(fā)生率。

4、疫苗接種不科學(xué)

疫苗接種是預(yù)防和控制牛病毒性腹瀉的重要手段，但不科學(xué)的疫苗接種可能事與愿違，甚至加重疾病的傳播。疫苗的選擇和使用不當(dāng)可能導(dǎo)致免疫效果不佳，甚至引發(fā)疫苗相關(guān)的副作用。使用過期或保存不當(dāng)?shù)囊呙缈赡軐?dǎo)致免疫失敗；接種時(shí)未能嚴(yán)格遵循疫苗使用說明，可能引發(fā)局部或全身性反應(yīng)，與此同時(shí)疫苗接種的覆蓋率不足也會影響群體免疫效果，導(dǎo)致疾病在牛群中傳播。

四、臨床癥狀

牛病毒性腹瀉根據(jù)病程和癥狀的嚴(yán)重程度，可分為急性型和慢性型，急性型牛病毒性腹瀉潛伏期一般為7～21d，初期體溫升高至 40～42^°C ，有時(shí)會出現(xiàn)第二次體溫升高，流鼻液、咳嗽、呼吸急促、流淚、流涎、精神沉郁，唇、腭、齒齦、口腔黏膜上出現(xiàn)淺表性爛斑，大量流涎，呼氣惡臭，隨后出現(xiàn)腹瀉癥狀，最初呈水樣，呈噴射狀，后期帶血和黏液，并排出成片的黏膜，嚴(yán)重脫水，皮膚失去彈性，口鼻部表皮出現(xiàn)爛斑，蹄冠發(fā)炎，趾間壞死和糜爛，跛行，可能出現(xiàn)鼻漏、結(jié)膜炎，犢牛的死亡率可達(dá) 90% 。慢性型發(fā)熱不明顯，體溫可能略高于正常，最具特征性的癥狀是鼻鏡上的糜爛，可在鼻鏡上連成一片，眼角常有漿液性分泌物，口腔內(nèi)很少有糜爛，但齒齦通常發(fā)紅，持續(xù)性或間歇性腹瀉，糞便更加惡臭，混有蛋清樣白色黏液，或帶血，甚至排出繩索狀的纖維素性管狀物。病牛高度消瘦，反應(yīng)遲鈍，角膜渾濁，蹄部出現(xiàn)蹄葉炎，趾間皮膚壞死、糜爛，跛行，頸部、耳后皮膚呈皮屑狀或局限性脫毛和表皮角化，病程較長，可持續(xù)數(shù)月，多數(shù)病例以死亡告終，妊娠母牛感染病毒后常發(fā)生流產(chǎn)，或產(chǎn)出先天性缺陷性犢牛。

五、病理學(xué)變化

通過對病死牛進(jìn)行解剖處理之后能發(fā)現(xiàn)，口腔黏膜、舌和食管黏膜出現(xiàn)發(fā)炎、糜爛和壞死，在食管中，尤其是食管壁上，常出現(xiàn)縱行的小糜爛。胃腸黏膜出現(xiàn)出血、水腫和糜爛。腸道中尤其是結(jié)腸和盲腸可能觀察到嚴(yán)重的炎癥和潰瘍，糞便中可能含有黏液、血液和脫落的腸黏膜。肺部可能出現(xiàn)大片的出血病灶，有時(shí)伴有肺炎，腎臟包膜下和腎皮質(zhì)可能出現(xiàn)出血斑。組織學(xué)檢查可以觀察到淋巴結(jié)皮質(zhì)淋巴細(xì)胞減少，髓質(zhì)淋巴細(xì)胞增生，消化道黏膜上皮細(xì)胞變性、壞死和脫落，炎癥細(xì)胞浸潤，肺泡上皮細(xì)胞變性、壞死和脫落，炎癥細(xì)胞浸潤和水腫，肝臟、腎臟和脾臟可能出現(xiàn)退行性變性、炎癥和纖維化。

六、實(shí)驗(yàn)室診斷

1、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

試驗(yàn)之前準(zhǔn)備好BVDV抗原包被板（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)板）標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、被檢血清、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）底物、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）洗滌液、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）終止液、抗BVDV抗體酶標(biāo)抗體、抗BVDV抗體辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記抗體、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測儀、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）加樣器、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）洗滌器。操作環(huán)節(jié)首先將標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和陰性血清按照1：100、1：200、1：400、1：800、1：1600的比例進(jìn)行稀釋，將稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清分別加入酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)板的不同孔中，每孔 100μl ，將試驗(yàn)板在 37% 孵育 30min ，洗滌酶試驗(yàn)板，每次洗滌3次，每次 2min ，加入抗BVDV抗體酶標(biāo)抗體，每孔 100μl，37^qC 孵育30分鐘，洗滌試驗(yàn)板每次洗滌3次，每次2分鐘，加入抗BVDV抗體辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記抗體，每孔100μl，37^qC 孵育 30min ，再次洗滌試驗(yàn)板，每次洗滌3次，每次2min ，加入ELISA底物，每孔 100μl，37% 孵育15分鐘，洗滌試驗(yàn)板，每次洗滌3次，每次2分鐘，加入ELISA終止液，每孔100μl ，混勻，使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測儀測定各孔的吸光度（OD值），以標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的OD值為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的稀釋倍數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將被檢血清按照1：100的比例進(jìn)行稀釋。緊接著將稀釋后的被檢血清分別加入酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)板的不同孔中，每孔 100μl ，按照步驟1中的方法進(jìn)行后續(xù)操作，測定被檢血清的OD值。在陽性對照和陰性對照成立的基礎(chǔ)上根據(jù)被檢血清的OD值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，如果被檢血清的稀釋倍數(shù)大于標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的稀釋倍數(shù)，則判定為陽性，否則判定為陰性。

2、RT-PCR檢測

采集疑似感染BVDV的牛組織、血液、糞便等，準(zhǔn)備好包括RT-PCR反應(yīng)混合物、引物、探針、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑等RT-PCR試劑盒、DNA模板制備試劑盒、PCR儀、電泳儀和凝膠成像系統(tǒng)、其他。試驗(yàn)過程中根據(jù)DNA模板制備試劑盒的說明，提取病毒RNA，按照RT-PCR試劑盒的說明，將提取的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，合成cDNA。配置包括PCR反應(yīng)混合物、引物、探針、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑等在內(nèi)的PCR反應(yīng)體系，根據(jù)引物和探針的設(shè)計(jì)，設(shè)置PCR反應(yīng)條件，通常包括預(yù)變性、變性、退火和延伸等步驟，根據(jù)病毒核酸的濃度和擴(kuò)增效率，設(shè)置合適的循環(huán)次數(shù)。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，觀察擴(kuò)增產(chǎn)物的大小，使用凝膠成像系統(tǒng)觀察電泳結(jié)果，記錄PCR產(chǎn)物的大小。使用已知陽性的BVDV樣本作為陽性對照，確保RT-PCR反應(yīng)的靈敏度和特異性，使用未感染BVDV的牛樣本作為陰性對照，確保RT-PCR反應(yīng)的特異性，根據(jù)PCR產(chǎn)物的大小和凝膠成像結(jié)果，判斷樣本是否為BVDV陽性。

七、中醫(yī)治療

中醫(yī)治療牛病毒性腹瀉主要依據(jù)辨證施治的原則，將牛病毒性腹瀉劃分成風(fēng)熱犯肺證（發(fā)熱、咳嗽、流涕、食欲不振、精神沉郁）濕熱蘊(yùn)結(jié)證（腹瀉、糞便稀薄、口色紅、口渴、食欲減退）、脾胃虛弱證（食欲不振、消化不良、糞便稀薄、體弱無力）、氣滯血瘀證（精神沉郁、食欲不振、糞便干結(jié)、腹部疼痛）。風(fēng)熱犯肺證推薦使用銀花 15g 連翹 20g 薄荷 25g 、牛蒡子 15g 桔梗 20g 、甘草25g ，濕熱蘊(yùn)結(jié)證可以使用葛根 30g 黃芩 20g 黃連 25g 白術(shù)20g 茯苓 20g 澤瀉 25g 。脾胃虛弱證推薦應(yīng)用黨參 20g 、白術(shù)25g 茯苓 20g 甘草 25g 、山藥 30g 扁豆 30g 等。氣滯血瘀證推薦使用人參 15g 、白術(shù) 25g 茯苓 30g 、甘草 25g 、香附 15g 、川芎 15g 等。將中藥飲片洗凈，放入煎藥壺中，加入適量水（約 1000mL ），浸泡30分鐘，用大火煮沸后，轉(zhuǎn)小火煎煮 30min ，過濾取汁，剩余藥液 300～500mL ，將藥汁分為2～3次，在病牛空腹時(shí)喂服，連續(xù)用藥5d為一個(gè)療程，一般用藥3～5個(gè)療程之后，病情可以得到很好地緩解。

八、預(yù)防措施

1、加強(qiáng)環(huán)境清理衛(wèi)生消毒

在牛養(yǎng)殖管理過程中要做到每天進(jìn)行一次全面清理，每周進(jìn)行一次徹底大掃除，重點(diǎn)做好牛舍地面、墻壁、屋頂、牛床、飼料槽、水槽、糞便處理設(shè)施等有效清理。清理前將牛只趕出牛舍，關(guān)閉門窗，清理牛舍地面、墻壁、屋頂?shù)忍幍募S便、飼料殘?jiān)㈦s草等雜物，然后用高壓水槍沖洗牛舍地面、墻壁、屋頂?shù)龋_保無殘留污物，重點(diǎn)清理牛床、飼料槽、水槽等設(shè)施，清除飼料殘?jiān)⑽畚锏龋謇砑S便處理設(shè)施，確保糞便及時(shí)清運(yùn)。清理結(jié)束之后要落實(shí)嚴(yán)格的衛(wèi)生消毒制度，通常情況下每周進(jìn)行一次常規(guī)消毒，消毒對象主要是牛舍地面、墻壁、屋頂、牛床、飼料槽、水槽、糞便處理設(shè)施、牛只接觸過的物品等，推薦使用 2% 的戊二醛、0.1% 的過氧乙酸 .2% 的過氧化氫， 2%～5% 的氫氧化鈉溶液等。按照消毒劑說明書要求，配制消毒液，消毒前將牛只趕出牛舍，關(guān)閉門窗，確保牛只安全，用消毒液噴灑牛舍地面、墻壁、屋頂?shù)龋貏e是牛只接觸過的區(qū)域，用消毒液浸泡牛床、飼料槽、水槽等設(shè)施，確保消毒徹底。清理與消毒過程中，工作人員應(yīng)穿戴口罩、手套、工作服等防護(hù)用品，清理與消毒后的牛舍，應(yīng)通風(fēng)換氣，確保空氣質(zhì)量，加強(qiáng)牛只飼養(yǎng)管理，提高牛只免疫力，預(yù)防疾病發(fā)生。

2、規(guī)范引種與免疫

在進(jìn)行引種之前，必須明確引種目標(biāo)，確保引進(jìn)的牛種健康且無疫病，符合我國牛種養(yǎng)殖的標(biāo)準(zhǔn)，以提升養(yǎng)殖場牛種的質(zhì)量，進(jìn)而促進(jìn)養(yǎng)殖場的經(jīng)濟(jì)效益。依據(jù)國家相關(guān)法律法規(guī)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，制定合理的檢疫方案，確保檢疫流程嚴(yán)謹(jǐn)，不留死角。選擇國內(nèi)優(yōu)良品種或國外引進(jìn)的優(yōu)質(zhì)牛種，確保牛種來源可靠，有合法的引種手續(xù)。引種前了解牛種來源地疫病狀況，評估引種風(fēng)險(xiǎn)，到達(dá)養(yǎng)殖場后進(jìn)行為期30天的隔離觀察檢疫，重點(diǎn)觀察牛只外觀、行為、食欲等，采集牛只血液、尿液、糞便等樣本，進(jìn)行病原體檢測。與此同時(shí)，必須強(qiáng)化疫苗免疫接種工作，建議采用牛病毒性腹瀉或黏膜病滅活疫苗進(jìn)行免疫接種。對于3月齡以上的健康牛只，每頭牛應(yīng)接種 2mL 劑量，在初次接種后的第21d，再次以相同劑量進(jìn)行第2次免疫接種。該疫苗的免疫保護(hù)期為6個(gè)月。在免疫接種過程中，需明確該疫苗僅適用于健康牛群的免疫接種，對于妊娠后期及臨產(chǎn)期的牛群，應(yīng)謹(jǐn)慎使用該疫苗。

綜上所述，在牛生產(chǎn)過程中要求養(yǎng)殖戶特別注意對牛病毒性腹瀉的科學(xué)診斷和有效預(yù)防，通過臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室診斷等諸多手段，對該種疾病作出科學(xué)有效的診斷，當(dāng)確診牛群受到病毒入侵之后，要做到盡早發(fā)現(xiàn)、盡早隔離，及時(shí)采取措施進(jìn)行有效的治療，同時(shí)要想最大程度的保障牛的健康生長發(fā)育，維護(hù)養(yǎng)殖場的經(jīng)濟(jì)利益，促進(jìn)地方畜牧養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，就需要將關(guān)注重點(diǎn)放置在該種疾病的科學(xué)防范方面構(gòu)建綜合性的預(yù)防方案，確保早發(fā)現(xiàn)緊急處理。

（作者單位：332500江西省九江市湖口縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局；343132江西省吉安市吉安縣北源鄉(xiāng)便民服務(wù)中心）