梳唇石斛組培快繁技術研究

中圖分類號：S567.23 文獻標識碼：A 文章編號：1006-060X（2025）08-0011-04

RapidPropagationofDendrobiumstrongylanthumbyTissueCulture

GAO Yan’，DONG Rong-jiao1，LI Gui-lin12，LI Ze-sheng’，JIAMin’，CHA Wen-biao （1.YunnanDehong Institute of Tropical Agricultural Science，Ruili 6786oo，PRC; 2.Guangnan Yaowanggu Biotechnology Co.， Ltd.， Guangnan 6633oo，PRC）

Abstract：Therapid propagationofDendrobiumstrongylanthum wascariedoutbytissueculturewiththecapsuleas theexplantThe efect ofdisinfectants and growth hormones onthe inductionof adventitious budsand adventitious roots were studied.Furthermore， theoptimal dsiectiononditios，sedgeinatoniu，prolferationanddieretationdum，ootingmedum，adbate fortransplantationof isseculturesdingsweresreed.Teesultssowedtatteotialdisifectioconditioseretatof the explant with 0.08%HgCl₂ for 16min ，underwhich the germinationrate reached 97% .Themost suitablemedium for seed germination was 1/2 MS + sucrose 25g/L+agar5g/L+ potato puree 20g/L ， in which the germination rate was 98% . The optimal proliferation and differentiation medium was MS + sucrose 30g/L+agar 5g/L+ potato puree 60g/L+ banana puree 40g/L+6 -BA 0.2mg/L+NAA 0.4mg/L ，in which the proliferation timesreached19.47.The optimal rooting medium was 3/4 MS + sucrose 20g/L+agar 5g/L+ potato puree 50g/L+ banana puree 100g/L+6 -6-BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L+AC 0.1%， inwhich the rooting rate was 97.33% and the average root number and length were 5.67 and 5.03cm ，respectively.After 1O daysof acclimatization，the seedlingswere transplanted intothecompound substratecomposedofwoodshavingsandbarkchippngsata volumeratioof1：1，andthe survivalrate was 95% Key words：Dendrobium strongylanthum; capsule; protocorm; tissue culture seedlings

梳唇石斛（DendrobiumstrongylanthumRchb.F.），又名珍蟲石斛，是蘭科石斛屬草葉組附生草本植物[1。梳唇石斛是國家二級保護野生植物，被世界自然保護聯盟（IUCN）列為瀕危植物，原產于海南和云南南部，多生長在海拔 ¹ 000～2 100m 的山地林中樹干上[2]。梳唇石斛具有滋陰養胃、益味生津、止咳潤肺等功效，多用于消化系統、呼吸系統及眼科疾病的治療[3]。同時，該植物觀賞價值極高，花姿優雅，既可做切花，也可盆栽觀賞，具有廣闊的市場開發前景。然而，由于野生資源過度采挖及生境破壞，梳唇石斛種群數量急劇減少，急需通過人工保育措施實現其種質資源的可持續利用。

組培快繁技術是保育瀕危植物的有效途徑之一，中藥材組培快繁技術已在生產中得到推廣應用[49]，其中金釵石斛[10]、鐵皮石斛[]、鼓槌石斛[1]等藥用石斛的組培技術已有大量研究。然而，自前關于梳唇石斛組織培養的研究報道較少，當前市場上的梳唇石斛主要依賴云南野生資源采摘和少量人工栽培，其規模化繁育仍面臨嚴峻挑戰。因此，本研究以梳唇石斛蒴果為外植體，研究殺菌劑對外植體消毒及生長激素對不定芽、不定根誘導的影響，同時探尋適合的組培苗移栽基質，以期為構建高效的梳唇石斛組培快繁技術體系提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

試驗所用外植體為從緬甸引進、栽培于德宏州梁河縣石斛種植基地的梳唇石斛蒴果，授粉 150～180d 完全成熟且未開裂。

1.2 試驗方法

1.2.1外植體消毒與播種將蒴果置于 0.1% 洗潔精溶液中浸泡 1min ，隨后用軟毛刷輕柔刷洗去除果表面雜質，流動自來水沖洗 20～30min ，純凈水沖洗2～3次。將蒴果置于超菌工作臺上，先用 75% 酒精消毒 60s ，再采用 0.08%HgCl₂ 和 5%NaClO 進行消毒，處理 A₁～A₄ 分別為采用 0.08%HgCl₂ 消毒8、12、16和 20min ，處理 A₅～A₈ 分別為采用 5% NaC10消毒8、12、16和 20min 。消毒后無菌水沖洗5～6次，用無菌過濾紙吸干水分，先切除果上下兩端各 0.2cm ，再縱向切開蒴果，用鑷子夾住果皮輕輕抖動，將種子均勻撒播至培養基（ 1/2MS⁺ 蔗糖 25g/L⁺ 瓊脂 5g/L ）表面，每個處理20瓶，重復3次，計算污染率和萌發率。

1.2.2種子萌發采用4組培養基進行種子萌發試驗，包括 1/2MS⁺ 蔗糖 25g/L+ 瓊脂 5g/L （ B₁ CK） 1/2MS⁺ 蔗糖 25g/L+ 瓊脂 5g/L⁺ 馬鈴薯泥20g/L （ B₂ ）、 1/2MS⁺ 蔗糖 25g/L⁺ 瓊脂 5g/L+ 椰子汁20mL/L （ B₃ ）和 1/2MS⁺ 蔗糖 25g/L+ 瓊脂 5g/L⁺ 香蕉泥 20g/L （ ΔB₄ ），每個處理接種20瓶，重復3次。培養基pH值為 5.8～6.0 ，暗培養5d，轉入光周期培養，溫度（ 25±2 ） °C ，光照強度 1 600～1 800lx ，光周期 10h/d ；培養50d后，計算萌發率，記錄萌發時間，萌發時間為從種子吸水開始到種子膨大并呈現黃綠色的時間。

1.2.3不定芽誘導如表1所示，在 MS⁺ 蔗糖30g/L⁺ 瓊脂 5g/L⁺ 馬鈴薯泥 60g/L⁺ 香蕉泥 40g/L 的基礎上分別添加不同濃度的6-BA和NAA，配置成9種培養基，將萌發的原球莖分別接種于9種培養基，每個處理接種20瓶，重復3次。培養基 pH 值為6.0，培養溫度（ 25±1 ） C ，光照強度 1800～2000lx 光周期 10h/d ；培養50d后，計算增殖倍數。增殖倍數 σ=σ 培養后原球莖總數/接種原球莖數。

表1不定芽誘導培養基 （mg/L）

1.2.4不定根誘導如表2所示，在 3/4MS⁺ 蔗糖20g/L⁺ 瓊脂 5g/L⁺ 馬鈴薯泥 50g/L⁺ 香蕉泥 100g/L+ AC 0.1% 的基礎上分別添加不同濃度的6-BA和NAA，配置成9種培養基，將誘導的不定芽分切成單芽，分別接種于9種培養基，每個處理接種20瓶，重復3次。培養基pH值為6.0，培養溫度（ 25±2?）9C 光照強度 2 000～2 200lx ，光周期 10～12h/d ；培養50d后，計算平均生根率、平均生根數和平均根長。

表2不定根誘導培養基 （mg/L）

1.2.5煉苗移栽待小苗長至 3cm 以上，移至自然光下煉苗 10d ，移栽前洗凈根部的培養基殘留，用50% 多菌靈可濕性粉劑1000倍液浸泡 10min 后晾干，分別移栽于鋸木渣（ E₁ ）、刨花（ （E₂） ）鋸木渣：樹皮屑 Λ=1：1（V/V，E₃ ）和刨花：樹皮屑 τ=1：1 （V/V，E₄ ）4種移栽培養基質中，每個處理移栽100叢，移栽叢行距 5cm×10cm ，每叢3～5株，重復3次。移栽前 1～2d ，移栽基質用 50% 多菌靈可濕性粉劑1000倍液浸泡 ^4h ，瀝干水分，使用復合基質時，苗床下層鋪 4～5cm 樹皮屑，上層鋪 4～5cm 刨花或鋸木渣，相對濕度 70%～80% ，溫度低于 30% 。移栽7d后，用生根母液500倍液灌根處理；移栽15d后，噴施氨基酸葉面肥3000倍液；移栽30d后，計算成活率（成活苗叢數/全部苗叢數 ×100% ）。

1.3 數據處理

采用Excel2021整理數據，采用DPS7.05軟件進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 不同消毒處理對外植體消毒效果的影響

由表3可知，隨著消毒時間延長，外植體污染率下降，種子萌發率先升后降，且 0.08%HgCl₂ 的消毒效果優于 5% NaClO，其中 A₃ 處理的萌發率顯著高于其他處理，且外植體污染率較低（ 1.67% ），因此， 0.08%HgCl₂ 消毒 16min 為最佳消毒處理，種子萌發率高達 97% 。

表3不同消毒處理對外植體消毒效果的影響

注：表中同列不同小寫字母表示處理間差異顯著（ Plt;0.05 ），下同。

2.2 不同有機添加物對梳唇石斛種子萌發的影響

由表4可知， B₁ （CK）處理的萌發時間顯著長于其他處理，且萌發率顯著低于其他處理，說明添加天然有機物的培養基均優于CK。在添加天然有機物處理中， B₂ 處理的萌發時間短于 B₃ 和 ΔB₄ ，萌發率顯著高于 B₃ 和 ΔB₄ ，因此， 1/2MS⁺ 蔗糖 25g/L+ 瓊脂 5g/L⁺ 馬鈴薯泥 20g/L（B₂ ）為最佳萌發培養基，萌發率最高（ 98% ），萌發時間最短（11d）。

表4不同有機添加物對種子萌發的影響

2.3不同激素濃度組合對梳唇石斛原球莖增殖分化的影響

由表5可知，當6-BA濃度不變時，隨著NAA濃度升高，增殖倍數先升后降，其中 C₅ 處理的增殖分化效果最好，與 C₈ 處理差異不顯著，但二者的增殖倍數明顯高于其他處理。 C₅ 和 C₈ 處理的增殖倍數分別為19.47和18.47，分化的小苗整齊均勻，生長粗壯，葉片大且呈深綠色；當6-BA、NAA濃度升至最高時（ ），小苗根系發達，葉片細長，再分化能力變弱，生長緩慢。因此， MS⁺ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂 5gL+ 馬鈴薯泥 60g/L⁺ 香蕉泥 40g/L^+6-BA0.2mg/L^+NAA 0.4mg/L （ C₅ ）為原球莖最佳增殖分化培養基，增殖倍數高達19.47倍。

表5不同激素濃度組合對原球莖增殖分化的影響

2.4不同激素濃度組合對梳唇石斛生根壯苗的影響

由表6可知，隨著6-BA或NAA濃度的升高，梳唇石斛的生根率、平均生根數和平均根長總體上呈先升后降趨勢。其中 D₅ 和 D₈ 處理的平均生根數和平均根長差異不顯著，但 D₅ 處理的生根率顯著高于其他處理，綜合而言， 3/4MS⁺ 蔗糖 20g/L⁺ 瓊脂5gL+ 馬鈴薯泥 50g/L+ 香蕉泥 100g/L+6-BA0.5mg/L+ NAA 1.0mg/L⁺AC 0.1% （ D₅ ）為最佳壯苗生根培養基，生根苗粗壯，葉片舒展，根系多而粗壯，生根率達 97.33% ，平均生根數5.67條，平均根長 5.03cm 。

表6不同激素濃度組合對生根壯苗的影響

2.5不同移栽培養基質對梳唇石斛移栽成活率的影響

煉苗10d后，梳唇石斛葉片顏色轉為深綠色，葉片舒展變厚，莖基部健壯呈深綠色，根系粗壯呈白色。試驗結果顯示， E₁ 、 E₂ 、 E₃ 和 E₄ 處理的移栽成活率分別為 85% 、 88% 、 93% 和 95% ，不同移栽培養基質的移栽效果存在顯著差異，且復合基質的移栽成活率高于單一基質。其中 E₄ 處理（刨花：樹皮屑 τ=1：1 ）苗床下層鋪樹皮屑，上層鋪刨花，具有良好的透氣性、排水性和保濕效果，移栽成活率最高，生根抽芽快； E₁ 處理（鋸木渣）的透氣性和排水性較差，基質易板結生菌，移栽成活率最低。

3 討論與結論

梳唇石斛蒴果小、種皮薄、種粉少，對外植體蒴果進行消毒處理，有利于降低污染率，提高萌發率。本研究中， 0.08%HgCl₂ 消毒 16min 為梳唇石斛蒴果外植體的最佳消毒處理，污染率為 1.67% 萌發率高達 97% 。種子接種于誘導培養基上5～7d后，種胚吸水膨大，撐破種皮，形成針尖樣黃綠色原球莖，50d后，頂端分生組織突出，原球莖由黃綠色變為綠色，不同天然有機添加物對梳唇石斛種子萌發的影響逐漸產生區別，其中添加 20g/L 馬鈴薯泥處理的萌發效果最好，萌發時間最短（11d），萌發率最高（ 98% ），這與姜艷等[13]的研究結果相符。

添加適宜濃度的6-BA與NAA顯著影響原球莖的增殖分化效率[14-15]。本研究中，當6-BA濃度不變時，原球莖增殖倍數隨著NAA濃度的升高先升后降，NAA濃度過高時，原球莖硬化呈深綠色，增殖分化幼苗細弱稀疏。總體而言， 6?BA0.2mg/L 和NAA 0.4mg/L 組合處理的原球莖增殖分化效果最佳，分化速度快，不定芽粗壯緊密且分布均勻，增殖倍數達19.47倍，這與李守嶺等[的研究結果一致。

研究表明，植物生長調節劑與有機添加物的合理配制可促進石斛屬植物幼苗的生長和根系的發育[17-19]。復合添加馬鈴薯泥和香蕉泥可促進幼苗生根[20]，且香蕉泥占比高更有利于培育莖桿粗壯、根系發達、生長整齊的植株[21]。研究發現，在生根壯苗培養基添加 0.1% AC可緩解培養基褐化進程，減少黃葉[22]。本研究發現， 3/4MS⁺ 蔗糖 20g/L⁺ 瓊脂 5g/L+ 馬鈴薯泥 50g/L⁺ 香蕉泥 mg/L+NAA 1.0mg/L⁺AC 0.1% 為最佳壯苗生根培養基，生根率達 97.33% 。

研究表明，復合移栽培養基質能改善透氣性和排水性，降低根系腐爛風險，促進梳唇石斛組培苗的根系發育和芽體抽生[23-24]。本研究中，刨花：樹皮屑 τ=1：1 作移栽培養基質時，移栽成活率最高（ 95% ）。

本研究以梳唇石斛蒴果為外植體進行組培試驗，旨在篩選出最佳消毒處理、種子萌發培養基、增殖分化培養基、壯苗生根培養基及移栽基質。結果表明：最佳消毒處理為 0.08%HgCl₂ 消毒 16min ，萌發率達 97% ；最佳萌發培養基為 1/2MS⁺ 蔗糖 25g/L+ 瓊脂 5g/L+ 馬鈴薯泥 20g/L ，萌發率達 98% ；最佳增殖分化培養基為 MS⁺ 蔗糖 30g/L⁺ 瓊脂 5g/L⁺ 馬鈴薯泥 60g/L⁺ 香蕉泥 40g/L+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.4mg/L ，增殖倍數達19.47倍；最佳壯苗生根培養基為 3/4MS⁺ 蔗糖 20g/L⁺ 瓊脂 5g/L⁺ 馬鈴薯泥50g/L+ 香蕉泥 100g/L⁺6-BA0.5mg/L⁺NAA1.0mg/L⁺ AC 0.1% ，生根率達 97.33% ，平均生根數5.67條，平均根長 5.03cm ；刨花：樹皮屑 =1：1 作移栽基質時，移栽成活率高達 95% 。

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（責任編輯：王婷）