3種養(yǎng)殖水蛭營(yíng)養(yǎng)成分·氨基酸組成及抗凝血酶活性差異比較

關(guān)鍵詞養(yǎng)殖水蛭；營(yíng)養(yǎng)成分;氨基酸組成;抗凝血活性中圖分類號(hào)S917.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 0517-6611（2025）16-0180-04doi： 10.3969/j.issn.0517-6611.2025.16.039

AbstractObeie]oomparedalyteurtioaotentnocidompositidtcoagntactivityfthe ches，hiccaldelydinanlsis，do，aaigadrtovidsisforevelotdeploitation the leeches for huge scale farming.[Method]3 kinds farming adult leecheswere respectively weighed 150g ，freeze-dried by vacumrdomlyideditoeplicatestoproucefre-dridowerDryaterdepotdefatshotentndo compositionweredeteminedbyacceptedstardmetods.Theanticoaglantactivityasdeteminedbytrombititration.Resulthe sultsshowedthatthereweresignificantdiferences inmoisturecontentamong thefreeze-driedpowder3farminglches（ Plt;0.05 ）， the order moisturecontentwas W.pigragt;Hmanilensisgt;Hnipponia.Thecontentscudeprotein，cudefatashwerethehighest in H.nip ， ponia the lowest in W -pigra.And the crude protein crude fat contents H. manillensis were significantly lower than those H.nipponia （ Plt;0.05 ），but significantly higher than those W.pigra（ P lt;0.05）.The ash content W.pigra was significantly lower than H.manillensis H.nipponia（ Plt; 0.05）.Thecontentsasparticacid，glutamicacid，lysineleucinewerehighinthefreeze-dried powderthethreefarming leeches species，but the content aspartic acid valine H_? .manillensis was significantly higher than that in H . nipponia W.pigra （ P lt;0.05）.In addition，the glutamic acid content W .pigra was significantly higher than that H manillensis H.nipponia（ Plt;0.05 ）， thepenylalaieotetdtiossetialoidstoalodsflvoableoistotlaose significantly higher than those H.manillensis （ Plt;0.05 ），but there were no significant differences compared with H.nipponia （ Pgt;0.05 ）.The anticoagulant activitythe freeze-dried powder the three farming leeches was significantly diferent （ Plt;0.05 ）， the order the anticoagulantactivityasHmanileisnippaWpigra.oncsion]Tefinglhallvegodnutriioalvaedtogan tithrombin activity in vitro， can be huge-scale cultured for the same homology medicine food.

Words Farming leeches;Nutrient composition;Amino acid composition;Anticoagulant activity

水蛭俗名螞蟥，屬環(huán)節(jié)動(dòng)物門蛭綱真蛭亞綱醫(yī)蛭形亞目的醫(yī)蛭科和黃蛭科[]，主要含有水蛭素等活性成分，藥用價(jià)值高，其抗凝血、抗腫瘤、抗炎、降血脂等作用被廣泛認(rèn)可，醫(yī)藥應(yīng)用潛力巨大。在《神農(nóng)本草經(jīng)》中已有記載，主逐惡血，瘀血，月閉，破血逐瘀，無(wú)子，利水道。《中國(guó)藥典》（2015年版）收錄的中藥材水蛭主要包括螞蟥（寬體金線蛭）、水蛭（日本醫(yī)蛭）、柳葉螞蟥（茶色蛭）3種[2]。目前國(guó)內(nèi)水蛭用于藥材的研究主要集中在抗凝血物質(zhì)的提取[3-6]、抗凝機(jī)制[7-8]以及藥理應(yīng)用等方面。隨著研究的不斷深人，水蛭類產(chǎn)品不斷被開發(fā)，醫(yī)用水蛭的需求量逐年增加，野生資源已無(wú)法滿足市場(chǎng)需求。盡管國(guó)內(nèi)水蛭的研究和養(yǎng)殖均取得了突破性進(jìn)展[9-12]，然而水蛭的產(chǎn)量依然存在巨大缺口，其功能性活性物質(zhì)亦亟待深入發(fā)掘。

我國(guó)水蛭資源豐富，分布廣泛。目前主要養(yǎng)殖品種包括菲牛蛭（Hirudinariamanillensis）、日本醫(yī)蛭（Hirudonipponia）和寬體金線蛭（Whitmaniapigra）。水蛭作為一種優(yōu)質(zhì)心血管藥品原料，人工養(yǎng)殖是保障其有效供給的重要途徑。目前，有關(guān)養(yǎng)殖水蛭攝食與生長(zhǎng)[10，12-14]、養(yǎng)殖方式[1，15]、病害防治[16]繁殖[17-18]等方面研究和應(yīng)用已有大量報(bào)道，而鮮見養(yǎng)殖水蛭營(yíng)養(yǎng)組成及品質(zhì)方面的研究及分析報(bào)道。目前水蛭質(zhì)量尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，水蛭抗凝血活性常用作評(píng)價(jià)其質(zhì)量好壞的關(guān)鍵指標(biāo)。隨著水蛭養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大及市場(chǎng)需求量的持續(xù)高漲，亟需開展水蛭營(yíng)養(yǎng)組成及品質(zhì)分析研究。目前水蛭用于藥材原料主要以干品形式，然而不同養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉的營(yíng)養(yǎng)組成和抗凝血酶活性差異比較分析尚未見報(bào)道。筆者采用冷凍干燥法，分別制作3種養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉，并對(duì)其營(yíng)養(yǎng)成分、氨基酸組成及抗凝血酶活性進(jìn)行檢測(cè)分析、比較，以期為水蛭的規(guī)模化人工養(yǎng)殖和開發(fā)利用提供參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)原料3種醫(yī)用水蛭活體由梅州安蛭生物科技有限公司提供，樣品經(jīng)人工養(yǎng)殖至成體階段后，禁食14d，選擇健康、個(gè)體大小均勻的3種水蛭各 150g ，隨機(jī)分為3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù) 50g 。將每個(gè)重復(fù)水蛭放入 -80^°C 冰箱急速凍存僵硬后，用不銹鋼超微粉碎機(jī)粉碎，即刻轉(zhuǎn)入冷凍干燥機(jī)進(jìn)行真空冷凍，制得不同養(yǎng)殖水蛭的冷凍干燥粉。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定。水分含量按照GB/T5009.3—2016法 采用 105^°C 常壓干燥法測(cè)定；粗蛋白質(zhì)含量按照GB/T 6432—2018法采用凱氏定氮法測(cè)定；粗脂肪含量按照GB/T 6433—2006法采用索氏抽提法測(cè)定，其中抽提試劑為石油 醚；灰分含量按照GB/T6438—2007法采用 550°C 高溫爐灼 燒法測(cè)定。

1.2.2氨基酸組成測(cè)定。氨基酸含量按照GB/T18246—2019，樣品經(jīng)鹽酸水解后，采用Waters高效液相色譜儀（510型，美國(guó)）進(jìn)行測(cè)定。

1.2.3抗凝血酶活性測(cè)定。采用凝血酶滴定法測(cè)定[]，稱取 （0.10±0.01 ） g 樣品，加入 0.9% 氯化鈉溶液 3mL ，充分?jǐn)嚢杞?30min，4 000r/min 離心 20min 后取上清液備用。取100μL 試驗(yàn)液于玻璃管（ 5mm×20mm 中，加入 200μL （牛）纖維蛋白原（ 0.5% ，購(gòu)自上海生物制品研究所）緩沖液搖勻，37^°C 水浴加溫，以 5μL/min 速度滴加凝血酶（天津生物化學(xué)制品廠），緩緩搖勻至凝固，記錄滴定液用量，按以下公式進(jìn)行凝血酶活性計(jì)算。

U=C₁×V₁/（C₂×V₂）

式中： U 表示 1g 試驗(yàn)品含凝血酶活性單位（ U/g） ; C₁ 表示凝血酶溶液的質(zhì)量濃度（ U/mL ; C₂ 表示試驗(yàn)樣品溶液的質(zhì)量濃度（ ; V₁ 表示凝血酶溶液的用量 （μL ）； V₂ 表示樣品溶液的用量 Π（μL） 。

1.3數(shù)據(jù)處理分析采用SPSS22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-wayANOVA）。若等方差，則采用Duncan'氏法進(jìn)行多重比較；若不等方差，則采用T3檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用平均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)誤表示， Plt;0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1營(yíng)養(yǎng)成分由表1可知，3種養(yǎng)殖水蛭凍干粉水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和灰分含量差異明顯（ Plt;0.05 ）。寬體金線蛭水分含量高達(dá) 82.59% ，顯著高于菲牛蛭（ 67.41% 和日本醫(yī)蛭（ 63.50% 0 Plt;0.05） ），菲牛蛭顯著高于日本醫(yī)蛭（ Plt;0.05 。3種養(yǎng)殖水蛭凍干粉中，日本醫(yī)蛭粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和灰分含量最高（ Plt;0.05 ），寬體金線蛭最低（ Plt;0.05 ）。菲牛蛭粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量顯著低于日本醫(yī)蛭（ Plt;0.05） ，但顯著高于寬體金線蛭（ Plt;0.05 ；寬體金線蛭灰分含量最低，顯著低于菲牛蛭與日本醫(yī)蛭（ Plt;0.05） 。

表13種養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉營(yíng)養(yǎng)成分

nutrientcomposition freeze-dried powder 3kindsfarmingleeches

司列不同字母表示差異顯著（ ，相同字母或無(wú)字母表示差異不顯著 。：Different letters in the same column st for significant difference （ Plt;0.05 ），the same letters or no letters indicate insignificant difference （ Pgt;0.05）

2.2氨基酸組成由表2可知，3種養(yǎng)殖水蛭的甘氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、酪氨酸、精氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、組氨酸、絲氨酸、藥用氨基酸、必需氨基酸、非必需氨基酸及藥用氨基酸/總氨基酸、必需氨基酸/總氨基酸無(wú)明顯差異（ Pgt;0.05） ，而天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸和亮氨酸等4種藥用氨基酸在3種養(yǎng)殖水蛭干燥粉中的含量均表現(xiàn)較高。3種養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉中，菲牛蛭的天冬氨酸、亮氨酸和纈氨酸含量最高，其中天冬氨酸和纈氨酸含量顯著高于日本醫(yī)蛭和寬體金線蛭（ Plt;0.05 ）；寬體金線蛭的谷氨酸、苯丙氨酸含量和非必需氨基酸/總氨基酸、呈味氨基酸/總氨基酸比值最高，其中谷氨酸含量顯著高于菲牛蛭和日本醫(yī)蛭（ Plt;0.05 ）。寬體金線蛭的苯丙氨酸含量和非必需氨基酸/總氨基酸、呈味氨基酸/總氨基酸比值顯著高于菲牛蛭（ Plt;0.05），但與日本醫(yī)蛭不存在明顯差異（ Pgt;0.05， 。

2.3抗凝血酶活性菲牛蛭、日本醫(yī)蛭、寬體金線蛭的抗凝血活性分別為（ 164.36±7.50 、（ 131.04±4.78 ）（ 48.80± 2.48） U/g，3 種養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉的抗凝血酶活性存在顯著性差異（ Plt;0.05） 。抗凝血酶活性以菲牛蛭最高，日本醫(yī)蛭次之，寬體金線蛭最低（ Plt;0.05 ）。

3討論

水蛭中含有豐富的水蛭素物質(zhì)，具有較高的抗凝血酶活性。因此，水蛭素被認(rèn)為是水蛭類藥材在心血管方面發(fā)揮作用的關(guān)鍵物質(zhì)，但水蛭素活性高低受種類、生長(zhǎng)階段、養(yǎng)殖環(huán)境以及加工工藝等影響。研究認(rèn)為，傳統(tǒng)的晾曬、文火炒、烘干等不同加工處理工藝會(huì)對(duì)水蛭素活性有不同的影響。此外，因水蛭包裝、存放條件所致的霉菌和其他微生物滋生等也會(huì)影響水蛭素活性。與傳統(tǒng)水蛭的加工方法相比，冷凍干燥加工法對(duì)水蛭的營(yíng)養(yǎng)組成和抗凝血酶活性不良影響相對(duì)較低，有利于保障養(yǎng)殖水蛭品質(zhì)。

表23種養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉中氨基酸組成

注：*為藥用氨基酸; ▲ 為呈味氨基酸;#為必需氨基酸。同列不同字母表示差異顯著（ Plt;0.05） ），相同字母或無(wú)字母表示差異不顯著（ Pgt;0.05） 。

Note：* sts for medicinal amino acids; ▲ sts for flavor amino acids;# sts for essential amino acids.Diffrent letters inthe same column st for sig-nificant difference（ Plt;0.05） ，thesame lettersorno lettersindicateinsignificantdifference（ Pgt;0.05， ）

水產(chǎn)動(dòng)物的基本營(yíng)養(yǎng)組成如粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和灰分常被用于評(píng)價(jià)機(jī)體營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)，且蛋白質(zhì)含量的高低更是水產(chǎn)動(dòng)物品質(zhì)的重要指標(biāo)。目前，有關(guān)水蛭營(yíng)養(yǎng)成分的相關(guān)研究較少。該試驗(yàn)結(jié)果顯示，3種養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉中，日本醫(yī)蛭水分含量最低，寬體金線蛭的水分含量最高。菲牛蛭的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和灰分含量分別為 67.41%.21.93% ！1.67% 和 1.32% ，日本醫(yī)蛭的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和灰分含量分別為 63.50%.24.80%.2.43% 和 1.50% ，寬體金線蛭的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、灰分含量分別為 82.59%.15.67% 、0.22% 和 0.42% 。戚敏等[20通過(guò)冷凍干燥測(cè)定菲牛蛭的營(yíng)養(yǎng)組成，發(fā)現(xiàn)粗蛋白質(zhì)含量較高，粗脂肪含量低，其中水分為80.55% ，粗蛋白質(zhì)為 16.70% 灰分為 1.33% 、粗脂肪為 1.35% ，與該研究結(jié)果存在一定差異，這可能與其來(lái)源、產(chǎn)地、規(guī)格、食物來(lái)源等相關(guān)。但該試驗(yàn)測(cè)定的寬體金線蛭的體成分與楊玄等[21]的研究結(jié)果相近。楊玄等[21]研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)國(guó)標(biāo)法測(cè)定養(yǎng)殖寬體金線蛭鮮樣中水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量分別為 83.52%.13.03%.1.21% 和 0.95% 。水產(chǎn)動(dòng)物的體組成可能與其食物營(yíng)養(yǎng)成分密切相關(guān)。在養(yǎng)殖寬體金線蛭過(guò)程中，環(huán)棱螺和田螺是經(jīng)常選用的動(dòng)物性食物來(lái)源，寬體金線蛭的營(yíng)養(yǎng)組成與李曉英等[22-23]研究環(huán)棱螺和田螺的營(yíng)養(yǎng)組成較為接近。該試驗(yàn)所選用的菲牛蛭和日本醫(yī)蛭這2種人工養(yǎng)殖水蛭食物主要來(lái)源為新鮮豬血液制品，而寬體金線蛭則以投喂環(huán)棱螺和田螺等動(dòng)物性食物為主。這可能是造成菲牛蛭和日本醫(yī)蛭的營(yíng)養(yǎng)組成較為接近，而與寬體金線蛭存在比較明顯差異的關(guān)鍵原因。

該試驗(yàn)分析測(cè)定的3種養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉中均含有15種氨基酸，氨基酸總量范圍在 73.14%～79.00% ，這與楊玄等[21，24-25]的研究結(jié)果相近。蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值不僅取決于氨基酸含量高低，還取決于必需氨基酸的組成比例。人體必需氨基酸包括蘇氨酸、精氨酸、組氨酸、苯丙氨酸、氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、色氨酸。這些氨基酸對(duì)于人體的生長(zhǎng)發(fā)育和健康至關(guān)重要，它們無(wú)法由機(jī)體自身合成，必須通過(guò)食物攝取。該試驗(yàn)結(jié)果表明，3種水蛭可為人體提供較好的氨基酸，可以作為優(yōu)質(zhì)食材開發(fā)利用。但歐興長(zhǎng)等[24]研究發(fā)現(xiàn)，寬體金線蛭的必需氨基酸含量為 20.84% ，日本醫(yī)蛭必需氨基酸含量為 22.12% ，菲牛蛭的必需氨基酸含量為 26.79% 。郭文菊等[25]測(cè)得日本醫(yī)蛭必需氨基酸含量為22.50% 。楊玄等21測(cè)得養(yǎng)殖寬體金線蛭含有7種必需氨基酸，必需氨基酸含量為 23.57% 。戚敏等[20]測(cè)得菲牛蛭凍干粉必需氨基酸含量為 24.37% 。該試驗(yàn)所測(cè)的3種養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉中的必需氨基酸含量為 42.69%～45.31% ，高于前人研究結(jié)果，這可能與所選測(cè)試水蛭的生長(zhǎng)階段、食物來(lái)源及組成、養(yǎng)殖環(huán)境及投喂方式等有關(guān)，其具體原因有待進(jìn)一步研究。

氨基酸中，部分種類氨基酸（如天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、酪氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、精氨酸）具有藥理作用，它們不僅能維持機(jī)體氮平衡，還具有增強(qiáng)免疫力、協(xié)助治療心臟疾病、改善肝功能等作用，被人們稱為藥用氨基酸。該試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3種養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉中均含有9種藥用氨基酸，且含量最高的谷氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、賴氨酸等4種氨基酸均為藥用氨基酸；菲牛蛭中的天冬氨酸和亮氨酸含量最高，且明顯高于寬體金線蛭；而寬體金線蛭中的谷氨酸含量最高，顯著高于菲牛蛭。但3種養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉中的賴氨酸含量差異不顯著。寬體金線蛭中苯丙氨酸含量最高，顯著高于菲牛蛭；而其亮氨酸和纈氨酸含量最低，顯著低于菲牛蛭和日本醫(yī)蛭。菲牛蛭藥用氨基酸含量最高，為 50.06% ；其次是日本醫(yī)蛭，含量為 49.88% ；寬體金線蛭的藥用氨基酸含量最低，為 49.34% 。3種養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉中的藥用氨基酸、藥用氨基酸/總氨基酸比值無(wú)顯著性差異。有研究認(rèn)為，水蛭預(yù)防與治療心血管疾病及降血脂的功效或許與其體內(nèi)的氨基酸含量有關(guān)[26-27]。由此說(shuō)明，3種水蛭具有較好的藥用價(jià)值。

水蛭體內(nèi)最主要的活性成分是水蛭素，是迄今為止發(fā)現(xiàn)自然界最強(qiáng)特異性抗凝血物質(zhì)，主要存在于吸血水蛭唾液腺及唾液中，其藥效優(yōu)于重組水蛭素和肝素，副作用低于重組水蛭素和肝素。不同提取工藝或檢測(cè)方法都會(huì)導(dǎo)致得到的水蛭素含量（抗凝血酶活性）不同。目前抗凝血活性測(cè)試方法主要有生物活性測(cè)定法、免疫測(cè)定法和化學(xué)測(cè)定法等，其中生物活性測(cè)定法最為常用。該試驗(yàn)采用滴定方法測(cè)定3種水蛭的抗凝血酶活性具有一定的科學(xué)依據(jù)。分析結(jié)果顯示，水蛭中抗凝血酶活性受品種影響明顯。3種養(yǎng)殖水蛭冷凍干燥粉中，菲牛蛭最高，日本醫(yī)蛭次之，寬體金線蛭最低，且品種之間存在明顯差異。按照食性原則，水蛭分為吸血型水蛭和非吸血型水蛭。菲牛蛭和日本醫(yī)蛭屬于吸血水蛭，該試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明吸血型水蛭的抗凝血酶活性更強(qiáng)，這與關(guān)世俠等[8.28.29]研究結(jié)果一致。吳志軍等[28]分別采用抗凝血酶、抗胰蛋白酶和抗糜蛋白酶3種檢測(cè)方法測(cè)定了寬體金線蛭、日本醫(yī)蛭、歐洲醫(yī)蛭、菲牛蛭樣品的抗凝血酶活性，發(fā)現(xiàn)菲牛蛭與日本醫(yī)蛭較為接近，且兩者均優(yōu)于寬體金線蛭；菲牛蛭的抗胰蛋白酶活性高于日本醫(yī)蛭，但與寬體金線蛭相當(dāng)；菲牛蛭的抗糜蛋白酶活性優(yōu)于寬體金線蛭，但低于日本醫(yī)蛭。已有研究報(bào)道認(rèn)為，影響水蛭抗凝血酶活性的因素很多，如品種[8，28]、部位[27]、規(guī)格[10]、地域[30]、加工工藝[31]、飽腹程度[8]、食物[32]等。該試驗(yàn)所選3種水蛭均來(lái)源同一區(qū)域且加工工藝一致，其抗凝血酶活性的差異主要是由于品種和食物來(lái)源不同所致。總體而言，若以水蛭素為目標(biāo)大規(guī)模開發(fā)利用水蛭，選擇菲牛蛭和日本醫(yī)蛭更為適宜。

4結(jié)論

3種養(yǎng)殖水蛭均具有良好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和較強(qiáng)的體外抗凝血酶活性，可作為藥食同源的優(yōu)質(zhì)品種進(jìn)行規(guī)模化人工養(yǎng)殖。

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