液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定果蔬中氯蟲(chóng)苯甲酰胺的殘留量

中圖分類號(hào)：TS207.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008-1038（2025）08-0008-05

DOI：10.19590/j.cnki.1008-1038.2025.08.002

Abstract：In order to ensure thequality and safety of fruits and vegetables，the method for determining chlorantraniliprole（CAP） residues in fruitsand vegetables using liquid chromatography -tandem mass spectrometry（LC-MS/MS）was established. The samples were extracted with acetonitrileand purified by PRiME HLB solid-phase extraction column.Acetonitrile and 0.1% formic acid solution +5 mmol/L ammonium acetate were used as the mobile phase.The samples were analyzed using multiple reaction monitoring （MRM）. The CAP showed a good linear relationship in the concentration range of 0.50-50.00ng/mL， ，with a linear correlation coefficient （ R² ）wasO.9996. The limits of quantification（LOQ）was 0.001mg/kg .The recoveries at three levels were in the range of 81.5% to 108% .This method could meet the accurate qualitative and quantitative detection requirements for chlorantraniliprole in fruits and vegetables，providing theoretical support for the quality and safety supervision of produce.

Keywords： Chlorantraniliprole; fruits and vegetables; liquid chromatography-tandem massspectrometry method

氯蟲(chóng)苯甲酰胺（chlorantraniliprole，CAP）作為一種新型廣譜類殺蟲(chóng)劑，可以高效激活鱗翅目類害蟲(chóng)的魚尼丁受體，打開(kāi)鈣離子通道，使細(xì)胞鈣離子過(guò)度流失，從而破壞害蟲(chóng)的生理平衡，導(dǎo)致其死亡[I-3]。CAP憑借持效性好、毒性低以及效率高等優(yōu)點(diǎn)4，在水果和蔬菜的病蟲(chóng)害防治上顯示出良好的效果。鑒于CAP在食用農(nóng)產(chǎn)品中的廣泛應(yīng)用，《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB2763—2021）規(guī)定水果和蔬菜中CAP的臨時(shí)最大殘留限量為 0.01～30mg/kg 。水果和蔬菜作為我國(guó)居民膳食主要的食物組成部分，其中CAP殘留量可以通過(guò)食物鏈在生物體中進(jìn)行累積，對(duì)人體健康產(chǎn)生危害。因此，對(duì)果蔬中CAP殘留狀況進(jìn)行評(píng)價(jià)是十分必要的。

常用的CAP檢測(cè)方法有氣相色譜法液相色譜法8-10氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法II-I、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（liquidchromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）[13-16。LC-MS/MS在果蔬農(nóng)藥殘留檢測(cè)中具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)和定量準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，成為該領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用的分析技術(shù)。目前，農(nóng)藥殘留檢測(cè)常用的前處理方法中，QuEChERS （Quick、Easy Cheap Effective Rugged Safe）凈化方法具有操作簡(jiǎn)單、效率高等特點(diǎn)[I7-18]，但在處理色素、脂類和有機(jī)酸含量較高的果蔬樣品時(shí)，凈化效果有限，易造成基質(zhì)干擾；分散固相萃取凈化方法操作快捷，但選擇性較差；固相萃取凈化方式凈化能力較強(qiáng)，但步驟繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，不利于批量樣品的快速篩查20。一步式凈化型PRiMEHLB固相萃取柱無(wú)需活化，具有良好的通用性和選擇性，可高效去除常見(jiàn)基質(zhì)干擾物并保留目標(biāo)分析物，顯著降低基質(zhì)效應(yīng)，目前，該技術(shù)在果蔬農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用一步式凈化型PRiMEHLB固相萃取柱進(jìn)行樣品前處理，基于LC-MS/MS 技術(shù)，建立了果蔬中CAP的快速分析方法，適用于果蔬樣品的批量快速檢測(cè)，為果蔬中CAP的監(jiān)測(cè)提供可靠的分析依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料與試劑

水果（蘋果、桃、葡萄、柑橘），市售；蔬菜（番茄、芹菜、茄子、韭菜、馬鈴薯、蘿卜、豆角、甘藍(lán)），市售。

Oasis PRiMEHLB固相萃取柱 （150mg/3mL） ，美國(guó)Waters公司;Poroshell 120EC-C₁₈ ，美國(guó)Agilent公司；CAP（純度 ?98.0% ，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；甲醇、乙腈，色譜純，德國(guó)默克公司；乙酸銨、甲酸，LC-MS級(jí)，德國(guó)霍尼韋爾Fluka公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent1290-6470液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國(guó)Aglient公司；電子分析天平，ME204，梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司；3-18K冷凍離心機(jī)，德國(guó) sigma公司；渦旋混合器，MS3digital，德國(guó)IKA公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取適量CAP標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解，配置成1.0mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液備用。用空白試樣基質(zhì)溶液將CAP標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成 0.5?1.0?5.0?10.0?20.0?50.0ng/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.2 樣品前處理

稱取 10g （精確至 0.01g） 試樣于 50mL 離心管中，加入 5g 氯化鈉，再加入 20mL 乙腈，渦旋混勻后，6000r/min 離心 5min ，上清液采用一步式凈化型PRiMEHLB固相萃取柱凈化，凈化液經(jīng)過(guò)濾后使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。

1.3.3 儀器條件

色譜條件：參考卞英芳等的條件。色譜柱為Poroshell 120EC-C₁₈（2.1mm×100mm，2.7μm） ；流動(dòng)相A為 0.1% 甲酸水溶液 +5mmol/L 乙酸銨，流動(dòng)相B為乙腈；流速為0.3mL/min ；柱溫 35^°C ；進(jìn)樣體積為 5μL ：梯度洗脫條件 ：0～2min，5%B;2～6min，5%95%B;6～8min 95%B;8-8.1min，95%-5%B;8.1-10min，5%B°

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESD，正離子模式下采用MRM模式；毛細(xì)管電壓 4.5kV ；干燥氣溫度 300^qC ；鞘氣溫度 325^°C 。

1.4數(shù)據(jù)處理

通過(guò)MassHunter采集軟件 Acquisition 10.1進(jìn)行質(zhì)譜數(shù)據(jù)的采集，采用MassHunter定量分析軟件QuantitativeAnalysis10.1對(duì)CAP殘留量進(jìn)行定性定量分析。利用Excel2021進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2結(jié)果與分析

2.1質(zhì)譜條件的選擇

采用自動(dòng)優(yōu)化方式對(duì)CAP標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)與負(fù)離子模式相比，在正離子模式下待測(cè)物具有較高的響應(yīng)信號(hào)，主要生成 [M+H] +準(zhǔn)分子離子峰。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行質(zhì)譜條件優(yōu)化，得到了CAP的最佳質(zhì)譜參數(shù)（見(jiàn)表1）。

表1MRM參數(shù)Table1 TheMRMparameters

注：“*”為定量離子。

2.2 液相色譜條件的優(yōu)化

CAP是一種弱極性化合物，因此，選用 C₁₈ 色譜柱作為分離柱。在此基礎(chǔ)上，對(duì)多種流動(dòng)相體系進(jìn)行比對(duì)評(píng)估，包括乙腈-水、乙腈 -0.1% 甲酸水溶液、乙腈 -0.1% 甲酸 +5mmol/L 乙酸銨、甲醇-水、甲醇 -0.1% 甲酸水溶液、甲醇 -0.1% 甲酸 +5mmol/L 乙酸銨等。結(jié)果表明，乙腈 -0.1% 甲酸 +5mmol/L 乙酸銨作為流動(dòng)相時(shí)，目標(biāo)物的信號(hào)響應(yīng)最強(qiáng)，可能是由于CAP和乙腈均是弱極性物質(zhì)，乙腈對(duì)CAP的洗脫效果更好。在正離子模式下，甲酸和乙酸銨可為化合物離子化提供所需的 H⁺ ，故選擇乙腈- -0.1% 甲酸 +5mmol/L 乙酸銨作為流動(dòng)相。同時(shí)，為避免基質(zhì)干擾，提高分離效率及色譜柱的使用壽命，采用梯度洗脫進(jìn)行色譜分離。

2.3 前處理方法的選擇

2.3.1 提取試劑的選擇

在陰性樣品中添加目標(biāo)物，分別采用乙腈、乙酸乙酯、甲醇和丙酮作為提取液進(jìn)行提取。回收率結(jié)果如表2所示，甲醇、丙酮和乙酸乙酯對(duì)目標(biāo)化合物的提取回收率低于乙腈，故選用乙腈作為提取試劑。

表2不同提取試劑的回收率 （n=3 ）

Table2Recoveryofdifferentextractionsolvents （n=3）

2.3.2凈化方式的選擇

本實(shí)驗(yàn)比較了PRiMEHLB固相萃取柱凈化方式和CleanertMAS-Q萃取凈化方式。結(jié)果表明，使用PRiMEHLB固相萃取柱進(jìn)行凈化的回收率高于CleanertMAS-Q，并且對(duì)于顏色較深、色素含量較大的樣品，凈化效果明顯，可降低基質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。故選擇PRiMEHLB固相萃取柱作為凈化方式。

2.4方法的線性范圍、定量限以及基質(zhì)效應(yīng)

將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配制成一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（0.5?1.0，5.0，10.0，20.0，50.0ng/mL） ，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，CAP在 0.5～50.0ng/mL 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程為 y=4428.868416x-80.5，R²= 0.999 6。

以信噪比 （S/N） 為10時(shí)對(duì)應(yīng)的濃度確定定量限（LOQ） 。根據(jù)農(nóng)業(yè)部公告第2386號(hào)《農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制指南》附錄A中果蔬基質(zhì)材料選擇規(guī)定，通過(guò)對(duì)蘋果、桃、葡萄、柑橘、番茄、芹菜、茄子、韭菜、馬鈴薯、蘿卜、豆角、甘藍(lán)等陰性樣品添加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定，得出CAP在12種典型果蔬基質(zhì)中的LOQ為0.001mg/kg 。

在空白試樣基質(zhì)溶液及乙腈中分別添加相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，考察果蔬提取物基質(zhì)對(duì)CAP定量結(jié)果的影響，結(jié)果見(jiàn)表3。由表知，在 0.001，0.01，0.05mg/kg 三個(gè)添加水平下，樣品的基質(zhì)效應(yīng)在 84.18%～113.29% 之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard error，RSD）均小于 10% 。

歐盟SANTE/11312/2021v2指出，當(dāng)信號(hào)抑制或增強(qiáng)超過(guò) 20% 時(shí)，需對(duì)基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行校正。本研究中測(cè)得的基質(zhì)效應(yīng)均在 80%～120% 范圍內(nèi)，不需進(jìn)行修正，符合定量要求。

表3不同基質(zhì)中CAP的基質(zhì)效應(yīng) （n=6 Table3Matrixeffectsofchlorantraniliproleindifferent matrices （n=6）

2.5 精密度和準(zhǔn)確度

選取 1.0?10.0.50.0ng/mL 的CAP標(biāo)準(zhǔn)溶液，對(duì)其進(jìn)行日內(nèi)和日間精密度及準(zhǔn)確度的評(píng)估，每個(gè)濃度水平進(jìn)行6次平行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。其中，準(zhǔn)確度以相對(duì)偏差（relativeerror，RE）表示，而精密度以RSD值表示。結(jié)果表明，日內(nèi)和日間RSD分別為 1.81%～3.87% 和 1.87% ～3.34% ，日內(nèi)和日間RE分別為- -1.13%～1.70% 和 -0.46% ～1.48% ，穩(wěn)定性良好，滿足定量分析要求。

表4精密度和準(zhǔn)確度 （n=6）

Table4 Accuracyand precision （n=6）

表5不同基質(zhì)中CAP的回收率 （n=6 ！Table5Recoveryofchlorantraniliprole indifferentmatrices（n=6）

2.6 回收率和重復(fù)性

采用標(biāo)準(zhǔn)添加法，在空白水果和蔬菜基質(zhì)中添加3個(gè)不同濃度的CAP，進(jìn)行回收率試驗(yàn)，各濃度進(jìn)行6次平行試驗(yàn)，結(jié)果如表5所示。結(jié)果表明，CAP在水果和蔬菜陰性樣品中的回收率在 81.5%～108% 之間，表明該方法具有良好的回收效果，準(zhǔn)確度高，能滿足定量分析要求。回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在 2.11%～6.24% 之間，根據(jù)《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》（NY/T788—2018），回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均符合對(duì)應(yīng)添加水平的要求，表明該方法重復(fù)性好，能滿足實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的需要。

2.7 實(shí)際樣品檢測(cè)

應(yīng)用所建立的CAP殘留量檢測(cè)方法對(duì)市售60批次水果和蔬菜樣品進(jìn)行測(cè)定，樣品中均未檢出CAP。

3結(jié)論

基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，結(jié)合PRiMEHLB固相萃取方法，建立了一種適用于果蔬中CAP殘留量的檢測(cè)分析方法。該方法簡(jiǎn)單高效、檢出限低、線性范圍寬、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高、精密度好，具有較強(qiáng)的適用性和實(shí)用性，可滿足產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)和控制的要求。

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