M2型丙酮酸激酶對(duì)乳腺癌評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)研究

劉云龍 陳紹森 朱文斌 段文博 李月 岳麗玲

摘 要：目的：研究M2型丙酮酸激酶（PKM2）及富含脯氨酸蛋白11（PRR11）在乳腺癌病灶組織中的表達(dá)情況及預(yù)后分析。方法：本研究選擇自2020年10月至2021年9月間于我院住院治療并確診為乳腺癌的病理標(biāo)本共計(jì)96例，確診為乳腺癌，分析病例癌組織內(nèi)及癌組織周圍的PKM2及PRR11的陽性表達(dá)情況，記錄病理標(biāo)本對(duì)應(yīng)的患者腫瘤大小、TNM分期及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果：乳腺癌組織中PKM2的陽性表達(dá)率為91.67%（88/96），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；乳腺癌組織中PRR11的陽性表達(dá)率為82.29%（79/96），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；PKM2、PRR11水平與腫瘤大小、TNM分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況間具有強(qiáng)相關(guān)性。結(jié)論：PKM2及PRR11在乳腺癌中均呈現(xiàn)高表達(dá)趨勢(shì)，與乳腺癌的發(fā)展進(jìn)程存在不同程度的相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：PKM2，PRR11，乳腺癌，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，TNM分期，免疫組化

DOI編碼：10.3969/j.issn.1002-5944.2023.04.060

基金項(xiàng)目：本文受齊齊哈爾市科技攻關(guān)項(xiàng)目“兩種M2型丙酮酸激酶（PKM2）激活劑抗乳腺癌的作用研究”（項(xiàng)目編號(hào)：LHYD-2021104）資助。

Study on Evaluation Criteria of M2 Pyruvate Kinase for Breast Cancer

LIU Yun-long CHEN Shao-sen ZHU Wen-bin DUAN Wen-bo LI Yue YUE Li-ling

（The Second Affi liated Hospital of Qiqihar Medical College）

Abstract： Objective： To investigate the expression and prognosis of M2 pyruvate kinase （PKM2） and proline-rich protein 11 （PRR11） in breast cancer lesions. Methods： This study chose the pathological specimens of a total of 96 patients diagnosed with breast cancer treated in the hospital from October 2020 to September 2021， analyzed the positive expression of PKM2 and PRR11 within and around cancer tissues， record the tumor size， TNM staging and distant metastasis of pathological specimens of patients. Results： The positive expression rate of PKM2 in breast cancer tissues was 91.67% （88/96）， which was statistically signifi cant （P<0.05）. The positive expression rate of PRR11 in breast cancer tissues was 82.29% （79/96）， which was statistically signifi cant （P<0.05）. PKM2 and PRR11 levels were strongly correlated with tumor size， TNM stage and distant metastasis. Conclusion： PKM2 and PRR11 are highly expressed in breast cancer， which are correlated with the development of breast cancer to varying degrees.

Keywords： PKM2， PRR11， breast cancer， distant metastasis， TNM staging， immunohistochemical

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7%～10%，已成為威脅婦女健康的主要病因[1]。PKM2是癌癥組織中的一種特異性酶，在很多腫瘤中存在高度表達(dá)情況，是有氧糖酵解中的一種關(guān)鍵酶，PRR11是位于染色體17q11上的新型基因，有標(biāo)準(zhǔn)研究表明[2]其與細(xì)胞增殖、細(xì)胞癌變存在聯(lián)系。本研究旨在對(duì)以上兩種物質(zhì)同乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展間存在的聯(lián)系進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選擇自2020年10月至2021年9月間于我院住院治療并確診為乳腺癌的病理標(biāo)本共計(jì)96例，入組的患者均行手術(shù)病灶切除或穿刺活檢確診為乳腺癌。其中男患者1人，女患者95人，年齡分布在29～70歲之間，平均年齡（42.46±17.71）歲。所有參與本實(shí)驗(yàn)的入組患者或家屬均已簽署知情同意書，且本研究已通過我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意開展。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)

患者均經(jīng)手術(shù)后病理或穿刺活檢確診為乳腺癌，入組病理對(duì)應(yīng)患者均未進(jìn)行靶向治療或放化療，并于病灶內(nèi)及病灶周圍邊緣5cm處也進(jìn)行病灶采集，進(jìn)行病理切片。

1.3 儀器與設(shè)備

PKM2抗體及PRR11抗體均由美國 Santa Cruz公司供應(yīng)。免疫組織化學(xué)試劑盒均由北京上海梵態(tài)生物科技有限公司提供。二氨基聯(lián)苯胺試劑由上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司提供。實(shí)驗(yàn)用顯微鏡是由日本奧林巴斯公司生產(chǎn)的CX33型病理科用顯微鏡。

1.4 方法

病理組織進(jìn)行切片，以5μm厚度進(jìn)行連續(xù)切片，將切片浸泡于50mmol/L的乙二胺四乙酸溶液中，冷卻后水洗至室溫，滴注山羊血清封閉液，置于室溫中20min，將切片上多余液體甩掉，加入PKM2多克隆抗體或PRR11多克隆抗體，置于4℃環(huán)境中過夜，而后加入SP9000生物素標(biāo)記，置于37℃環(huán)境中45min，并加入二氨基聯(lián)苯胺顯色40s，再用蘇木精復(fù)染，用乙醇脫水后進(jìn)行中性封固。

1.5 觀察指標(biāo)

選擇兩名副高級(jí)及以上職稱病理科醫(yī)生對(duì)病理切片進(jìn)行雙盲法審閱，注意觀察時(shí)避開腫瘤邊界及腫瘤壞死區(qū)域，PKM2及PRR11均以細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)棕黃色顆粒則記為該指標(biāo)下的陽性細(xì)胞。判斷表達(dá)應(yīng)用半定量積分法，根據(jù)染色的強(qiáng)度及陽性細(xì)胞比例將半定量積分記為0～3分。其中評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)為：著色深記為3分；中等著色記為2分；輕度著色記為1分；未著色記為0分。陽性細(xì)胞比例為隨機(jī)視野中選擇100個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，若計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)比例≥50%為3分；25%～50%記2分；6%～24%記1分；≤5%記0分。將以上兩組得分相加，總分0～1分為陰性（-）；2分為弱陽性（+）；2～4分為中陽性（++）；5～6分為強(qiáng)陽性（+++）。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 腫瘤及周圍組織陽性表達(dá)情況

乳腺癌組織中PKM2的陽性表達(dá)率為91.67%（88/96）、癌旁組織中PKM2的陽性表達(dá)率為51.04%（49/96），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；乳腺癌組織中PRR11的陽性表達(dá)率為82.29%（79/96）、癌旁組織中PRR11的陽性表達(dá)率為48.96%（47/96），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。具體情況如表1所示。

2.2 PKM2及PRR11同乳腺癌發(fā)展的相關(guān)性

PKM2水平同對(duì)應(yīng)患者的腫瘤大小、TNM分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況間具有強(qiáng)相關(guān)性（r=4.964；6.898；5.031，P=0.002；0.000；0.001）；PRR11水平同對(duì)應(yīng)患者的TNM分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況間具有強(qiáng)相關(guān)性（r=7.121；4.993，P=0.000；0.002），同腫瘤大小間無明顯相關(guān)性（r=0.112，P=0.863）。

3 討 論

乳腺癌是由乳房組織發(fā)展成的癌癥。乳房是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的，乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。有研究人員證實(shí)高濃度的葡萄糖可促使PKM2賴氨酸305位點(diǎn)乙酰化，PKM2 K305乙酰化使得PKM2酶活性受到抑制，同時(shí)促使PKM2與伴侶分子HSC70結(jié)合，經(jīng)分子伴侶介導(dǎo)的自噬（CMA）在溶酶體中被降解。此外在進(jìn)一步的試驗(yàn)中，研究人員通過異位表達(dá)PKM2 K305Q突變體的方式證實(shí)PKM2乙酰化修飾可促使腫瘤細(xì)胞中糖酵解中間產(chǎn)物累積，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖及腫瘤生長[3]。

PRR11是一種新型的可以調(diào)節(jié)S期及控制細(xì)胞有絲分裂過程的細(xì)胞周期相關(guān)基因。有許多的研究證實(shí)了PRR11蛋白對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后及生物細(xì)胞存活周期有著一定的指導(dǎo)作用。因此PRR11是一個(gè)新的潛在的癌癥診斷及治療靶點(diǎn)，因此對(duì)于PRR11的研究，對(duì)腫瘤診斷、預(yù)防及治療有重要意義，值得對(duì)其進(jìn)行關(guān)注研究。有研究得出PRR11基因在多種癌癥中表達(dá)異常，這種異常表達(dá)可能與癌癥的發(fā)生和發(fā)展存在著一定的關(guān)系[4]。PRR11癌基因在肺癌、胰腺癌和胃癌中高表達(dá)，且與疾病進(jìn)展存在相關(guān)性。但對(duì)于PRR11同乳腺癌間的關(guān)系目前尚無研究，為本研究提供了一個(gè)新的思路[5]。

本研究選擇了PKM2及PRR11兩種指標(biāo)，分析其在乳腺癌病灶組織中的表達(dá)情況，以及兩種指標(biāo)同乳腺癌患者預(yù)后間的關(guān)系情況。得出了PKM2及PRR11在腫瘤中均存在高表達(dá)的情況，且同腫瘤的進(jìn)展間存在著一定的聯(lián)系，并具有一定的相關(guān)性。因此本研究結(jié)果提示我們，對(duì)于PKM2及PRR11指標(biāo)的檢測(cè)可以有效地發(fā)現(xiàn)乳腺癌的存在，并對(duì)乳腺癌的后續(xù)治療提供一定的指導(dǎo)作用，為臨床提供一定的依據(jù)，同時(shí)給患者提供了更大的生存機(jī)會(huì)。因此本方法值得于臨床中推廣使用。但本研究仍有一些不足之處，如入組患者較少等，我們還會(huì)在日后的研究中繼續(xù)完善，使得統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)更具說服力。

參考文獻(xiàn)

[1]郭一萌，楊靜，嚴(yán)虹霞，等.二甲雙胍對(duì)乳腺癌患者預(yù)后影響的Meta分析[J].腫瘤研究與臨床，2019，31（1）：41-46.

[2]宋霖，張寧.PXDN表達(dá)水平對(duì)乳腺癌患者術(shù)后遠(yuǎn)期生存及預(yù)后的價(jià)值[J].臨床血液學(xué)雜志，2018，31（10）：772-776.

[3]朱志陽，陳真?zhèn)ィ惖榈椋?M2型丙酮酸激酶和富含脯氨酸蛋白11在乳腺癌組織的表達(dá)及其臨床意義[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2020，37（4）：728-730.

[4]賀帥，劉欣媛，馬俊兵，等.乳腺癌中SIRT5、PKM2及HK2的表達(dá)及其意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2020，36（5）：520-523.

[5]王峰，李梅，朱建偉，等.SIRT3在乳腺癌中的表達(dá)與臨床預(yù)后的相關(guān)性分析[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2017，36（4）：524-529.

作者簡(jiǎn)介

劉云龍，碩士，副主任醫(yī)師，副教授，主要從事腫瘤外科、普胸外科常見疾病的診斷、治療及研究。

（責(zé)任編輯：劉憲銀）