Ｇｌｕｔ－１和ＶＥＧＦ在血管瘤和血管畸形中的表達(dá)及意義

[摘要]目的：檢測葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白－1(Glut－1)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)在血管瘤和血管畸形中的表達(dá)，探討他們?cè)谘芰霭l(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法：采用免疫組化SABC法檢測30例增殖期血管瘤，30例消退期血管瘤，22例血管畸形(10例蔓狀血管瘤和12例海綿狀血管瘤)及5例正常皮膚組織中Glut－1和VEGF的表達(dá)。結(jié)果：增殖期血管瘤中Glut－1、VEGF的表達(dá)均顯著高于消退期血管瘤、血管畸形和正常皮膚(P＜0.01)，消退期血管瘤中Glut－1的表達(dá)也明顯高于血管畸形和正常皮膚(P＜0.01)，而消退期血管瘤中VEGF的表達(dá)與血管畸形，正常皮膚的差異不具有顯著性(P＞0.05)。結(jié)論：Glut－1和VEGF在血管瘤的發(fā)生發(fā)展中可能起到很重要的作用，通過檢測Glut－1在血管瘤和血管畸形中的表達(dá)情況能夠比較準(zhǔn)確的區(qū)分血管瘤和血管畸形，Glut－1或許可以作為區(qū)分血管瘤和血管畸形的一種較特異的參考指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞]血管瘤；血管畸形；Glut－1；VEGF；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號(hào)]R732.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008－6455(2006)03－0295－03

皮膚血管瘤是嬰幼兒很常見的一種血管內(nèi)皮細(xì)胞良性腫瘤，組織學(xué)特征表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞過度增殖。內(nèi)皮細(xì)胞增殖失常雖然是血管瘤發(fā)病機(jī)制中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，但具體的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化SABC法檢測Glut－1和VEGF在不同時(shí)期血管瘤和血管畸形及正常皮膚中的表達(dá)，從而探討Glut－1和VEGF在血管瘤發(fā)生發(fā)展中所起的作用，旨在初步探討血管瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。

1 材料和方法

1．1 研究對(duì)象：取我院病理科2000年1月至2005年12月經(jīng)病理證實(shí)為血管瘤的手術(shù)切除標(biāo)本87例，其中男42例，女45例，年齡1個(gè)月～35歲。標(biāo)本采用中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，制成4μm厚連續(xù)切片，HE染色后光鏡下按Mulliken標(biāo)準(zhǔn)分類，其中增殖期血管瘤30例，消退期血管瘤30例，血管畸形22例(10例蔓狀血管瘤，12例海綿狀血管瘤)，所有患者術(shù)前均未做任何治療，術(shù)后經(jīng)病理證實(shí)。另取5例含血管的小兒包皮環(huán)切標(biāo)本做對(duì)照。

1．2 檢測方法：①Glut－i、VEGF的檢測：兔抗人Glut－1單克隆抗體(工作濃度1:100，NEO Mark公司)、兔抗人VEGF多克隆抗體(工作濃度1:50，Santa Cruz公司)、即用型SABC試劑盒，DAB顯色試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司。采用SABC法檢測兩者在血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)，詳細(xì)步驟按照操作說明書進(jìn)行。用0.01mol/L的PBS液(pH7.4)代替一抗作陰性對(duì)照。鏡下Glut－1以血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿和胞膜出現(xiàn)棕黃色或棕褐色為陽性反應(yīng)，VEGF以血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿出現(xiàn)棕黃色或棕褐色為陽性反應(yīng)。②圖像分析：采用HMIA－2000高清晰度采色醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，每張切片于400倍鏡下，隨機(jī)挑取10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)血管內(nèi)皮細(xì)胞，共1000個(gè)細(xì)胞中含陽性細(xì)胞數(shù)，換算成陽性百分?jǐn)?shù)，即陽性表達(dá)率。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS－13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，各指標(biāo)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，對(duì)不同分組間的比較采用方差分析，P＜0.01差異具有顯著性意義。

2 結(jié)果

2．1 血管內(nèi)皮細(xì)胞中Glut－1，VEGF的表達(dá)見表1。

2．2 結(jié)果顯示Glut－1在增殖期血管瘤組中的表達(dá)率明顯高于消退期血管瘤，血管畸形(蔓狀血管瘤和海綿狀血管瘤)及正常皮膚組，差異有極顯著性(P＜0.01)。在消退期血管瘤組中的表達(dá)率也高于血管畸形及正常皮膚組織(P＜0.01)，VEGF在增殖期血管瘤組中的表達(dá)率明顯高于消退期血管瘤和血管畸形及正常皮膚組(P＜0.01)，而消退期血管瘤組中的表達(dá)與血管瘤形和正常皮膚組的差異無顯著性(P＞0.05)。

3 討論

3．1 先天性血管病變的分類：Mullinken根據(jù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖狀態(tài)，將先天性血管病變分為血管瘤和血管畸形。二者的臨床表現(xiàn)、組織學(xué)特征及血管瘤增殖標(biāo)志物有著明顯的區(qū)別。血管瘤是由異常增殖的血管內(nèi)皮細(xì)胞組成，而血管畸形是血管的異常擴(kuò)張和溝通，生物學(xué)特性與正常血管內(nèi)皮細(xì)胞一致，通常在出生時(shí)已存在，增長速度和身體的發(fā)育成正比例，不會(huì)自行消退。

由于Mullinken分類法是以血管瘤和血管畸形的組織結(jié)構(gòu)、生物學(xué)特性以及各種增殖標(biāo)記物的差異為依據(jù)，從本質(zhì)上揭示了血管瘤和血管畸形的區(qū)別，能夠更好的指導(dǎo)血管病變的診斷、治療及預(yù)后，因此已經(jīng)被越來越多的臨床醫(yī)生接受，并應(yīng)用于臨床實(shí)踐中。

3．2 血管瘤和血管畸形中VEGF的表達(dá)：已證實(shí)VEGF與內(nèi)皮細(xì)胞分裂，血管基膜及細(xì)胞外基質(zhì)的選擇性降解，內(nèi)皮細(xì)胞的遷移等血管形成的重要環(huán)節(jié)有關(guān)。具有誘導(dǎo)活體血管形成，調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的多種基因表達(dá)，可導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞胞漿內(nèi)暫時(shí)性鈣積聚，分裂，遷移等直接作用，還有獨(dú)特的促血管通透性的作用，是血管形成和血管滲透性的主要調(diào)節(jié)者。在生理?xiàng)l件下體內(nèi)的大部分細(xì)胞VEGF的表達(dá)極低。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示增殖期血管瘤中VEGF的表達(dá)明顯高于血管畸形和正常皮膚，且增殖期血管瘤中的表達(dá)明顯高于消退期，提示VEGF在血管瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用，是判斷血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖與否的一項(xiàng)具有指導(dǎo)意義的指標(biāo)。

3．3 血管瘤和血管畸形中Glut－1的表達(dá)：Glut是介導(dǎo)細(xì)胞攝取葡萄糖的主要載體，到目前為止己經(jīng)有八種葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(glucouse transporters)被鑒定(Glutl－5和Glut7－9)，Glut－1是已知的分布最為廣泛的轉(zhuǎn)運(yùn)體，然而在正常組織Glut－1的表達(dá)主要局限于紅細(xì)胞和血－組織屏障的內(nèi)皮，包括腦、眼、神經(jīng)和胎盤，在其他組織細(xì)胞中的表達(dá)量往往很低。Glut－1表達(dá)增高已經(jīng)在卵巢癌、乳腺癌等許多腫瘤中證實(shí)，表明Glut－1的過度表達(dá)與腫瘤的發(fā)展有著密切地聯(lián)系。

腫瘤細(xì)胞生長主要是由葡萄糖代謝來提供能量支持的過程，Glut幾乎出現(xiàn)于所有細(xì)胞的細(xì)胞膜，并且是葡萄糖進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的主要途徑。Cooper R等人認(rèn)為腫瘤組織的快速生長導(dǎo)致局部糖原含量減少和細(xì)胞缺氧，以致Glut－1蛋白的表達(dá)增加，從而增加腫瘤組織對(duì)葡萄糖的攝入，為腫瘤組織的快速生長提供能量。血管瘤的一個(gè)重要的生物學(xué)特征就是血管內(nèi)皮細(xì)胞的大量增殖，這樣就和別的腫瘤一樣在局部形成一個(gè)缺氧微環(huán)境，糖原含量也急驟減少，HIF－1大量表達(dá)，從而促使了HIF下游除Glut－1外CAIX和VEGF等基因的轉(zhuǎn)錄。Glut－1作為一種缺氧標(biāo)志物，此時(shí)在HIF－1通路和氧化磷酸化雙重調(diào)節(jié)下致使Glut－1基因大量轉(zhuǎn)錄，Glut－1顯著增多。一些研究表明Glut－1和血清生長因子如EGF、bFGF、PDGF存在正向調(diào)控，但對(duì)于癌基因和Glut－1表達(dá)的關(guān)系仍有爭論，有研究表明存在陽性關(guān)聯(lián)，而另外一些研究則提示陰性關(guān)聯(lián)。為了更深入一步地理解Glut－1在血管瘤中過度表達(dá)的生物學(xué)意義，進(jìn)一步研究Glut－1和一些增殖標(biāo)志物、癌基因、生長因子之間的聯(lián)系是非常必要的。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Glut－1在血管瘤中均有表達(dá)(在增殖期血管瘤中高表達(dá))，而在血管畸形中全部為陰性(與J.Leon－Villapalos等人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似)，這就表明Glut-1對(duì)血管瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖起著重要的作用，與血管瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系，提示可將其作為鑒別血管瘤和血管畸形的一種參考依據(jù)，特別是對(duì)于臨床上診斷有困難的病例。此外針對(duì)Glut－1在血管瘤發(fā)生發(fā)展中所起到的重要作用，可以考慮將其作為血管瘤治療的新靶點(diǎn)。己有研究者將Glut－1的反義RNA轉(zhuǎn)染到腫瘤細(xì)胞中抑制Glut－1mRNA的表達(dá)使得腫瘤細(xì)胞的生長明顯減少。另外還可以將化療藥物與葡萄糖相結(jié)合提高血管瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中藥物的蓄積，從而加強(qiáng)治療效果。但是Glut－1是通過哪些途徑促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，它和生長因子之間是如何相互協(xié)調(diào)促進(jìn)血管瘤的發(fā)生發(fā)展，最后表達(dá)水平為何降低，這些問題均有待于進(jìn)一步深入研究。