不同斑試材料和加樣劑量對斑試皮膚反應結果的影響

[摘要]目的：評估斑試材料、劑量、時間、抗原、濃度等因素對斑貼試驗結果的影響。方法：采用國際標準(國際標準芬蘭小室，Finn－chamber)、日本POLA、中國中亞牌三種材料，對男、女各22名受試者背部進行斑貼試驗，濃度為十二烷基硫酸鈉(2％、1％、0.5％)、丙二醇(20％、10％)、戊二醇(20％、10％)、原濃度腮紅，對照物為生理鹽水和蒸餾水。結果：Finn－chamber加樣劑量為0.015ml/0.015g，陽性率為15.76％；日本POLA加樣劑量為0.05ml/0.05g，陽性率為17.69％；中國中亞牌斑試器加樣劑量為0.03ml/0.03g，陽性率為14.11％。日本POLA和中國中亞牌斑試器兩組間陽性率有顯著差別，其余各組間無差別。十二烷基硫酸鈉在24h的反應最高，男性陽性反應率較女性高。結論：按不同的加樣劑量檢測，國際標準Finn－chamber斑試器加樣劑量小、敏感性高，斑貼后的觀察時間、抗原濃度以及受試者性別等因素對斑試皮膚反應陽性結果也有影響。

[關鍵詞]斑貼試驗；斑試材料；十二烷基硫酸鈉

[中圖分類號]R758.23 [文獻標識碼]A [文章編號]1008－6455(2007)03－0359－03

斑貼試驗在臨床應用廣泛，常用來檢測潛在的刺激物或過敏原。在化妝品領域主要用于終產品在人體的安全性評價。既往的研究顯示包括加樣劑量、接觸面積、觀察時間、抗原濃度、斑試物體積在內的多種因素可影響斑貼試驗結果的準確性和重復性。但不同材料及不同容積的斑試器對斑試結果的影響卻少有研究。本試驗觀察了三種不同類型的斑試器、斑貼試驗后不同觀察時間、斑貼抗原濃度以及受試者性別等因素對斑貼試驗結果的影響，對可能影響斑試結果的因素進行了分析，現將結果報道如下。

1 材料和方法

1．1 斑試器：本試驗選用了三種斑試器：①國際標準Finn－chamber(國際標準芬蘭小室)：日本大正富山醫藥品株式會社生產，為鋁質材料，直徑7mm，加樣劑量0.015ml/0.015g；②日本POLA：日本POLA化成工業株式會社生產，直徑15mm，加樣劑量0.05ml/0.05g；③中國中亞牌斑貼試驗膠帶(A型)：上海醫療器械(集團)有限公司衛生材料廠生產，直徑12mm，加樣劑量0.03ml/0.03g。

1．2 斑試物及濃度：十二烷基硫酸鈉是經典的皮膚刺激試驗物，丙二醇和1，2－戊二醇是常用的保濕化妝品原料。本試驗選用了三種不同濃度的十二烷基硫酸鈉(SLS)，分別為2.0％、1％、0.5％，作為斑貼試驗陽性對照；丙二醇的濃度分別為20％、10％，1，2－戊二醇的濃度分別為20％、10％，腮紅；生理鹽水和蒸餾水為斑貼試驗陰性對照。

1．3 受試者：共選擇44名健康受試者，其中女22例，男22例，年齡20～48歲，平均為(27.07±20.80)歲。2個月內使用過糖皮質激素、非甾體抗炎藥及抗組胺藥物者不納入本研究，另外，哺乳或妊娠期婦女、皮膚疾病、曬斑、瘢痕體質或過度文身及遺傳過敏體質者均不列入研究。所有受試者在試驗前均簽訂知情同意書。

1．4 操作方法

1．4．1受試部位：選擇受試者的背部(肩胛骨以下，腰部以上)以及腋中線至腋前線作為受試部位，受試樣品加樣劑量分別為Finn－chamber 0.015ml、POLA 0.050ml和中國中亞牌常規斑試器0.030ml，受試物直接貼敷于皮膚，貼敷時間為24h。斑試物濃度十二烷基硫酸鈉分別為2.0％、1％、0.5％，作為斑貼試驗陽性對照；丙二醇的濃度分別為20％、10％；1，2一戊二醇的濃度分別為20％、10％；腮紅；生理鹽水和蒸餾水為斑貼試驗陰性對照。試劑配置及加樣過程中均有專人復核。

1．4．2 陽性評估：24h后去除斑試器，受試者靜坐30min，在統一明亮的環境下，參照文獻按標準臨床評估方法對皮膚反應進行評估，去除斑試物當天為1h，第二天為24h，第三天為48h。

1．5 統計學處理：不同斑試材料、男女陽性率、斑試物濃度以及不同觀察時間之間比較均采用X²檢驗。

2 結果

2．1 三種斑試器結果比較(見表1)：以“-、±”為陰性反應，“+～+++”為陽性反應。Finn－chamber加樣劑量為0.015ml/0.0t5g，陽性率為15.76％；POLA加樣劑量為0.05ml/0.05g，陽性率為17.69％：中國中亞牌斑試器加樣劑量為0.03ml/0.03g，陽性率為14.11％。三種斑試器比較，Finn－chamber和POLA斑試器無統計學差異；Finn－chamber和國產斑試器無統計學差異；POLA和國產斑試器問有統計學差異。此外，POLA斑試器脫失3孔，國產斑試器脫失30孔，Finn－chamber斑試器未見脫失。

2．2 男、女皮膚陽性反應比較(見表2)：男性陽性反應率為17.41％，女性陽性反應率為14.34％。經統計學比較兩者有顯著性差異(P＜0.05)。

2．3 斑試物濃度、觀察時間與皮膚陽性反應間的比較(見圖1～2)：以蒸餾水為陰性對照，對不同濃度樣品及不同觀察時間的陽性反應孔數檢驗，結果顯示十二烷基硫酸鈉的濃度與皮膚陽性反應率呈正相關，不同濃度梯度問的結果有統計學差異(P＜0.05)。SLS組，觀察24h組陽性率最高，與48h組相比有統計學差異(P＜0.05)；而其他兩組斑試物，1h組陽性率最高，與24h及48h組相比有統計學差異(P＜0.05)。

3 討論

斑貼試驗在臨床上廣泛用于檢測潛在的刺激物或過敏原，多種實驗因素可影響斑貼試驗結果的準確性和可重復性，如不同斑試物體積或劑量、不同斑試器類型、不同性別以及斑貼試驗后不同時間對試驗結果均有影響。文獻報道體積和劑量對斑試皮膚反應結果有一定影響，隨試驗物劑量增加，皮膚反應程度有增加趨勢。由于POLA和國產斑試器材料相同或相似，僅容量不同，此結果表明增加斑試物的劑量可使斑貼試驗結果陽性率提高；比較Finn－chamber和國產斑試器材料， 雖然Finn－chamber斑試器加樣劑量僅有15μl，但其陽性率仍高于加樣劑量為2倍的國產斑試器，提示Finn－chamber斑試器的鋁制材料比塑料材料有更高的斑貼試驗陽性檢出率。

SLS是強刺激性化學物質，它對皮膚的刺激性和其濃度正相關，因此SLS常被用做斑貼試驗體系的陽性對照物質。本實驗選用了三種不同濃度的SLS在同一受試者身上進行斑貼，結果表明SLS的斑貼試驗陽性率隨濃度下降逐漸降低，各濃度之間有顯著性差異(P＜0.05)。SLS之所以在24h的反應最高，原因是由于濃度不同，SLS出現皮膚屏障破壞最大反應的時間也是不同的，低濃度及短時間的SLS可以引起皮膚屏障功能的破壞，但它只影響角質層脂質及蛋白變化，不引起炎癥反應；但高濃度和長時間SLS刺激不會繼續增加對屏障功能的破壞，而是引起炎癥反應，且炎癥反應至少在6h之后才會出現，這一結果表明本實驗體系的穩定性和可靠性，所得結果是客觀準確的。

不同性別對斑貼試驗結果的影響少有報道。男、女皮膚在生理特點甚至組織結構上有所不同，比如受內分泌影響，男性皮膚皮脂腺較豐富，功能活躍，男性皮膚多毛，通過毛囊的吸收也可能比女性多一些。從質地上看男性皮膚不如女性皮膚細膩，這可能和角質層生理狀態以及含水量有關。本文發現針對同樣的化學物質，在同一試驗體系內男性皮膚比女性皮膚敏感性高。

在化妝品領域內斑貼試驗技術被越來越多地應用于終產品在人體的安全性評價，即預測產品是否可能引起人類皮膚的刺激性或變態反應。在進行這一類臨床評價時應盡量排除上述諸多因素對實驗結果的影響。