溫陽平喘膠囊抗炎平喘作用的實驗研究

摘要：目的：探求溫陽平喘膠囊治療非急性發作期及緩解期的腎虛寒型支氣管哮喘的藥理作用特點及機制。方法：小鼠耳腫脹法、大鼠棉球植入法、豚鼠噴霧致喘法、豚鼠離體氣管螺旋條法等。結果：溫陽平喘膠囊能明顯地抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的急性炎癥及大鼠棉球肉芽腫的慢性炎癥，對延長氯化乙酰膽堿和磷酸組胺等容積混合液所致豚鼠哮喘的潛伏期及松弛組胺引起的豚鼠離體支氣管條的收縮有一定作用。結論：溫陽平喘膠囊具有明顯的抗炎作用及一定的擴張支氣管平滑肌的作用。

關鍵詞：支氣管哮喘；溫陽平喘膠囊；抗炎；平喘

中圖分類號：R285.5

文獻標識碼：A

文章編號：1007—2349(2007)05—0033—02

支氣管哮喘(以下簡稱哮喘)是一種常見的氣道非特異慢性炎癥性疾病，主要表現為氣道上皮損傷破壞、粘膜水腫、增生、支氣管平滑肌收縮、微血管充血、氣道變窄。抗炎、平喘是支氣管哮喘的兩大重要治療方法。溫陽平喘膠囊主要用于非急性發作期及緩解期的腎虛寒型支氣管哮喘的患者，能改善癥狀、體征及肺功能，達到減少哮喘的發作甚至長期緩解的目的。為探求其作用特點及機制進行了本制劑的抗炎與平喘作用的藥效學研究，現將結果報告如下。

1、材料

1.1動物健康ICR封閉群雄性小鼠，體重25～30g，動物級別：清潔級，合格證編號：0001418；SD大鼠，體重150～210g，動物級別：清潔級，合格證編號：0001351。豚鼠體重200～450g，雌雄兼用。動物級別：普通級，合格編證號：0001801。均由昆明醫學院動物科提供。

1.2藥品及試劑 溫陽平喘膠囊，由昆明市中醫醫院提供，批號：20010612；阿司匹林，江蘇淮陰制藥廠，批號：930703—1；地塞米松，天津藥業有限公司，批號991116；氨茶堿片，批號990415—2；二甲苯(分析純)重慶北碚化學試劑廠，批號：20010718；磷酸組胺：上海麗珠東風生物技術有限公司，批號9812200；氯化乙酰膽堿：軍事醫學科學院藥材供應站，批號920418；改良克氏液。

1.3主要儀器電子分析天平(BOSCH)，型號：SAE200，德國；超聲霧化器；麥氏浴槽；LMS—2A型二道生理記錄儀(成都儀器廠)；恒溫箱；玻璃鐘罩；秒表；供氧設備。

2、方法與結果

2.1溫陽平喘膠囊對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響將100只小鼠隨機分為5組，每組20只。分別為：陰性對照組；阿司匹林組(陽性對照，0.30g／kg；溫陽平喘膠囊高、中、低劑量組(4.32g／kg、2.16g／kg、1.08g／kg)。以上各組灌胃給藥(0.1ml／10g)，每日1次，連續6d(阿司匹林組第5d給藥)，末次灌胃給藥后60min，將100％二甲苯(0.02ml／只)滴于小鼠右耳前后兩面，15min后頸椎脫臼致死，立即沿耳廓基線剪下兩耳，用6mm直徑打孔器分別在左右耳廓相同部位打孔取材，用電子分析天平分別稱重。

每鼠右耳片重量減去左耳片重量即為腫脹度。將陰性對照組與給藥組的腫脹度進行統計學處理，并求出抑腫率。

實驗結果表明 溫陽平喘膠囊高、中、低劑量均能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹，與陰性對照組比較差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01)，結果見表1。

2.2溫陽平喘膠囊對大鼠棉球肉牙腫的影響將60只大鼠隨機分為5組，每組12只。分別為：陰性對照組；地塞米松組(陽性對照，0.12mg／kg)；溫陽平喘膠囊高、中、低劑量組(3.32g／kg、1.66g／kg、0.83g／kg)。以上各組大鼠灌胃容積為1ml／100g。溫陽平喘膠囊給大鼠每日1次，連續灌胃給藥15d，于給藥第6d，給大鼠腹部消毒、切口，將兩個已稱重的棉球分別植入兩側腹股溝皮下，為防傷口感染，術后各組大鼠均給予皮下注射慶大霉素(0.2ml／只，每天1次，連續3d)。手術當天地塞米松組給藥0.12mg／kg，隔日1次，共5次。術后第10天頸椎脫臼處死，剝離并取出棉球，在70℃烤箱放置2h后用電子分析天平稱重，減去原棉球重量為肉芽(干)凈重，將各組數據進行統計學處理，并計算抑腫率。

結果表明：溫陽平喘膠囊各劑量均能明顯抑制大鼠棉球肉芽腫，與陰性對照組比較差異有非常顯著性意義(P<0.01)，結果見表2。

2.3溫陽平喘膠囊對豚鼠噴霧致喘的影響實驗前將所有豚鼠放入容積為4L的玻璃鐘罩內，用超聲霧化器(氣霧顆粒直徑為1～5μm)，將2％氯化乙酰膽堿和0.1％磷酸組胺等容積混合液，霧化后噴入玻璃鐘罩內，噴霧15s，觀察豚鼠引喘潛伏期(即從噴霧開始到哮喘發作、呼吸困難，直至抽搐跌倒的時間)，引喘潛伏期超過120s者可認為不敏感，不予選用。將篩選合格的豚鼠隨機分為5組，每組10只。各組分別為陰性對照組，陽性對照組(氨茶堿)，溫陽平喘膠囊高、中、低劑量組(低劑量為臨床推薦用藥劑量豚鼠等效劑量，中、高劑量分別為低劑量的2倍、4倍)。除氨茶堿組外，其余各組均按設定劑量每日給藥1次，連續灌胃7d。第8天上午，包括氨茶堿組在內，各組分別灌胃1h后，將豚鼠放入玻璃鐘罩內，噴霧15s，觀察記錄豚鼠給藥后引喘潛伏期，引喘潛伏期超過3min以3min計，計算出潛伏期延長百分率，結果進行統計學處理，結果見表3。

注：與陰性對照組比較：P<0.05，P(0.01；與給藥前比較：P＜0.01

溫陽平喘膠囊高、中、低劑量均能明顯延長引喘潛伏期，與陰性對照組比較差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01)。

2.4溫陽平喘膠囊對豚鼠離體氣管螺旋條的影響用鐵錘敲擊顱后擊斃豚鼠，立即腹面正中切開頸部皮膚和皮下組織，分離出氣管，自甲狀軟骨下取出約2cm長氣管一段，放入盛有氧飽和浴液的培養皿中仔細剔除氣管周圍結締組織后制備成螺旋條。將螺旋條懸吊于盛有改良克氏浴液的麥氏浴槽中(浴液50ml、PH7.2～7.4、浴液溫度(37±1)℃，并連續通氧。調節負荷為2g，平衡45min后，加入磷酸組胺使浴液中濃度達2×10^-6g／ml，用二道生理記錄儀記錄等長收縮變化。當達最大收縮值后加入第一個量的受試藥，使接觸10min并記錄等長收縮變化，以10min末時下降的格數作為最大舒張值。洗去含藥浴液，重新平衡30min。平衡結束后，重復以上操作，溫陽平喘膠囊先后加入的量分別為0.15ml、0.25ml、0.35ml、0. 50ml，使浴液的終濃度分別達到1.2×10^-2g／ml、2.0×10^-2 g／ml、2.8×10^-2g／ml、4.0X 10^-2g／ml。氨茶堿先后加入的量分別為0.05ml、0.10ml、0.20ml、0.40ml，使浴液的終濃度分別達到1.0X10^-5g／ml 2.0×10^-5g／ml、4.0×10^-5g／ml、8.0×10^-5g／ml。最后加入與受試藥最大量時相等體積的溶劑水(配制受試藥溶液所用的水)，以此作為空白對照。每一條氣管螺旋條只用于觀察一種受試藥不同的四種濃度對痙攣收縮氣管平滑肌的舒張作用。根據記錄結果計算各受試藥的抑制率及拮抗系數。

4種不同濃度的溫陽平喘膠囊均有明顯的松弛磷酸組胺所致離體氣管平滑肌痙攣收縮的作用，并呈量效關系，但其拮抗強度低于氨茶堿，結果見表4、5。

3、討論

20世紀50年代曾認為哮喘是一種氣道平滑肌功能異常性疾病，80年代初提出了哮喘的本質是氣道高反應性，目前認為：哮喘是多種細胞和細胞成分參與的氣道慢性炎癥性疾病，抗炎、平喘是目前支氣管哮喘重要治療方法，西藥仍首推糖皮質激素，副作用大且尚不能根治，尋找有效的防治藥物是臨床及藥物學家的重要課題。盡管中醫藥防治哮喘文獻很多，表現出廣泛的前景和優勢，但大多數局限于臨床療效總結及藥效驗證階段。結合臨床特點，進行歸納整理，同時配合藥效學和毒理學研究，不僅可研制出可靠、高效的新藥，還對促進中醫藥理論的發展有著重要的意義。

中醫學認為哮喘是由于臟腑虧虛，痰飲留伏，外邪引發所致的本虛標實之證。其主要病機是氣逆，主要病理基礎是“痰”，與肺、脾、腎密切相關，尤以腎陽虛為根本原因。在“急則治標緩則治本”的基本治則指導下進行辨證論治。溫陽平喘膠囊是昆明市中醫醫院根據張仲景“病痰飲者，當以溫藥和之”的理論研制并運用多年的院內制劑，溫陽補腎調整機體免疫，祛風解痙以降低氣道高反應性，標本兼顧，虛實并治。主要適應于非急性發作期及緩解期的腎虛寒型哮喘。方中所選的附子、小白附子、麻黃、細辛、半夏。黃芩、杏仁等藥物具有調節機體免疫功能，抗炎，解痙平喘等藥理作用。

本實驗結果表明該制劑對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的急性炎癥模型及大鼠棉球肉芽腫的慢性炎癥模型均有明顯的抑制作用，對延長氯化乙酰膽堿和磷酸組胺等容積混合液所致豚鼠哮喘的潛伏期及松弛組胺引起的豚鼠離體支氣管條的收縮有一定的作用，這與溫熱藥能夠增加下丘腦一垂體一腎上腺功能的研究結論相吻合，而對平滑肌的擴張作用與組方中的麻黃所含的麻黃堿藥理作用也有關，說明溫陽平喘膠囊的作用機制可能主要是通過抗炎從而改善支氣管的高反應性。