甜椒貯藏期病原菌種類及致病性研究

摘要：以亞華15品種甜椒為試材，對甜椒貯藏過程中病原菌的種類、存在部位及致病性進行研究。結果表明：甜椒貯藏前的主要潛伏侵染菌為盤長孢狀刺盤孢，辣椒軟腐病菌和交鏈孢菌，其中果蒂帶菌率最高；貯藏期引起果蒂和果柄腐爛的主要致腐菌為鐮刀菌和辣椒軟腐病菌，主要引起果肉和果蒂發病，同時盤長孢狀刺盤孢也能夠引起果蒂和果肉腐爛；貯藏前的表面消毒處理可以降低貯藏期的病害發生率和發病程度。

關鍵詞：甜椒；潛伏侵染菌；貯藏期病原菌

中圖分類號：S641.3 文獻標識碼：A 文章編號：1006－6500(2008)04－0015－04

甜椒是目前貯藏量和運輸量較大、經濟效益較高的蔬菜種類之一。由于甜椒對低溫敏感，貯藏溫度一般控制在8～12℃，且相對濕度較高，因此貯藏期易造成腐爛。目前，人們已從甜椒的品質和生理方面進行了大量研究。在貯藏保鮮上，尤其是在品種耐貯性、果梗對貯藏的影響、辣椒貯藏生理、辣椒保鮮劑等方面也做了許多工作。然而，研究大多集中在防治甜椒采后腐爛的各種措施上，關于甜椒病原菌種類和規律以及潛伏性侵染研究報道較少。近年來的研究表明，要從根本上解決因微生物引起的果蔬采后腐爛，必須先確定引起腐爛的主要病原菌及其侵染的主要特征，以便更有針對性地制定預防措施。筆者系統研究了甜椒貯藏期引起腐爛的主要病原菌的種類和致病性，為其采后貯運過程中的保鮮和貯藏期的預測提供參考。

1 材料和方法

1.1材料

供試品種亞華15號購于市場。

1.2方法

1.2.1貯藏前甜椒果實與果柄部潛伏侵染的病菌種類調查選取無病、無蟲和無傷口的成熟度一致，顏色鮮艷的甜椒50只，用蘸有清水的吸水紙將果實表面的泥土擦洗干凈，晾干備用。用無菌解剖刀切取果柄中部0.5cm長度、果蒂1／6且帶萼片、果實中部0.5cm×0.5cm大小的組織塊，分別用無菌水沖洗干凈后置于超凈工作臺上分開晾干，隨后分別將其放入70％的酒精中浸泡30s，迅速用滅菌濾紙吸干酒精，轉入1％的次氯酸鈉溶液中浸泡1min，用無菌水清洗3次，再用滅菌濾紙吸干組織塊，植入PDA培養基，27℃恒溫培養2～3d，當培養出的菌落直徑1cm時，用接種針挑取菌絲尖端置于另一含PDA的培養皿內進行培養，重復上述操作2～3次即可得到純化菌種。根據真菌菌絲、分生孢子梗及分生孢子的形態特征進行鑒定，統計辣椒不同部位的病原菌種類及數量。

1.2.2貯藏期病原菌的分離甜椒貯藏前進行兩種處理，然后在15℃貯藏。處理I：消毒處理，先用清水將果實表面清洗干凈，用干凈紗布擦干，然后用75％的乙醇表面消毒，再用紫外線消毒(15w紫外燈下30cm處，照射處理30min)，最后用葡萄保鮮專用袋進行包裝貯藏；處理Ⅱ：未消毒處理，將采摘的果實直接用葡萄專用保鮮袋包裝貯藏。貯藏一個月時，開始調查發病部位的病原菌種類及數量，方法是在辣椒發病部位的病健交界處切取小塊植物組織，進行表面消毒、分離和培養，得到不同菌株。

1.2.3對分離得到的菌株進行病原致病性鑒定將分離純化得到的菌株返接在寄主組織的相對應部位上，如果發病癥狀與該菌株分離前的發病癥狀一致，便可對其致病條件及侵染途徑進行進一步的研究。具體方法如下：

(1)待返接材料的準備。選取健康無病、無蟲、無傷口的辣椒，清水洗凈后，用1％的次氯酸鈉浸泡2min，再用無菌水沖洗干凈，放在超凈工作臺上吹干備用。果肉、果柄和果蒂部位的返接試驗分3組進行，每組15個。

(2)接種病原菌的制備。將待接種菌株在PDA培養基上培養5～7d，長滿孢子后用無菌水配置成孢子懸浮液(濃度為在10×40倍顯微鏡下，每個視野20～40個孢子)。

(3)返接試驗。把已純化的菌株回接被測果實及果梗，分“有傷”和“無傷”兩種接種方式，通過接種觀察病斑發展速度和發病程度，判斷被接菌株致病能力的大小。

(4)有傷接種。分別在不同組織部位上用接種針刺破5個孔，孔眼可集中在一起，使直徑范圍約5mm，用無菌毛筆蘸取菌液涂于刺傷處。

(5)無傷接種。直接用無菌毛筆蘸取菌液涂于接種組織部位。

(6)返接后培養。返接后的組織置于加濕干燥器內培養，蓋口用透氣薄膜隔離以達到保濕、密封、透氣、防污染的作用，培養濕度為90％，溫度15℃，10d后檢查發病情況。

2 結果與分析

2.1辣椒貯藏前病原菌檢測結果

對貯藏前的潛伏病菌進行分離與檢測可以確定引起采后病原菌的最初來源，檢測結果如表1。從甜椒不同組織部位分離的病菌不同，在果肉中分離得到了盤長孢狀刺盤孢，青霉菌和辣椒軟腐病菌；在果蒂中分離到了交鏈孢菌似，盤長孢狀刺盤孢，青霉菌和辣椒軟腐病菌；在果柄中分離得到了灰葡萄孢，交鏈孢菌和辣椒軟腐病菌。從檢測結果看出，果蒂帶菌率明顯高于果肉和果柄組織，主要以辣椒軟腐病菌和交鏈孢菌為主；果肉和果柄中的辣椒軟腐病菌帶菌率也較其它菌多，說明甜椒在貯藏前的潛伏侵染菌主要為辣椒軟腐病菌。另外，交鏈孢菌在果蒂和果柄中的帶菌率相對較高，盤長孢狀刺盤孢在果蒂中的帶菌率比較高，所以這兩種菌也被認為是甜椒潛伏侵染菌。

2.2辣椒貯藏期病原菌的檢測結果

對兩種不同處理(未消毒和消毒)的病果部位進行病原菌分離，結果見表2。由表2看出，未消毒處理果實的發病率明顯高于消毒處理的果實發病率，說明消毒處理在一定程度上降低了病害的發生。鐮刀菌在果實的各個部位均可以分離到且發病普遍較重，主要引起甜椒的果蒂腐爛。灰葡萄孢只存在于果柄中且帶菌率較低。交鏈孢菌也主要引起果蒂腐爛，但通過貯藏前的消毒可以減輕其在果柄的發病。盤長孢狀刺盤孢和青霉菌也能夠引起果蒂和果肉腐爛，但發病率相對較低。辣椒軟腐病菌主要引起果肉發病。

2.3貯藏期主要致腐菌的致病力測定

通過對各病原菌采后致病力的研究，可以確定引起甜椒采后腐爛的主要致腐菌，推斷各致腐菌的不同侵入方式，因此，筆者對甜椒不同部位進行有傷和無傷兩種方式接種病原菌，測定結果見表3。從表3看出，不同病原菌在有傷接種后的發病率均高于元傷接種，說明傷口是甜椒采后腐爛病原菌入侵的一個主要通道。結合表2分析，可以再次證明鐮刀菌主要引起果柄和果蒂腐爛，發病率高，發病程度重。灰葡萄孢和辣椒軟腐病菌只在接種果肉后致病，且有傷接種發病程度明顯高于無傷接種；盤長孢狀刺盤孢和交鏈孢菌在果蒂和果肉中致病，不使果柄腐爛，且盤長孢狀刺盤孢在果蒂上的發病率明顯高于交鏈孢菌，但在果肉上有傷接種時的發病率低于交鏈孢菌，因此，筆者認為交鏈孢菌比盤長孢狀刺盤孢更容易利用果肉組織的營養，迅速從寄主傷口侵入。從表3還可以看出，不同組織部位的致腐菌不相同，而且在接種方式、發病率和發病程度上也有一定的差異。

3 結論與討論

(1)本研究結果表明，在貯藏期，甜椒的果柄、果蒂和果肉均會發生腐爛，且以果柄腐爛最為嚴重。甜椒不同組織部位的優勢致病菌不同。通過返接試驗表明傷口是甜椒采后病原菌侵入的一個主要通道。

(2)通過對甜椒貯藏前的攜帶菌進行分離檢測可以看出，采前分離到的盤長孢狀刺盤孢、青霉菌、辣椒軟腐病菌、灰葡萄孢和交鏈孢菌在甜椒貯藏期發病組織中均可檢測到，這說明這幾種菌是采前侵染，采后致病的，所以，我們應加強采前管理，盡量減少甜椒貯藏前的帶菌率。

(3)在甜椒采后發病組織中分離到了鐮刀菌，但在貯藏前未發現該菌，說明這種菌是采后侵染的，這種菌可能來源于貯藏環境中的附生菌，但具體的來源及侵染途徑還有待于進一步的研究。

(4)在試驗中嘗試在貯藏前對甜椒進行表面消毒來觀測其效果，結果發現表面消毒處理在一定程度上可以降低貯藏期的發病率，原因可能是表面消毒降低了貯藏前的帶菌率。但是采用何種表面消毒方式、最佳劑量的選擇及對貯藏果實有無副作用等工作還有待于更深入和細致地研究。由于不少采后病害是由采前侵染的病原菌引起的，并且對于采前病原菌的控制很難，因此，筆者認為在采前對貯藏果實進行有效的表面消毒處理是必要的。

(5)在試驗中還發現，隨著果柄和果蒂的腐爛，果肉的腐爛程度也隨之加快，因此，在貯藏過程中要對果柄和果蒂采取有效措施加以控制，以不影響甜椒貯藏時的外觀品質。

(6)在致病性接種試驗中可以看出，有傷接種的發病率普遍高于未刺傷接種，因此，推測傷口是病原菌的主要侵入途徑，我們除了在貯藏前需及時對有傷果實進行剔除外，同時還要注意在采收、貯藏和搬運過程中盡量減少傷口的形成。