飼料中脂肪含量對翹嘴紅鲌幼魚消化酶活性的影響

摘要：本文旨在研究不同飼料脂肪含量翹嘴紅鲌消化酶的影響。以魚粉和豆粕作為蛋白源，以魚油為脂肪源，魚油的添加水平分別為2%、4%、6%、8%、10%，，設(shè)計出飼料脂肪含量分別為2.07%、4.28%、7.14%、9.26%、11.17%、15.32%的6種等蛋白（40%左右）、等能（16.21KJ/g左右）的飼料。對19.36±2.17g/尾的試驗翹嘴紅鲌進行60d的養(yǎng)殖，結(jié)果表明：飼料脂肪含量在7.14%時，試驗翹嘴紅鲌胃蛋白酶和肝胰蛋白酶活性均達最大，分別為1216.41U和1599.94U；此時，淀粉酶活性達到最大，胃、腸、肝胰淀粉酶活性分別為85.75U、115.29U和92.87U；腸、肝胰脂肪酶活性也達到最大，分別為752.13U和199.71U；當飼料脂肪含量在9.26%時，試驗魚腸蛋白酶和胃脂肪酶活性達到最大，分別為1934.09U和391.29U。本試驗中飼料脂肪在7.14%～9.26%時，能顯著提高翹嘴紅鲌消化酶活性，促進對飼料的消化利用率。

關(guān)鍵詞：脂肪；營養(yǎng)需求；消化酶活性；翹嘴紅鲌

脂肪是水產(chǎn)動物維持生命活動的主要能源物質(zhì)，它既是脂溶性維生素的載體，也是構(gòu)成其機體組織的要素。脂肪在消化器官內(nèi)被消化酶分解為脂肪酸和甘油而被吸收。一部分脂肪酸和甘油吸收后合成體脂肪保存于組織中，一部分變?yōu)闊崮芄┙o機體活動的需求。則添加適量脂肪既能增加水產(chǎn)動物的能量來源；也可滿足水產(chǎn)動物對脂肪酸的需要，改善飼料的適口性。同時，在飼料中添加適量油脂以提高脂肪含量，將有助于提高蛋白質(zhì)的利用效率，促進魚類的生長，具有節(jié)約蛋白質(zhì)，增加攝食量，提高飼料效率等效果。Takeuchi等發(fā)現(xiàn)虹鱒飼料中的脂肪含量從15%增加到20%時，飼料蛋白質(zhì)的含量從48%下降到35%，對魚類的生長沒有任何影響。但飼料脂肪含量對魚類消化酶活性的影響的研究還較少，本試驗采用梯度法，研究了不同脂肪含量對翹嘴紅鲌消化道中消化酶活性的影響，為弄清脂肪對魚類的作用機理，確定其營養(yǎng)標準和飼料配方提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗魚

翹嘴紅鲌（Erythroculter ilishaeformis）為黑水漁場當年孵化的同一批魚苗。體重為（19.36±2.17）g/尾。體長為11.04±0.52cm。選擇體質(zhì)健壯的魚種600尾，用5%的食鹽水消毒后暫養(yǎng)備用。

1.2試驗飼料

參照NRC（1994）魚類營養(yǎng)需要設(shè)計配方（見表1），以魚粉、豆粕等為蛋白源，魚油為脂肪源，飼料原料均過40目篩，魚油的添加水平分別為0%、2%、4%、6%、8%和10%。配制成6種為等氮（蛋白質(zhì)含量為40%）、等能量（16.21MJ/kg）試驗飼料。經(jīng)充分混合后加工成2mm的硬顆粒飼料，烘干并保存于冰箱中備用。

注：1、每公斤飼料含：VA8 000 IU；VD900 IU；VE2IU；VK4mg；VB14mg；尼克酸20mg；氯化膽堿160mg；泛酸7mg；VB6 0.2mg; VBl25mg。1Per kilogram of Vitamin additive：VA8 000 IU；VD900 IU；VE2IU；VK4mg；VB14mg；nicotinic acid20mg；Choline Chloride160mg；Pantothenate7mg；VB6 0.2mg; VBl25mg.

2、每公斤飼料含：Mn 70mg；Zn 60mg；Fe 60mg；Cu 2mg；I 1mg。2 Per kilogram of Mineral additive：Mn 70mg；Zn 60mg；Fe 60mg；Cu 2mg；I 1mg.

1.3試驗設(shè)計

暫養(yǎng)7d后，選擇健康無傷病的翹嘴紅鲌隨機分為6個試驗組，每組設(shè)3個平行組，每組30尾，分別投入1～18號試驗魚池（1×1×1m3）中。分為6個試驗組，分別投喂添加不同脂肪添加水平的試驗飼料，每個試驗組設(shè)3個平行組。養(yǎng)殖時間為60d，試驗期間水溫為15～20℃，每天堅持“定點、定時、定質(zhì)、定量”投喂飼料，并保持微流水；各試驗池水體每天的交換量為30%。試驗結(jié)束時停食1d，并在各試驗池中隨機抽取10～15尾試驗魚，按照常規(guī)方法解剖，取其消化道各部分制備粗酶液，測定試驗其消化酶活性。

1.4酶粗提液的制備

參照中山大學的方法制備翹嘴紅鲌腸道、肝胰臟的粗酶液。試驗前后，分別在各試驗組中隨機取10尾試驗翹嘴紅鲌解剖，取出其腸道、肝胰臟。清除腸道內(nèi)的食物，去除脂肪、腸系膜，用濾紙吸干后分別對腸道及肝胰臟部分稱重。并分別加入相當于其重量20倍的生理鹽水，迅速用冰凍玻璃勻漿器勻漿后，在低溫條件下，用離心機在3500rpm轉(zhuǎn)速下離心20min，取上清液作為粗酶提取液，保存于4℃冰箱中。24小時內(nèi)分析完畢。

1.5消化酶活性測定

蛋白酶活性采用Folin-酚試劑法。以1%干酪素溶液作為底物與酶反應(yīng)，在680nm波長下測定反應(yīng)液的吸光度值；淀粉酶活性采用次碘酸法測定，脂肪酶活性采用聚乙烯醇橄欖油水解法測定。每個處理均重復(fù)5次。

蛋白酶活性單位（U）：規(guī)定為在pH7.4，28±1℃條件下，酶液每分鐘催化生成1μg酪氨酸的酶量為一個酶活力單位。本試驗中蛋白酶的活性單位則為每1g組織的酶活性。

淀粉酶活性單位（U）：規(guī)定為以淀粉為底物，在pH7.4，28±1℃條件下，1h催化生成1mg葡萄糖的酶量為一個酶活力單位。本試驗中淀粉酶的活性單位為每1g組織的酶活性。

脂肪酶活性單位（U）：規(guī)定為在pH7.4，28±1℃條件下，脂肪酶水解脂肪每分鐘產(chǎn)生1微克分子脂肪酸的酶量定為一個活力單位。本試驗中脂肪酶的活性單位為每1g組織的酶活性。

1.6數(shù)據(jù)處理和分析

用SPSS 13.0 for Windows軟件對試驗數(shù)據(jù)進行處理和統(tǒng)計學分析。若差異達到顯著，則進行Tukey多重比較，顯著性水平為P<0.05。

2結(jié)果與分析

2.1不同脂肪含量翹嘴紅鲌蛋白酶活性的影響

從圖1可知，飼料中脂肪含量在2.07%～7.14%時，試驗組中翹嘴紅鲌胃蛋白酶和肝胰蛋白酶的活性呈逐漸上升的趨勢，當飼料中脂肪達到7.14%～15.32%時試驗魚消化道中的胃蛋白酶和肝胰蛋白酶的活性又呈下降的趨勢。當飼料中脂肪含量達到7.14%時，試驗魚的胃蛋白酶和肝胰蛋白酶的活性均達最大，分別為1216.41U和1599.94U，且與各試驗組差異顯著（P<0.05）；而腸蛋白酶則在飼料中脂肪含量在2.07%～9.26%時呈逐漸上升的趨勢，在飼料脂肪含量在9.26%～15.32%時呈下降的趨勢。且在飼料脂肪含量在9.26%時腸蛋白酶活性達到最大，為1934.09U，除與飼料脂肪在7.14%的試驗組差異不顯著（P>0.05）外，與各試驗組差異顯著（P<0.05）。

2.2不同脂肪含量翹嘴紅鲌淀粉酶活性的影響

從圖2可知，同消化道中蛋白酶活性一樣，當飼料中脂肪含量在2.07%～7.14%時，試驗組中翹嘴紅鲌胃淀粉酶、腸淀粉酶和肝胰淀粉酶的活性呈逐漸上升的趨勢，當飼料中脂肪達到7.14%～15.32%時試驗魚消化道中的胃淀粉酶、腸淀粉酶和肝胰淀粉酶的活性又呈下降的趨勢。當飼料中脂肪含量達到7.14%時，試驗魚的胃淀粉酶、腸淀粉酶和肝胰淀粉酶的活性均達最大，分別為85.75U、115.29U和92.87U，且與各組差異顯著（P<0.05）。此時且此時翹嘴紅鲌消化道各部分淀粉酶的活性大小為：腸道>肝胰臟>胃。

2.3不同脂肪含量翹嘴紅鲌脂肪酶活性的影響

由圖3可知，當飼料中脂肪含量在2.07%～7.14%時，試驗組中翹嘴紅鲌胃脂肪酶、腸脂肪酶和肝胰脂肪酶的活性呈逐漸上升的趨勢，當飼料中脂肪含量達9.26%時，試驗翹嘴紅鲌胃脂肪酶達到最大，為391.29U，與其余各試驗組差異顯著（P<0.05）；而當飼料中脂肪含量達到7.14%時，試驗魚的腸脂肪酶和肝胰脂肪酶的活性達最大，分別為752.13U和199.71U，除腸脂肪酶與飼料脂肪含量為9.26%時試驗組差異不顯著（P>0.05）外，與其余各組差異顯著（P<0.05）。

3討論

消化酶是維持機體正常代謝的生命活性物質(zhì)，對生物體內(nèi)的各種化學變化起催化作用消化酶活性的提高，可以促進魚類對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，進而促進魚類的生長。同時，魚類腸道的消化酶活性可以適應(yīng)飼料性質(zhì)，或者說飼料性質(zhì)可影響消化酶活性。Barahi等研究大口鱸的消化酶、Pedersen等研究大西洋鯡幼魚的消化酶均發(fā)現(xiàn)魚類脂肪酶的活性大小與所攝取的食物性質(zhì)有關(guān)。與陸生動物相比，水產(chǎn)動物有將近一半的能量需求是從飼料蛋白中獲取。當飼料中脂肪含量不足時，用于其生長的蛋白質(zhì)將被用作能源以維持魚類的生存。馬平等添加0～15%的精制鱈魚肝油來飼喂赤點石斑魚幼魚，發(fā)現(xiàn)不添加鱈魚肝油生長較快，且幼魚肝臟脂肪量無明顯增加。添加鱈魚肝油都出現(xiàn)脂肪大量蓄積，添加量為10%～15%時部分魚肝臟出現(xiàn)脂肪肝，因此，在飼料中添加適量油脂以提高脂肪含量，將有助于提高蛋白質(zhì)的利用效率，促進魚類的生長，具有節(jié)約蛋白質(zhì)、增加攝食量、提高飼料效率等作用。

本試驗中，當飼料中脂肪含量在7.14%時，能使各試驗組中試驗翹嘴紅鲌的胃蛋白酶活性、肝胰蛋白酶活性、消化道淀粉酶活性及腸脂肪酶、肝胰脂肪酶活性維持在最高，促進翹嘴紅鲌生長過程中對飼料蛋白質(zhì)、脂肪及碳水化合物的消化利用率；在飼料脂肪含量達到9.26%時，試驗翹嘴紅鲌的腸蛋白酶和胃脂肪酶活性達最高，分別為1934.09U和391.29U。說明此時腸道對蛋白質(zhì)的消化和吸收力最強，胃部對脂肪的乳化和消化作用較強。其可能的原因有：一是由于飼料中脂肪含量適宜時，可使飼料中魚類所需要的必需脂肪酸比例和種類平衡，從而促進魚類消化道中脂肪酶活性，提高魚類對脂肪的消化利用率，同時適宜的脂肪含量能在一定程度上起到節(jié)約蛋白質(zhì)的作用，從而提高了蛋白酶的活性，促使飼料蛋白質(zhì)高效率地轉(zhuǎn)化為魚體蛋白質(zhì)促進魚類生長；二是當飼料脂肪含量過高時，在加工和貯存過程中致使魚粉中的油脂氧化，對魚類產(chǎn)生毒性，導(dǎo)致對飼料的利用率降低所致。同時，飼料脂肪的添加會導(dǎo)致肌肉滲出性損失的增加，證明了機體細胞完整性破壞的發(fā)生。當試驗用油以較高水平添加時勢必導(dǎo)致肌肉營養(yǎng)不良癥的發(fā)生和導(dǎo)致肌肉滲出性損失的增加，不但抑制魚類生長，還會損傷魚體機體。這也與飼料脂肪在7.14%～9.26%時翹嘴紅鲌的生長速度最快，飼料轉(zhuǎn)化率最高的結(jié)論相一致。因此，本試驗中，飼料脂肪含量在7.14%～9.26%時，可有效體提高翹嘴紅鲌消化酶的活性。