早期自然流產患者妊娠組織的細胞凋亡與中醫辨證分型關系的探討

摘 要 目的：從細胞凋亡角度探討早期自然流產的發生機制及與中醫辨證分型的相關性。方法：對10例正常妊娠人工流產病例和20例早期自然流產病例的絨毛與蛻膜組織進行研究，應用原位雜交法檢測早期自然流產患者妊娠組織中baxmRNA和bcl-2mRNA的表達。結果：早期自然流產組的絨毛與蛻膜細胞凋亡指數(AI)較正常早孕時明顯增高(P<0.01)，陰虛血熱型早期自然流產組細胞凋亡的表達，高于正常妊娠人工流產對照組。結論：細胞凋亡在孕卵發育過程中起重要作用，絨毛和蛻膜組織中大量的細胞凋亡是其形態學退變的根本原因，進而阻礙孕卵的發育；陰虛血熱是導致早期自然流產發生的主要病因，治療時應以養陰清熱、固腎安胎為大法。

關鍵詞 流產 細胞凋亡 絨毛 蛻膜 辨證分型 脾腎氣虛 陰虛血熱

資料與方法

試劑和儀器：bcl-2TSPZYMED原位雜交SABC染色系統、bax TSPZYMED原位雜交SABC染色系統、染色劑、濕盒、恒溫水浴箱、恒溫箱、OLYMPUS顯微鏡。

研究對象：10例正常妊娠人工流產患者(正常對照組)和20例早期自然流產患者(實驗組)為2002年8月～2003年1月在長春中醫學院附屬醫院和吉林省人民醫院門診就診的病例，均為停經12周以內行清宮術所得的妊娠組織。兩組病例患者均處于生育年齡段。

標本采集和處理：將清宮術或吸宮術所得的妊娠組織分離絨毛和蛻膜組織各0.5g(約1.0cm×1.0cm)，立即用生理鹽水沖洗3次，洗凈后置10%福爾馬林液中固定，常規石蠟包埋制成切片備用。

實驗方法：石蠟切片祛除內源性過氧化物酶；石蠟切片脫蠟至水；切片洗滌；滴加預雜交液；切片洗滌；滴加高敏TSPZYMEDSABC酶復合物，覆蓋組織，37℃濕盒孵育40分鐘；切片的洗滌：0.01MPBS，pH7.2，3次，室溫；滴加DAB劑，覆蓋組織，室溫避光顯色3～5分鐘或更長時間，至顯色水洗滌終止反應，復染脫水(80%乙醇→90%乙醇→100%乙醇→二甲苯脫水)；中性樹膠封片。

結果判定：以細胞核中出現棕黃色/藍紫色顆粒，為陽性細胞，背景無顏色。每例隨機選取10個視野，分別計數bax和bcl-2的陽性率，并計算出bax/bcl-2的比值，表示促進和抑制細胞凋亡的平衡。

統計學處理：所得數據經SPSS統計軟件處理，采用t檢驗(X±S)。

結 果

絨毛組織中baxmRNA、bcl-2mRNA表達陽性率分析：絨毛組織中baxmRNA、bcl-2mRNA表達陽性率正常妊娠的孕婦為15.36%±1.55%、15.71%±0.87%；陰虛血熱型早期自然流產的孕婦為26.84%±1.43%、15.89%±1.16%；脾腎氣虛型早期自然流產的孕婦為40.35%±1.34%、15.95%±2.28%，存在顯著性差異(P<0.01)；bcl-2mRNA表達各組間無顯著性差異(P>0.05)。

蛻膜組織中baxmRNA、bcl-2mRNA表達陽性率分析：蛻膜組織中baxmRNA、bcl-2mRNA表達陽性率在正常妊娠的孕婦為9.82%±1.27%、12.57%±0.92%；陰虛血熱型早期自然流產的孕婦為36.53%±2.36%、13.05%±1.87%；脾腎氣虛型早期自然流產的孕婦為57.18%±1.83%、13.46%±2.17%。在正常妊娠人工流產組，陰虛血熱型早期自然流產組，脾腎氣虛型早期自然流產組中，baxmRNA表達呈遞增趨勢，存在顯著性差異(P<0.01)；bcl-2mRNA表達各組間無顯著性差異(P>0.05)。

妊娠組織(包括絨毛和蛻膜)中總baxmRNA、bcl-2mRNA表達陽性率分析：在妊娠組織(包括絨毛和蛻膜)中總baxmRNA、bcl-2mRNA表達陽性率在正常妊娠的孕婦為12.59%±3.16%、14.14%±1.83%；陰虛血熱型早期自然流產的孕婦為31.69%±5.32%、14.5%±1.60%；脾腎氣虛型早期自然流產的孕婦為48.77%±8.77%、14.95%±2.52%。在正常妊娠人工流產組，陰虛血熱型早期自然流產組，脾腎氣虛型早期自然流產組，baxmRNA表達呈遞增趨勢，存在顯著性差異(P<0.01)；bcl-2mRNA各組間表達無顯著性差異(P>0.05)。

各組絨毛和蛻膜細胞中總bax/bcl-2比值分析：總bax/bcl-2在妊娠組織(包括絨毛和蛻膜)中正常妊娠的孕婦為0.88±0.14；陰虛血熱型早期自然流產的孕婦為2.19±0.22；脾腎氣虛型早期自然流產的孕婦為3.38±0.22。實驗組與對照組比較存在顯著性差異(P<0.01)，陰虛血熱型與脾腎氣虛型比較存在顯著性差異(P<0.01)。

實驗結果也證明，陰虛血熱型細胞凋亡指數(AI)明顯高于對照組，是導致早期自然流產發生的主要病因。因此治療時應以養陰清熱、固腎安胎為大法。

參考文獻

1 楊樺，牛秀敏.細胞凋亡的基因表達和調節與妊娠相關性研究.國外醫學婦產科學分冊，2002，29(1)：16-18.

2 朱勁松，高英敏.細胞凋亡與妊娠之間的關系研究進展.實用婦產科雜志，2003，19(1)：15-16.

3 陳立懷.分經養胎是優生學的基礎.中國中醫基礎醫學雜志，1998，8(4)：45.