抗瘤膠囊抗小鼠實驗性肝癌研究
2008-12-31 00:00:00彭佳閆智勇張占平陳暢秦晉之
亞太傳統醫藥 2008年10期
（西南交通大學 藥學院，四川 峨眉山 614202）
摘 要：目的：探討抗瘤膠囊抗小鼠實驗性肝癌的作用和機理，為進一步研究開發抗肝癌中藥新藥奠定良好的實驗和理論基礎。方法：抗瘤膠囊由仙鶴草、山豆根提取物按一定處方比例配比組成。建立小鼠肝癌（H22）動物移植腫瘤模型，隨機將小鼠分為正常組、模型組、陽性組、藥物小、中、大劑量組并分別給藥。實驗結束后，進行抑瘤率、胸腺指數、脾指數、腫瘤組織病理等相關指標檢測。結果：抗瘤膠囊各組對荷瘤小鼠的腫瘤生長有明顯抑制作用，低、中、高劑量組的抑瘤率分別為32.11%、41.58%和45.26%，呈現良好的量效關系。病理學觀察顯示，模型組腫瘤細胞生長旺盛，而各用藥組則出現不同程度的腫瘤細胞壞死，但各組胸腺指數和脾指數經統計學處理沒有顯著性差異。結論：抗瘤膠囊對小鼠肝癌（H22）動物肝癌模型有明顯的抑瘤作用，但在提高機體免疫功能方面的作用還有待進一步研究。
關鍵詞：抗瘤膠囊；肝癌（H22）動物腫瘤模型；抑瘤率
中圖分類號：R285.5文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2008）10-0023-03
原發性肝癌(下稱肝癌)為我國常見惡性腫瘤之一，其死亡率在消化系統惡性腫瘤中列第三位，僅次于胃癌和食管癌［1］。近年來，通過大量的臨床及實驗研究，中醫中藥對肝癌的療效正日益受到人們的肯定和重視，其作用機理與直接殺傷或抑制肝癌細胞、保護和調節機體免疫功能、抑制癌前病變、破壞或抑制癌細胞遺傳物質合成、誘導癌細胞凋亡及調控癌基因表達等因素有關［2］。
本研究對2005年版《中國藥典》收載的仙鶴草（Agrimonia pilosa Ledeb）和山豆根（Sophora tonkinensis Gagnep）進行研究，進一步了解其療效和探討其作用機制，并為研究開發抗腫瘤中藥新藥奠定良好的實驗和理論基礎。本研究采用小鼠肝癌（H22）動物腫瘤模型，以抑瘤率、胸腺指數、脾指數和腫瘤組織的病理學觀察為檢測指標，探討抗瘤膠囊抗肝癌作用及其相關機理。
1 材料
1.1 動物
昆明種封閉群一級小白鼠60只，雌雄各半，體重20±3g，樂山長征制藥廠提供。
1.2 瘤株
小鼠移植性肝癌（H22）瘤株：由四川大學華西醫學中心免疫實驗室提供。1.3 藥物
替加氟片：上海醫藥（集團）有限公司華聯制藥廠生產，批號：060601，用蒸餾水配成8.33mg/mL的實驗用液，密封置4℃冰箱中冷藏備用。
抗瘤膠囊：乙醇浸提仙鶴草，加熱回流提取山豆根等藥，提取后分別濃縮成1∶1濃縮液，然后按一定處方比例進行適當配比。仙鶴草、山豆根均購于成都荷花池藥材市場，經西南交通大學藥學院宋良科副教授鑒定。
2 方法
2.1 肝癌動物模型建立及分組
無菌操作，取荷肝癌（H22）小鼠腹水，用0.9%的生理鹽水稀釋到含瘤細胞1×107/mL，每只鼠左腋皮下接種0.2mL，并將接種過的小鼠隨機分為荷瘤模型組、陽性對照組、藥物小劑量組、中劑量組、大劑量組，另設未接種瘤細胞的正常組共6組，每組10只，雌雄各半。
2.2 用藥方法
小鼠接種瘤細胞24h后開始給藥。正常對照組和模型對照組每天灌服純凈水0.5mL/只；陽性對照組每天灌胃替加氟片溶液（8.33mg/mL）0.5mL/只；三個抗瘤膠囊治療組灌胃不同劑量實驗用藥，皆為每天0.5mL/只，qd，連續給藥10d。
2.3 標本的采集、制備
停藥次日，處死小鼠，解剖并完整剝離腫瘤組織，用電子天平稱瘤重計算抑瘤率，并將腫瘤組織浸泡在10%甲醛溶液中，進行石蠟包埋、切片、HE染色，以作顯微鏡下病理學觀察。同時胸腺和脾臟進行解剖后稱重，以計算各組的胸腺指數和脾指數。
2.4 檢測指標
2.4.1 抑瘤率測定
計算方法：抑瘤率（%）=（1-T/C）×100%（T/C：治療組平均瘤重/對照組平均瘤重）
2.4.2 胸腺指數及脾指數的測定
胸腺指數=胸腺重量（mg）/體重（g）；脾指數=脾重（mg）/體重（g）
2.4.3 腫瘤組織病理學檢查
采用石蠟切片法。病理標本固定后，進行取材、脫水、浸蠟、包埋、切片和染色。
2.5 統計
將各組數據進行方差分析后采用t檢驗，檢驗方法采用SPSS13.0統計軟件計算。
3 結果
3.1 對荷瘤小鼠腫瘤生長的抑制作用
見表1。
表1 對腫瘤生長的抑制作用
注：與模型對照組相比：△△示P<0.01
表1表明，抗瘤膠囊對荷肝癌（H22）小鼠的腫瘤生長有明顯抑制作用，低、中、高三個劑量組的平均瘤重均顯著低于模型組（P<0.01），抑瘤率分別為32.11%、41.58%和45.26%，且實驗用藥組的抑瘤率均明顯高于陽性對照組。
3.2 對荷瘤小鼠胸腺指數及脾指數的影響
3.2.1 對荷瘤小鼠胸腺指數的影響
見表2。
表2表明，各組小鼠胸腺重及胸腺指數經統計學處理沒有顯著性差異（P>0.05）。
3.2.2 對荷瘤小鼠脾指數的影響
見表3。
表3 對脾重及脾指數的影響（ ±s）
表3表明，各組小鼠脾重及脾指數經統計學處理沒有顯著性差異（P>0.05）。
3.3 對荷瘤小鼠腫瘤組織病理觀察
腫瘤組織的大小一般在2~3cm之間，呈半球形或不規則狀，顏色為灰白色，其中有許多白色斑點，硬度和一般的軟組織相當，組織切面呈蜂巢狀。
顯微鏡下，各組腫瘤細胞表現如下：
①模型對照組：腫瘤細胞呈團簇狀密集、旺盛生長，排列緊實，形態各異，異型性明顯（附圖1、附圖2）。
圖1 模型對照組（HE 400×）
圖2 模型對照組（HE 100×）
②陽性對照組：腫瘤細胞生長旺盛，可見有部分淺染的細胞壞死（附圖3）。③抗瘤膠囊各組：可見大面積淺染腫瘤細胞的壞死區（附圖4、5、6）。
圖3 陽性對照組（HE 100×）
圖4 藥物低劑量組（HE 100×）
圖5 藥物中劑量組（HE 100×）
圖6 藥物高劑量組（HE 100×）
4 討論
仙鶴草為薔薇科多年生草本植物龍牙草的全草，其性微甘、平，味苦、澀，臨床上主要用于各種血癥及痢疾等?，F代中醫藥研究發現，仙鶴草還具有較強的抗癌功效。仙鶴草擁有極為復雜的化學成分［3］，主要有仙鶴草酚、揮發油、微量元素、仙鶴草素、仙鶴草內酯、鞣質、甾醇、有機酸、酚類化合物、黃酮類和糖苷類等化合物，其中鞣質類化合物有重要的抗癌活性［4］;山豆根為豆科蔓生性矮小灌木植物越南槐的干燥根及根莖，味苦，性寒，歸肺、胃經，具有清熱解毒、利咽消腫的功效，近年來用于早期肺癌、喉癌、膀胱癌等均有一定的療效。山豆根化學成份主要有生物堿、多糖、黃酮等，其中具抗腫瘤活性的主要是山豆根的總生物堿，包括氧化苦參堿、苦參堿、金雀花堿、槐果堿等［5］。
本實驗用藥抗瘤膠囊主要由仙鶴草、山豆根等中藥組成。從對腫瘤生長的實驗結果來看，抗瘤膠囊低、中、高三個劑量組的平均瘤重均顯著低于模型組（P<0.01），抑瘤率分別為32.11%、41.58%和45.26%，呈良好的量效關系，且所用實驗用藥組的抑瘤率均明顯高于陽性對照組，表明抗瘤膠囊對荷肝癌（H22）小鼠的腫瘤生長有明顯抑制作用。
腫瘤組織病理結果顯示，模型對照組腫瘤細胞呈團簇狀密集、旺盛生長，而各用藥組可見有部分淺染的腫瘤細胞壞死，尤其是抗瘤膠囊各組可見大面積淺染腫瘤細胞的壞死區，表明抗瘤膠囊對腫瘤細胞有直接殺傷作用。
從荷瘤小鼠的胸腺指數和脾指數上看，各組經統計學處理沒有顯著性差異，但總的來說，用藥組的胸腺指數和脾指數都有減小的趨勢。這可能和仙鶴草用量和山豆根的毒性有關，由此，關于本處方藥物之間的配比比例，有待在進一步研究中繼續優化，從而使抗瘤膠囊在殺滅腫瘤細胞和提高機體自身免疫功能兩個方面都發揮出良好的功效。
參考文獻：
［1］ 劉厚鈺.原發性肝癌［M］.北京：人民衛生出版社，2005：450.
［2］ 蔣時紅，周宜強.中醫藥防治肝癌機理及實驗研究［J］.中國中醫基礎醫學，2003，9(4)：309-311.
［3］ 趙瑩，劉金平，李平亞.仙鶴草化學成分及藥理研究進展［J］.特產研究，2001（1）：50-53.
［4］ 丁維俊，張天娥，王宇，等.仙鶴草抗癌活性成分及機理探討［J］.遼寧中醫，2006，33(2)：251-252.
［5］ 姚仲青，朱虹，王光鳳.山豆根總生物堿抗腫瘤作用的初步研究［J］.南京中醫藥大學學報，2005，21(4)：253-254.
（責任編輯：姜付平）
