板藍(lán)根泡騰顆粒的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)

（1.清華大學(xué)生命科學(xué)與醫(yī)學(xué)研究院，北京100084；2.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州貴陽(yáng)550002）

摘要：目的：制備板藍(lán)根泡騰顆粒，并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。方法：確定板藍(lán)根泡騰顆粒的制備方法，建立HPLC法測(cè)定板藍(lán)根泡騰顆粒中尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷的含量，對(duì)其進(jìn)行外觀性狀觀察，鑒別，溶化性試驗(yàn)。結(jié)果：制備的泡騰顆粒泡騰迅速，溶液澄清，無(wú)沉淀，不掛壁，外觀好。結(jié)論：板藍(lán)根泡騰顆粒制備工藝簡(jiǎn)單，性質(zhì)穩(wěn)定，質(zhì)量可控。

關(guān)鍵詞：板藍(lán)根；泡騰顆粒；制備；質(zhì)量評(píng)價(jià)

中圖分類號(hào)：R927.11文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2008）10-0033-03

中藥板藍(lán)根（radixisatidis）為十字花科植物菘藍(lán)（IsatisindigoticaFort.）的干燥根，是中國(guó)傳統(tǒng)中藥，歷代本草均有記載。本品性寒味苦，具有清熱解毒、涼血消斑的功效，臨床廣泛用于抗菌、抗病毒、抗血小板聚集、抗內(nèi)毒素，能夠增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。泡騰顆粒是以適宜的酸和堿為崩解劑制成的一種顆粒劑^［1］，入水后會(huì)產(chǎn)生大量二氧化碳?xì)怏w從而迅速溶解，藥物起效迅速，具有攜帶、使用方便，水中分布均勻，成本低，生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)，兼具固體制劑和液體制劑的特點(diǎn)。本研究將板藍(lán)根藥材經(jīng)過(guò)提取、干燥得板藍(lán)根提取物，以泡騰效果為評(píng)價(jià)指標(biāo)將板藍(lán)根提取物制備成板藍(lán)根泡騰顆粒，并建立HPLC法測(cè)定板藍(lán)根泡騰顆粒中尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷的含量，同時(shí)對(duì)其進(jìn)行外觀性狀觀察，鑒別，溶化性試驗(yàn)。

1儀器與試藥

1.1儀器

Agilent1100型高效液相色譜儀（DAD檢測(cè)器）；PrevailC18柱（4.6×250mm，5μm）；XS105型電子天平（d=0.01mg，梅特勒-托利多公司）；SL300N型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；RUC-5200型超聲波清洗器（上海睿祺電子設(shè)備有限公司）；CH-10槽形混合機(jī)（長(zhǎng)沙市岳麓區(qū)中南制藥機(jī)械廠）；YK-60搖擺制粒機(jī)（長(zhǎng)沙市岳麓區(qū)中南制藥機(jī)械廠）。

1.2試藥

尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷對(duì)照品均購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院生物化學(xué)研究所（HPLC法測(cè)定純度分別為99.3%、99.1%、99.3%）；精氨酸對(duì)照品、板藍(lán)根對(duì)照藥材均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；乙腈（色譜純，默克公司）；其他為分析純；水為超純水；所用藥材購(gòu)于安徽亳州藥材市場(chǎng)；檸檬酸、無(wú)水碳酸氫鈉、乳糖、正丁醇、冰醋酸、茚三酮均為分析純；以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板。

2方法與結(jié)果

2.1板藍(lán)根提取物的制備

將板藍(lán)根藥材用6倍量水回流提取3次，每次1h，提取液過(guò)濾、濾液合并，濃縮至相對(duì)密度為1.2（50℃），加乙醇使含醇量達(dá)到60％靜置24h使沉淀，取上清液回收乙醇，并減壓干燥成干浸膏，粉碎即得板藍(lán)根提取物。

2.2板藍(lán)根泡騰顆粒的制備

將所有物料分別干燥并粉碎過(guò)100目篩備用，取處方量以等量遞加的方法加入主藥及其他輔料，過(guò)篩混勻，用70％的乙醇溶液為潤(rùn)濕劑制軟材，過(guò)16目篩濕法制粒，50℃干燥2h得干顆粒，16目整粒后即得。

2.3不含板藍(lán)根提取物的泡騰顆粒

（陰性樣品）的制備。除主藥外，將其它所有物料按板藍(lán)根泡騰顆粒的制備方法制備即得。

2.4理化性質(zhì)

（1）性狀。本品為棕色至棕褐色顆粒；味酸甜、微苦。

（2）鑒別。取本品1.0g，研碎，置具塞三角錐形瓶中，加甲醇10mL，超聲處理30min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液；另取精氨酸對(duì)照品2mg，檸檬酸0.3g，無(wú)水碳酸氫鈉0.2g，加甲醇10mL，超聲處理30min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液、板藍(lán)根泡騰顆粒供試品溶液各1~2μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（19∶5∶5，V/V/V）為展開(kāi)劑展開(kāi)，展距12cm，取出，熱風(fēng)吹干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

（3）溶化性^［2］分別取3批板藍(lán)根泡騰顆粒各10g，置盛有200mL水的燒杯中，水溫為20℃，板藍(lán)根泡騰顆粒迅速產(chǎn)生氣體而呈泡騰狀，5min內(nèi)顆粒完全分散并溶解在水中，溶液澄清透亮，不掛壁。

2.5含量測(cè)定

（1）色譜條件。色譜柱：PrevailC18（4.6×250mm，5μm）；柱溫：25℃；流動(dòng)相：A（水）-B（乙腈）；梯度洗脫：0→34min（2%B→20%B）；流速為：0.5mL#8226;min^-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，進(jìn)樣量10μL。

（2）系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。在色譜條件下，分別測(cè)定核苷類對(duì)照品、板藍(lán)根泡騰顆粒和不含板藍(lán)根提取物的空白泡騰顆粒，色譜圖見(jiàn)圖1、2、3，結(jié)果顯示，共存成分不干擾主藥的測(cè)定，理論塔板數(shù)按腺苷峰計(jì)算不低于10000。

圖1混合對(duì)照品的HPLC圖譜

圖2泡騰顆粒的HPLC圖譜

圖3陰性泡騰顆粒的HPLC圖譜

（3）對(duì)照品溶液制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的尿苷對(duì)照品1.92mg，鳥(niǎo)苷對(duì)照品1.75mg，腺苷對(duì)照品2.12mg置于同一25mL量瓶中，用20％甲醇溶液溶解，并用20％甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.25mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL置于10mL量瓶中，加入20％甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得一系列不同濃度的混合對(duì)照品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，以尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷對(duì)照品濃度（mg#8226;mL^-1）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：尿苷：Y=41344X+2.5323（r=0.9999），鳥(niǎo)苷：Y=47076X+2.4053（r=0.9999），腺苷：Y=59968X+1.4399（r=0.9999），結(jié)果表明尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷分別在1.92~38.4μg#8226;mL^-1；1.75~35μg#8226;mL^-1；2.12~42.4μg#8226;mL^-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

（4）板藍(lán)根泡騰顆粒供試品溶液和陰性樣品溶液的制備。取080101批板藍(lán)根泡騰顆粒和陰性樣品各0.5g，精密稱定，置25mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，即得板藍(lán)根泡騰顆粒供試品溶液和陰性樣品溶液。

（5）精密度試驗(yàn)。取1mL中含有38.4μg的尿苷、35.0μg的鳥(niǎo)苷和42.4μg的腺苷的混合對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，以尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷的峰面積計(jì)算，RSD分別為尿苷0.058％，鳥(niǎo)苷0.29％，腺苷0.028％，說(shuō)明本方法精密度良好。

（6）重復(fù)性試驗(yàn)。取080101批板藍(lán)根泡騰顆粒6份按2.5.4項(xiàng)下的供試品制備方法操作制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，含量測(cè)定結(jié)果的RSD分別為尿苷0.40％，鳥(niǎo)苷0.85％，腺苷0.18％，表明本方法重復(fù)性良好。

（7）穩(wěn)定性試驗(yàn)。取080101批板藍(lán)根泡騰顆粒1份按2.5.4項(xiàng)下的供試品制備方法操作制備供試品溶液，分別在0h，1h，2h，4h，6h，8h測(cè)定，以尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷的峰面積計(jì)算，RSD分別為尿苷0.95％，鳥(niǎo)苷0.75％，腺苷0.13％，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

（8）泡騰顆粒的含量測(cè)定。按照2.5.4項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備9份樣品，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，080101、080102、080103批板藍(lán)根泡騰顆粒的總核苷含量的平均值分別為151.1mg/100g、157.8mg/100g、161.1mg/100g。

（9）加樣回收試驗(yàn)。

①對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的尿苷對(duì)照品3.05mg，鳥(niǎo)苷對(duì)照品1.85mg，腺苷對(duì)照品2.73mg置10mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得儲(chǔ)備液。

②回收率試驗(yàn)取080101批板藍(lán)根泡騰顆粒9份，各約0.5g，精密稱定，置25mL具塞錐形瓶中，3份為一組，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液0.8mL、1.0mL、1.2mL，按2.4.4項(xiàng)方法制備所需溶液，即得9份樣品，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，得到尿苷的高、中、低回收率為994％、100％、997％，鳥(niǎo)苷的高、中、低回收率為99.3％、995％、99.1％，腺苷的高、中、低回收率為98.9％、99.7％、99.7％，結(jié)果均在100％左右，表明本法回收率良好。

3討論

（1）板藍(lán)根水提液具有抗菌、抗病毒之功效，有關(guān)抗病毒活性物質(zhì)目前尚無(wú)定論，有文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)合氨基酸、喹唑酮、糖蛋白和多糖為抗病毒活性物質(zhì)，而脂溶性成分靛藍(lán)、靛玉紅在水提液中含量極少，且未見(jiàn)報(bào)道有抗病毒作用，故選用板藍(lán)根藥材中脂溶性成分靛藍(lán)、靛玉紅做指標(biāo)成分不合適。已有文獻(xiàn)報(bào)道采用高效液相色譜/二極管陣列檢測(cè)/質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC/DAD/MS2）對(duì)板藍(lán)根注射液進(jìn)行分析，鑒定其中含有腺苷、尿苷、鳥(niǎo)苷、胞苷和腺嘌呤5種成分^［3］。而板藍(lán)根藥材中的尿苷、鳥(niǎo)苷、腺苷等核苷類成分能夠干擾病毒核酸的合成，常常是中成藥抗病毒的活性成分^［4，5］，故本文選取板藍(lán)根藥材中的尿苷、鳥(niǎo)苷和腺苷的總量對(duì)板藍(lán)根泡騰顆粒的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。

（2）制備薄層樣品時(shí)，考察了用甲醇、乙醇、低濃度甲醇、低濃度乙醇^［6］溶解精氨酸對(duì)照品和板藍(lán)根對(duì)照藥材，但在薄層板上，精氨酸對(duì)照品和板藍(lán)根對(duì)照藥材的斑點(diǎn)明顯超出板藍(lán)根泡騰顆粒的斑點(diǎn)，考慮是板藍(lán)根泡騰顆粒上樣點(diǎn)的局部離子化微環(huán)境不同于藥材與對(duì)照品的微環(huán)境所致，故在制備精氨酸對(duì)照品和板藍(lán)根對(duì)照藥材溶液時(shí)先在甲醇中溶解成比例的檸檬酸和無(wú)水碳酸氫鈉，使對(duì)照品和對(duì)照藥材的環(huán)境和板藍(lán)根泡騰顆粒的環(huán)境一致。結(jié)果表明，該方法能很好地對(duì)板藍(lán)根泡騰顆粒進(jìn)行TLC鑒別。

參考文獻(xiàn)：

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（責(zé)任編輯：姜付平）