發酵型黃芪制劑“芪酵粉”對ＣＴＸ模型鼠減毒作用的實驗研究

（1.滄州醫學高等專科學校，河北滄州061001;2.河北醫科大學，河北石家莊050001）

摘要：目的：觀察發酵型黃芪制劑“芪酵粉”（FAP）對環磷酰胺（CTX）模型小鼠造血系統、免疫功能和肝腎功能的影響，探索臨床上更經濟有效的抗癌化療輔助用藥。方法：給小鼠腹腔注射CTX建立骨髓抑制、免疫損傷模型，觀察FAP對大劑量CTX所致小鼠骨髓抑制、免疫器官萎縮、腎功能損傷等毒性反應的對抗作用。結果：FAP可對抗CTX所致小鼠外周血白細胞減少、骨髓有核細胞數減少和脾重減輕等毒性反應，保護腎功能，對肝功能無明顯影響。結論：FAP對腫瘤化療藥物CTX有減毒作用。

關鍵詞：芪酵粉;環磷酰胺;模型鼠;減毒作用

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2008）10-0043-03

化療是目前惡性腫瘤治療的主要手段之一，然而多數化療藥物在殺傷腫瘤細胞的同時，對正常人體細胞也有較大的損傷，尤其是增殖旺盛的骨髓造血細胞及胃腸道細胞。而嚴重的骨髓造血功能細胞損傷會引起外周白血細胞過低，使患者被迫中止治療。另一方面抗癌化療藥物常常使患者的免疫功能下降，療效降低。因此減輕化療藥的毒副反應，改善機體骨髓造血功能和免疫功能的實驗研究，受到腫瘤研究工作者的普遍重視。芪酵粉（FermentedAstragalusmembranaceusPowder，FAP）系采用中藥黃芪（Astragalusmembranaceus）經液體深層發酵后低溫干燥并進行破壁處理而制得的棕色粉末。近年來，黃芪及其復方的對腫瘤化療藥物的增效和減毒作用頗受重視，但黃芪發酵產品對化療藥物的減毒作用尚未見報道。本研究通過給小鼠腹腔注射環磷酰胺（CTX）建立骨髓抑制、免疫損傷模型，觀察FAP對大劑量CTX所致小鼠骨髓抑制、免疫器官萎縮、腎功能損傷等毒性反應的對抗作用，為臨床應用中藥防治化療毒副反應提供實驗依據。

1材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1藥品與試劑

芪酵粉為棕褐色粉末，系由中藥黃芪經液體深層發酵后低溫干燥，并進行破壁處理而制得。每克干粉相當于黃芪0.92g。實驗前以蒸餾水配成5%、10%和20%懸液備用，用前搖勻。環磷酰胺粉針劑200mg/支，上海華聯制藥公司生產，用滅菌生理鹽水稀釋后放冰箱內保存備用，一周有效。谷丙轉氨酶(ALT)測定試劑盒、尿素氮（BUN）測定試劑盒購自石家莊市制劑廠。

1.1.2動物

昆明（KM）種小鼠，雌雄各半，健康，6~8周齡，體重18~22g，河北醫科大學實驗動物中心提供，置于室溫22±2℃、相對濕度40%~60%的實驗室中進行實驗。

1.1.3主要儀器

ECOM-F6124型半自動生化測定儀，德國Eppendoff公司生產。AC-9000型全自動血細胞計數儀，廣州倍肯科技實業有限公司生產。

1.2實驗方法

1.2.1分組及給藥^［1，2］

選用昆明種小鼠若干，隨機分5組，分別為正常對照組（Control）、CTX造型組（CTX）、CTX加FAP低、中、高劑量組（FAP_L、FAP_M、FAP_H）。從實驗第1天開始，第3～5組分別給予FAP灌胃（ig），劑量分別為1g#8226;kg^-1、2g#8226;kg^-1和4g#8226;kg^-1，每日1次，連續10d。正常對照組和CTX組均ig等容積蒸餾水（0.2mL/10g體重）。同時，除正常對照組外，其余4組均于實驗第7天給予CTX100mg#8226;kg^-1腹腔注射（ip），連續3d，以制作小鼠骨髓抑制、肝腎功能損害、免疫損傷模型。

1.2.2取材及指標檢測

于末次給CTX后3d，摘眼球取血，按常規測外周血WBC、RBC和HGB，分離血清測定ALT和BUN。隨后處死小鼠，剝離小鼠右股骨，提取骨髓，計數骨髓有核細胞^［3］，記錄骨髓有核細胞數/骨髓細胞總數（N/T）。摘取脾臟、胸腺，分析天平稱濕重，計算脾指數和胸腺指數。

脾指數=脾重量（mg）/體重（10g）；胸腺指數=胸腺重量（mg）/體重（10g）。

1.3統計方法

采用SPSS統計分析軟件進行統計學分析，實驗數據用均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，多個實驗組與對照組的比較采用LSD法。以α=0.05為檢驗水準，以雙側P＜0.05為具有統計學意義。

由表1可見：FAP高劑量與CTX合用外周血WBC與CTX組比較，明顯升高，差異有顯著性（P＜0.01）；FAP中、高劑量與CTX合用骨髓有核細胞數/總細胞數與CTX組比較明顯升高（P＜0.05、P＜0.01）。表明FAP對CTX所致小鼠外周白血細胞減少和骨髓有核細胞數減少有顯著對抗作用。

2.2FAP對小鼠血清ALT和BUN的影響

FAP對CTX造型小鼠血清ALT和BUN的影響結果見表2。

表2FAP對CTX造型小鼠血清ALT和BUN的影響

由表2可見：FAP低、中、高劑量與CTX合用血清BUN與CTX組比較均明顯降低（P＜0.01）；小鼠血清ALT各組間無顯著性差異（P＞0.05）。表明FAP對CTX所致小鼠血BUN含量增高有明顯對抗作用，對小鼠血清ALT無明顯影響。

2.3FAP對CTX所致小鼠免疫器官萎縮的影響

FAP對CTX所致小鼠免疫器官萎縮的影響結果見表3。

由表3可見：FAP高劑量組脾指數與CTX組比較有顯著性差異（P＜0.05）；胸腺指數各組間無顯著性差異（P＞0.05）。表明FAP對CTX致脾臟萎縮有明顯對抗作用，對CTX所致胸腺萎縮無明顯影響。

3討論

環磷酰胺為臨床廣泛應用的廣譜抗腫瘤藥物，然而該藥屬于細胞周期非特異性藥物，在殺傷腫瘤細胞的同時，機體正常細胞也受到損傷，產生骨髓抑制、消化道反應、免疫抑制、肝、腎損傷等毒副反應。而且環磷酰胺的劑量越大，其毒性作用也越強。環磷酰胺的這種特點極大地限制了它的使用劑量和使用時間，從而影響其使用效果。

表3FAP對CTX所致小鼠免疫器官萎縮的影響(x±s)

近年來研究表明，中醫藥在防治腫瘤化療所致的毒副反應方面顯示了其特有的優勢。中醫對化療毒副反應的治療主要以扶正培本為主，多運用補氣養血、健脾和胃和滋補肝腎等治療原則進行治療。中醫藥的應用，不僅可減少或中和抗腫瘤藥物對人體的毒性，而且能增強機體免疫機能，改善體內代謝水平、糾正人體的功能紊亂，提高機體的抗癌能力，以達到扶正消瘤的目的。從傳統的中藥中篩選生物反應調節劑，并用現代的科學方法將其研制成腫瘤化療新的中藥增效、減毒劑已成為目前抗惡性腫瘤研究的重要課題。

芪酵粉為中藥黃芪經現代科學方法研制成的一種棕褐色粉末。黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，其味甘、性微溫，中醫認為其具有補氣升陽、固表止汗、消腫生肌的功能。現代研究證實：黃芪含有多種有效成分，具有提高人體免疫功能，保護骨髓和腎上腺皮質功能，與化療同用可起到增效減毒作用^［4］。黃芪及其復方在臨床上對抗腫瘤化療引起的毒副反應取得較好的療效^［5~7］。動物實驗也表明，黃芪對環磷酰胺所致骨髓造血功能損害有明顯保護作用，并可逆轉環磷酰胺對免疫功能的抑制現象^［8］。

本實驗用黃芪發酵產品“芪酵粉”與環磷酰胺聯合應用也出現了與上述類似的減毒作用。實驗結果表明，芪酵粉可對抗環磷酰胺所致的小鼠外周血白細胞減少、骨髓有核細胞數減少和脾重減輕等毒性反應，保護腎功能，對化療藥環磷酰胺有顯著的減毒作用。

中藥發酵是現代中藥研究的熱點。有研究發現，某些中藥經微生物發酵技術處理后，其免疫增強作用明顯優于傳統煎劑，化療減毒作用也比傳統煎劑強^［9］。本實驗結果顯示，黃芪發酵產品FAP4g#8226;kg^-1（相當于黃芪3.68g#8226;kg^-1）給小鼠灌胃10d，即對環磷酰胺有顯著的增效減毒作用，而文獻報道中，應用黃芪水煎液與環磷酰胺合用產生增效和減毒作用的給藥劑量為75g#8226;kg-1［10］，提示黃芪經發酵技術處理后，其化療增效和減毒作用可能比傳統煎劑強。該制劑性質穩定、便于保存、價廉易得，有可能作為一種理想的化療輔助用藥，降低化療藥的毒副反應，提高療效，值得進一步開發研究。

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（責任編輯：王尚勇）