人涎腺腺樣囊性癌嗜神經侵襲的大體形態(tài)學研究

孫沫逸　譚爰興　呂成鵬　賈文榮　李建虎　楊耀武

[摘要]目的：探討人涎腺腺樣囊性癌嗜神經侵襲在大體形態(tài)學上的發(fā)生發(fā)展過程。方法：將人涎腺腺樣囊性癌肺高轉移癌Acc-M細胞系接種于5只裸鼠雙側臀部肌肉內，從荷瘤長出開始，解剖出荷瘤與神經以觀察它們的關系，以后每隔5天在同一部位解剖一次,連續(xù)觀察1個月，同時觀察和對比各裸鼠神經受腫瘤侵襲后相應肢體的功能變化。結果：腺樣囊性癌發(fā)生嗜神經侵襲的方式是，瘤組織細胞以神經干為中心以邊生長邊包裹邊侵襲的方式進行的。結論：腺樣囊性癌嗜神經侵襲是以一種特殊的方式進行的，這對臨床診斷與治療具有良好的指導意義。

[關鍵詞]腺樣囊性癌；坐骨神經；神經侵襲；裸鼠

[中圖分類號]Q813.1[文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455（2009）02-0205-03

General morphology study of neural invasion withhuman salivary adonoid cystic carcinoma

SUN Mo-yi,TAN Ai-xing,LV Cheng-peng，JIA Wen-rong, LI Jian-hu，YANG Yao-wu

(Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Stomatological College, the Fourth Military Medical University, Xi'an 710032, Shaanxi, China)

Abstract:ObjectiveTo investigate development and grouth process of neural invasion with human salivary adonoid cystic carcinoma by general morphology study.MethodsHuman salivary adenoid cystic carcinoma line Acc-M cells were injected into intramusculary of both sides rump of five nude mice. since tumor can be seen at first, dissection of nude mice to observe their relation between tumor and nerve one time per five days, successive observation have been done for one month, at the same time, function change of all limbs with invaded nerve were observed and compared.ResultsNeurotropism of ACC working at the way of wraping nerve while which be grewing, and neural invasion is specific biological behaviour of adonoid cystic carcinoma. Conclusionneural invasion with adonoid cystic carcinoma were doing at a specific style, it have a good instruction sense in the clinical diagnosis and therapy.

Key words: adonoid cystic carcinoma; sciatic nerve; neural invasion; nude mouse

腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma，ACC)有沿神經侵襲的生物學特性。近年來人們發(fā)現，這一特性是影響該腫瘤患者復發(fā)和生存的重要預后因素[1]。ACC對神經的侵襲機理非常復雜，目前仍處在探索之中，本實驗采用ACC-M細胞接種于裸鼠的坐骨神經附近，在不同時期觀察腫瘤生長及與外周神經的關系，從大體形態(tài)學上進一步了解ACC神經侵襲的特征性生物學形為，為探討其嗜神經侵襲的機理及防治方法奠定基礎。

1材料和方法

1.1細胞株：人涎腺腺樣囊性癌肺高轉移癌Acc-M細胞株由第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)學院生物教研室提供，RPMI+15%小牛血清37℃培養(yǎng)。

1.2實驗動物：4周齡雄性BABL/C nu/nu裸小鼠，由上海科學院實驗動物中心提供，共5只，SPF條件下飼養(yǎng)。

1.3細胞懸液：取體外培養(yǎng)指數生長期Acc-M細胞經0.125%胰酶消化，吹打成單細胞懸液，經苔盼藍染色確定活細胞數達90%以上，細胞經1 000r/min離心，共5min,棄去上清，加入PBS液吹打成單細胞懸液后再離心，共三次，最后加入無血清培養(yǎng)液將細胞數稀釋調整成5×106/ml。

1.4實驗方法：用乙醚麻醉裸小鼠，在無菌條件下取制備好的單細胞懸液注射于裸小鼠雙側坐骨神經(膝蓋至尾巴根部連線的中1/3)附近，各注射0.2ml，自荷瘤長出開始，以后每隔五天在同一部位解剖一次進行連續(xù)觀察1個月，同時觀察和對比各裸鼠神經受腫瘤侵襲后相應肢體功能變化情況。最后比較受腫瘤完全侵襲的神經與正常神經的離體狀況。

1.5 神經受侵襲的標準：侵襲標準為光鏡下有腫瘤細胞侵入坐骨神經束膜內，同時觀察神經受侵襲后的功能表現。功能障礙標準為受侵襲神經所支配的肌肉出現癱瘓，肢體癱瘓表現為肢體不能正常自主運動，同時五個小爪自然并攏下垂無抓力。

2結果

2.1 荷瘤的形成：通過連續(xù)對接種后的裸鼠進行密切觀察，于第9天可見有2只裸鼠雙側及2只裸鼠單側臀部長出荷瘤，第10天見剩下那只裸鼠雙側臀部長出荷瘤，其中1只的另一側始終未發(fā)現長出荷瘤。于30天時發(fā)現有一只出現單側肢體運動功能障礙。

2.2 荷瘤的成長對神經的侵襲過程：見表1，圖1。

2.3 受侵襲神經的離體狀況：切除受腫瘤完全侵襲的神經，與正常離體神經相比，見神經外膜大部分被破壞，色暗紅而失出光澤，彈性明顯減退，卷曲，粘性增加。見圖2。

3討論

ACC的浸潤性極強，術后局部復發(fā)與其嗜神經侵襲密切相關，故臨床治療難點之一就是ACC侵襲中的嗜神經性，因而探討ACC嗜神經侵襲的機制具有重要的臨床意義。多年來研究嗜神經侵襲性腫瘤的特性以關注癌細胞對于神經組織特異性的趨化移動、粘附為主，來解釋嗜神經性侵襲[2-3]。本實驗通過對Acc-M接種于臀部肌肉內坐骨神經附近，切除發(fā)生神經侵襲并出現功能障礙的荷瘤，以從組織學形態(tài)上來研究ACC嗜神經侵襲的機制。

肉眼觀荷瘤塊是沿神經的長軸方向呈膨脹性生長，并為多個瘤結節(jié)融合而成。從而可以推理出，移植瘤對神經的侵襲是在神經的周圍瘤細胞先形成一小瘤結節(jié)，先向神經靠近和粘附，瘤結節(jié)在生長的同時，其周邊沿神經又長出小的突起，在神經的背或腹側融合，對神經形成包裹，然后沿神經長軸向近遠兩端發(fā)展，同時向周圍肌肉組織內長出新的瘤結節(jié)突起，從而完成腫瘤對神經及周圍組織的侵襲過程。

從以上結果不難分析出受腫瘤完全侵襲的神經外觀表現，由于外周神經長時間受腫瘤組織包裹和擠壓，一方面神經失出了正常的血液供給而缺氧變性；另一方面腫瘤細胞侵襲和破壞了周圍神經的保護屏障，從而失出了正常的組織保護和支持，最終致周圍神經萎縮而喪失功能。

之所以選擇坐骨神經做為本實驗的研究對象，坐骨神經為裸鼠體內最粗的運動神經之一，能較好地模擬ACC在頭頸部對神經的侵襲所致相應的肌肉癱瘓，能真實可靠地反映ACC對神經侵襲的程度和過程，坐骨神經位于肌肉內，全長約為 2.3cm，5號針頭進針約 0.3cm，腫瘤種植時只需將細胞懸液注入肌肉內即可，范圍較大且較容易掌握。此外，本實驗從腫瘤生長與神經關系進一步證實了ACC的嗜神經性。

在本實驗中發(fā)現ACC以神經為中心向近遠端呈連續(xù)性侵襲，ACC不但是一個主動的神經侵襲過程，而且是一個與神經互相作用的結果。本實驗是我們研究ACC神經侵襲機制及防治方法的良好模型。

[參考文獻]

[1]Chummun S,McI ean NR，Kelly CG,el a1．Adenoid cystic carcinoma of the head and neck[J]．Br J Plast Surg,2001,54(6)：476-480．

[2]Iwamoto S,Burrows R, Agoff S, et al.The p75 neurotrophin receptor, relative to other Schwann cell and melanoma markers, is abundantly expressed in spindled melanomas[J]. Am J Dermatopathol,2001,23：288-294．

[3]Okada Y, Takeyama H, Sato M, et al. Experimental implication of celiac ganglionotropic invasion of pancreatic cancer cells bearing c-ret proto-oncogene with reference to glial cell line derived neurotropic factor(GDNF) [J]. Int J Cancer,1999,81(1):67-73．

[收稿日期]2008-12-18

編輯/張惠娟