豬口蹄疫Ｏ型合成肽疫苗免疫效果試驗(yàn)

摘要:為了更好地了解豬口蹄疫O型合成肽疫苗與滅活疫苗免疫后抗體水平之間的差異，在梅州市選擇2個(gè)規(guī)模化養(yǎng)豬場，每個(gè)豬場分2組，對試驗(yàn)豬分別免疫豬口蹄疫O型合成肽疫苗和豬口蹄疫O型滅活疫苗，對接種疫苗的試驗(yàn)豬進(jìn)行免疫應(yīng)激觀察，結(jié)果顯示:注射合成肽疫苗試驗(yàn)豬未出現(xiàn)不良免疫副反應(yīng)，說明用合成肽疫苗臨床使用的安全性較高;采用豬O型口蹄疫VP1抗體檢測試劑盒和正向間接血凝試驗(yàn)分別對使用上述兩種口蹄疫疫苗免疫21d后的豬血清進(jìn)行檢測，結(jié)果表明:免疫豬口蹄疫O型合成肽疫苗用豬O型口蹄疫VP1抗體檢測試劑盒檢測，抗體陽性合格率達(dá)到92.50%，免疫豬口蹄疫O型滅活疫苗用正向間接血凝試驗(yàn)檢測，免疫合格率為35.83%，說明豬口蹄疫O型合成肽疫苗接種后的免疫效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)滅活疫苗。

關(guān)鍵詞:合成肽疫苗;口蹄疫;抗體;正向間接血凝試驗(yàn)

中圖分類號:S852.5+2文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1007-273X(2009)07-0028-02

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄獸，偶見于人和其他動物。臨床上以口腔黏膜、蹄部及乳房皮膚發(fā)生水皰和潰瘍?yōu)橹饕卣鳌Ｔ摬【哂袕?qiáng)烈的傳染性，一旦發(fā)病，傳播速度很快，往往造成大流行，不容易控制和消滅，帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此，世界動物衛(wèi)生組織(OIE)一直將該病列為發(fā)病必須報(bào)告的A類動物疫病名單之首[1]。目前對該病的防制主要是采用強(qiáng)制免疫、禁運(yùn)、撲殺、消毒、封鎖等措施，而免疫接種是最主要的也是最經(jīng)濟(jì)的防控措施。目前，主要是研制和應(yīng)用滅活疫苗[2]，但該類滅活苗干擾因素多，對野毒與疫苗產(chǎn)生的抗體鑒別困難，而且疫苗的自身缺陷使之無法克服過敏反應(yīng)和帶毒的生物安全隱患問題[3]，故許多學(xué)者把免疫譜廣、免疫持續(xù)期長、安全性好的新型疫苗作為目前口蹄疫的主要研制方向。豬口蹄疫O型合成肽疫苗是用固相多肽合成技術(shù)在體外人工合成含有口蹄疫病毒主要抗原位點(diǎn)的多肽[4]，并連接人工合成的可激活輔助性T細(xì)胞的短肽，以此作為免疫原與進(jìn)口佐劑混合乳化制成，能夠很好的預(yù)防豬O型口蹄疫的發(fā)生。

本試驗(yàn)選擇在梅州市的2個(gè)規(guī)模化養(yǎng)豬場，應(yīng)用豬口蹄疫O型合成肽疫苗、豬口蹄疫O型滅活疫苗進(jìn)行免疫效果試驗(yàn)。通過觀察免疫后臨床反應(yīng)和測定免疫前和首次免疫后21d后的抗體效價(jià)水平，對豬口蹄疫O型合成肽疫苗及豬口蹄疫O型滅活疫苗的免疫反應(yīng)情況以及抗體水平進(jìn)行比較，為豬口蹄疫O型疫苗選取及制定免疫方案提供依據(jù)。現(xiàn)將試驗(yàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗(yàn)動物在梅州市的2個(gè)規(guī)模化養(yǎng)豬場(以下分別稱為I場和II場)中選用品種、來源相同的50日齡左右的同一批體質(zhì)健康仔豬240頭。

1.1.2試驗(yàn)疫苗豬口蹄疫O型合成肽疫苗，申聯(lián)生物醫(yī)藥(上海)有限公司生產(chǎn)，批號:20071108;豬口蹄疫O型滅活疫苗，國內(nèi)某著名生物制藥廠生產(chǎn)，批號:09020001。

1.1.3檢測試劑盒豬O型口蹄疫VP1抗體檢測試劑盒，上海優(yōu)耐特生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，批號:200708023;口蹄疫O型正向間接血凝試驗(yàn)診斷液，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號:081015。

1.2方法

1.2.1試驗(yàn)分組每個(gè)豬場的豬分為2組，每組60頭，分別接種豬口蹄疫O型滅活疫苗及豬口蹄疫O型合成肽疫苗。

1.2.2免疫時(shí)間及劑量按照說明書的免疫劑量對50日齡的試驗(yàn)豬只進(jìn)行免疫接種，首免口蹄疫O型滅活疫苗，每頭仔豬2mL;首免口蹄疫O型合成肽疫苗，每頭仔豬1mL。

1.2.3血樣采集首免前采血檢測母源抗體，免疫后21d采血檢測。

1.2.4檢測方法母源抗體和滅活疫苗的抗體使用豬口蹄疫O型正向間接血凝試驗(yàn)檢測;免疫合成肽疫苗的抗體使用豬O型口蹄疫VP1抗體檢測試劑盒檢測。

1.2.5免疫判定標(biāo)準(zhǔn)豬O型口蹄疫抗體按正向間接血凝試驗(yàn)的檢測結(jié)果，即抗體滴度≥128判定為免疫合格;VP1抗體ELISA檢測結(jié)果按試劑盒規(guī)定進(jìn)行判定。

2 結(jié)果

2.1免疫副反應(yīng)觀察結(jié)果

免疫口蹄疫O型傳統(tǒng)滅活疫苗的I場有3頭仔豬出現(xiàn)過敏反應(yīng)，其他仔豬均無明顯的反應(yīng)，采食量在免疫后前3d稍有下降。免疫口蹄疫O型合成肽疫苗的仔豬未出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，免疫后的采食量無明顯變化。

2.2母源抗體正向間接血凝試驗(yàn)檢測結(jié)果

在進(jìn)行首免前用正向間接血凝試驗(yàn)對240頭試驗(yàn)豬只進(jìn)行母源抗體的檢測，其中抗體滴度≥128的為0份。

2.3免疫傳統(tǒng)滅活疫苗后的抗體檢測結(jié)果

在I、II兩個(gè)豬場進(jìn)行傳統(tǒng)滅活疫苗免疫的120頭試驗(yàn)豬只進(jìn)行相關(guān)抗體水平的檢測，抗體滴度≥128的有43份，免疫合格率為35.83%。其中I場的60份血清有23份血清的抗體滴度≥128，免疫合格率為38.33%;II場的60份血清有20份血清的抗體滴度≥128，免疫合格率為33.33%(檢測結(jié)果詳見表1)。

2.4免疫合成肽疫苗后的ELISA檢測結(jié)果

在I、II兩個(gè)豬場進(jìn)行合成肽疫苗免疫的120頭試驗(yàn)豬只進(jìn)行相關(guān)抗體水平的檢測，抗體為陽性合格的有111份，免疫合格率為92.50%。其中I場的60份血清抗體中有55份為陽性合格，免疫合格率為91.67%;II場的60份血清抗體中有56份為陽性合格，免疫合格率為93.33%(檢測結(jié)果詳見表1)。

3 討論

(1)在本試驗(yàn)中，I場和II場的試驗(yàn)結(jié)果并無顯著差異。免疫接種疫苗21d后，免疫口蹄疫合成肽疫苗的總體合格率(92.50%)明顯高于傳統(tǒng)的滅活疫苗的總體合格率(35.83%)，表現(xiàn)出口蹄疫合成肽疫苗良好的免疫原性。

(2)從免疫接種后的臨床反應(yīng)來看，接種合成肽疫苗的豬只均未出現(xiàn)過敏反應(yīng)、發(fā)熱癥狀、注射部位吸收不良等現(xiàn)象。其主要原因是合成肽疫苗抗原為純化的中和性抗原多肽，無任何雜質(zhì)干擾，具有免疫的高效性，更不含任何抗原多肽以外的異體蛋白，不易產(chǎn)生過敏反應(yīng)。

(3)在本試驗(yàn)中可以發(fā)現(xiàn)豬O型口蹄疫VP1抗體檢測試劑盒比較適合用于豬口蹄疫O型合成肽疫苗的抗體檢測，不適合傳統(tǒng)滅活疫苗的檢測，而正向間接血凝試驗(yàn)對合成肽疫苗的檢測穩(wěn)定性較差。

參考文獻(xiàn):

[1]蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)(第四版)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2001.

[2]甄輯銘.傳染病學(xué)(第二版)[M].廣州:廣東高等教育出版社，1991.

[3]朱海霞，張強(qiáng)，顏新明，等.豬口蹄疫疫苗免疫接種副反應(yīng)[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2007，37:1067-1068.

[4]盧永干.我國口蹄疫滅活疫苗生產(chǎn)工藝的技術(shù)進(jìn)步[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2007，37:948-950.