通心絡(luò)對腦梗死合并糖尿病患者血小板活化標(biāo)記物表達(dá)的影響

[摘要] 目的 探討急性腦梗死合并糖尿病患者血小板活化狀態(tài)及通心絡(luò)治療對血小板活化狀態(tài)的影響。方法 采用流式細(xì)胞檢測方法，對急性腦梗死合并糖尿病患者血小板活化標(biāo)記物P選擇素(CD62p)及PAC-1進(jìn)行檢測研究。結(jié)果 急性腦梗死合并糖尿病患者血小板活化標(biāo)記物表達(dá)高于單純腦梗死組，明顯高于正常對照組，通心絡(luò)及阿司匹林能明顯抑制血小板活化標(biāo)記物表達(dá)，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 急性腦梗死發(fā)生過程中，血小板活化起著重要作用，且高血糖促進(jìn)體內(nèi)血小板活化，加重腦血管病的發(fā)生;通心絡(luò)及阿司匹林在治療急性腦梗死及腦梗死合并2型糖尿病中能明顯抑制血小板活化，在一定程度上阻斷了血小板活化過程，具有治療作用。

[關(guān)鍵詞] 通心絡(luò); 腦梗死; 糖尿病; CD62P; PAC-1

[中圖分類號] R743 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701(2009)33-53-02

血小板活化在急性缺血性腦血管病的發(fā)生過程中起著重要作用。研究表明，血小板膜表面蛋白標(biāo)記物P選擇素(CD62p)及PAC-1為檢測血小板活化程度和功能狀態(tài)的靈敏指標(biāo)，流式細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用為評價血小板在體內(nèi)的活化程度提供了可靠方法[1]。

本研究我們通過流式細(xì)胞技術(shù)，對急性腦梗死患者采用不同抗血小板治療，分析對照阿司匹林及通心絡(luò)兩種抗血小板藥物對血小板活化標(biāo)記物表達(dá)的影響，為急性缺血性腦血管病的預(yù)防、治療提供可靠理論依據(jù)。

1 對象和方法

1.1 一般資料

腦梗死患者32例，男20例，女12例;年齡43～76歲，平均(60±8.2)歲。腦梗死合并2型糖尿病患者86例，男50例，女36例;年齡45～75歲，平均(58.3±7.8)歲。全部病例選自2006年6月～2007年12月神經(jīng)科住院治療患者，診斷符合第四屆腦血管病制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，2型糖尿病診斷符合WHO在1985年制定的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，血糖控制理想，同時經(jīng)頭顱MRI檢查證實，排除大面積腦梗死患者，病程在起病6h～3d以內(nèi)，排除腫瘤、血液系統(tǒng)疾病及免疫性疾病，患者入院后按隨機(jī)分組的原則分成三組，第一組(n=42)給予通心絡(luò)口服，每次4粒，每天3次;第二組(n=40)給予拜阿司匹林治療，首次200mg，次日始每次100mg，1次/日，頓服;第三組(n=36)不用抗血小板藥物治療，所有患者在入院第1日開始治療，基礎(chǔ)治療相同，全部給予疏血通注射液靜脈滴注，6mL每日一次連用2周，2周后復(fù)查血小板活化標(biāo)記物的表達(dá)。陰性對照組30例，男18例，女12例;年齡28～60歲，平均(48.3±7.9)歲;為同期醫(yī)院體檢中心健康者，排除高血壓、糖尿病、冠心病、血液系統(tǒng)疾病。

1.2 試劑與儀器

FITC、PE標(biāo)記的血小板對照IgGl、IgM，PE標(biāo)記的抗血小板α顆粒膜蛋白-140(CD62P)McAb，F(xiàn)ITC標(biāo)記的PAC-1，PerCP標(biāo)記CD61，均為美國BD公司產(chǎn)品。流式細(xì)胞儀為BECTONDICKISON公司的FACS Galibur，用Cell Quset軟件。

1.3 方法

取兩只試管，一只加入5μL全血，再加入血小板陰性對照IgG-FITC、IgM-PE和CD61-PerCP McAb各10μL;另一只試管加入5μL全血及PAC-FITC、CD62P-PE和CD61-PerCP McAb各10μL。PerCP McAb各10μL，混勻后室溫避光孵育30min，加入0.5mL PBS緩沖液，立即上機(jī)檢測。

樣品測試前，用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球調(diào)整熒光檢測CV值在2%以下，并設(shè)定血小板光散射的最佳閾值，消除其他細(xì)胞和噪聲干擾。熒光檢測經(jīng)對數(shù)放大，收集30000個血小板。測試完畢數(shù)據(jù)存盤后用Cell quest分析軟件分析結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用統(tǒng)計軟件SAS8.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，三組間兩兩比較采用q檢驗(Newman-Keuls法)，組內(nèi)治療前后比較用配對t檢驗，以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

通心絡(luò)對腦梗死合并糖尿病患者血小板活化標(biāo)記物表達(dá)的影響，流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果見圖1-a～d。

流式細(xì)胞儀檢測血小板活化指標(biāo)結(jié)果:圖1-a為檢測時使用的陰性對照;圖1-b為正常對照組檢測結(jié)果，血小板活化水平較低;圖1-c為腦梗死合并2型糖尿病患者血小板活化水平明顯增高;圖1-d經(jīng)過通心絡(luò)治療，腦梗死合并2型糖尿病患者血小板活化水平較治療前下降。

急性期腦梗死組、腦梗死合并糖尿病組及對照組血小板活化指標(biāo)見表1，三組間兩兩比較采用q檢驗，急性腦梗死及腦梗死合并2型糖尿病組血小板活化標(biāo)記物PAC-1、CD62p均顯著高于健康對照組，腦梗死合并2型糖尿病血小板活化標(biāo)記物PAC-1、CD62p高于腦梗死組，但是無統(tǒng)計學(xué)意義。

對腦梗死合并2型糖尿病患者，通心絡(luò)及拜阿司匹林治療治療2周后，組內(nèi)治療前后比較采用t檢驗，血小板活化標(biāo)記物PAC-1、CD62p顯著下降，但是三組間比較q檢驗差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

3 討論

血小板的質(zhì)與量的變化在腦梗死發(fā)病中起重要作用。正常人的血小板基本處于靜息狀態(tài)，而在生理和病理性的血栓前狀態(tài)、血栓性疾病過程中，血小板發(fā)生活化、激活，血小板可釋放出多種活性物質(zhì)以及表達(dá)多種分子標(biāo)志物，促進(jìn)血管內(nèi)血栓的形成。腦梗死時由于組織損傷，內(nèi)皮下膠原組織暴露，血小板向內(nèi)皮下黏附，誘使血小板活化，使血小板表面CD62p表達(dá)明顯增加。CD62p、凝血酶敏感蛋白和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa一起加速血小板與內(nèi)皮下基質(zhì)的黏附及與纖維蛋白原等結(jié)合，血小板活化時表達(dá)的CD62p選擇糖蛋白配體結(jié)合，促進(jìn)白細(xì)胞與血小板的黏附及在血栓部位聚集，在啟動及擴(kuò)大的血栓形成中具有重要意義[1，2]。

陳保國[3]等研究表明均衡其他危險因素后，PAC-1、CD62p與腦梗死程度具有獨(dú)立相關(guān)性，對活化血小板功能的檢測可作為預(yù)測腦梗死發(fā)生的指標(biāo)。當(dāng)血小板黏附于血管破損處或受到活化作用后即被活化，暴露出纖維蛋白原受體(PAC-1)，啟動并促進(jìn)血栓形成;而位于血小板α顆粒和內(nèi)皮細(xì)胞棒狀小體內(nèi)的CD62p在靜止期不表達(dá)或很少表達(dá)。CD62p不僅對血小板的黏附起促進(jìn)作用，而且對血小板聚集有重要作用，在腦梗死的發(fā)生中具有重要作用。

通心絡(luò)膠囊是由人參、水蛙、全蝎、娛蛤、土鱉蟲、蟬蛻、赤芍、冰片等制成的復(fù)方制劑，具有益氣活血、通絡(luò)止痛功效[4]，藥效學(xué)研究顯示:通心絡(luò)膠囊能減輕局灶性腦缺血所致的腦組織損傷，減小腦梗死范圍，改善神經(jīng)損傷癥狀，增加腦血流量，降低全血粘度，明顯抑制血小板聚集和血栓形成，延長凝血時間。

糖尿病是心腦血管病的重要危險因素，高血糖可損傷內(nèi)皮細(xì)胞，促使血小板活化。血小板活化為腦梗死的早期因素，應(yīng)早期檢測血小板活化標(biāo)記物CD62p、PAC-1的水平;應(yīng)用抗血小板藥物預(yù)防，可以有效治療糖尿病患者血小板的活化，對防止糖尿病患者腦血管病發(fā)生具有重要意義。

本研究表明腦梗死患者血小板明顯活化，腦梗死合并2型糖尿病患者活化更加顯著，血小板活化是腦梗死的重要發(fā)病機(jī)制。通心絡(luò)具有抗血小板聚集、活化及降低血粘度作用;本研究顯示通心絡(luò)在腦梗死合并2型糖尿病患者，能夠有效降低血小板的活化。在腦梗死的治療中如果患者存在阿司匹林抵抗或者禁忌，可以使用通心絡(luò)控制血小板活化，在腦梗死的治療中具有應(yīng)用價值。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Atkinson C，Zhu H，Qiao F，et al. Complement-dependent P-selectin expression and injury following ischemic stroke[J]. J Immunol，2006，177(10):7266.

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[3] 陳保國. 頸動脈粥樣硬化性腦梗死引起血小板活化機(jī)制[J]. 老年醫(yī)學(xué)雜志，2005，6(24):448-449.

[4] 吳以嶺. 絡(luò)病學(xué)[M]. 北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社，2004:277-278.

(收稿日期:2009-06-15)