淀粉酶測定方法難以標準化原因探討

耿素敏　白忠榮　袁家馳

【摘要】 淀粉酶測定在許多疾病中起著至關重要的作用，尤其在急腹癥的診斷、鑒別診斷中。但其測定方法很多，難以標準化，也給臨床資料的交換帶來困難。通過分析比較，國內外應用的淀粉酶測定方法、試劑和儀器情況，認為染料釋放法中的另一類以染料和可溶性限定底物結合的方法，其底物分子結構明確，穩定性顯著提高，其為動力學法，隨著生化分析儀的普及，此方法已成為淀粉酶測定的主流。但我國地域廣闊，人口眾多，經濟發展很不平衡，有不少貧困地區，所以很難在短時間內普及動力學法。干化學法、濕化學法、比色法并存的現象還需持續一段時間。

【關鍵詞】 淀粉酶；標準化；動力學法

α-淀粉酶(ΑMS，EC3.2.2.1)的升高見于急性胰腺炎，流行性腮腺炎等疾病，急性胰腺炎時，血和尿中的a-淀粉酶(AMS)活性顯著增高。其測定方法很多，尚難以標準化，由于測定原理和底物性質的不同，淀粉酶的測定方法已超過200種以上^[1]。各實驗室間α-淀粉酶測定值離散度較大，對室間和室內質評的開展極為不利，也給臨床資料的交換和臨床診斷帶來困難，現分析如下。

1 α-淀粉酶測定的價值

-淀粉酶來源于多種器官：胰淀粉酶由胰腺產生并釋放到腸道中，唾液淀粉酶由唾液腺合成并分泌到唾液中。血液中的淀粉酶由腎臟清除并經尿液排泄。因此，尿液淀粉酶活性上升反映了血清淀粉酶活性的升高。-淀粉酶是將淀粉降解為麥芽糖的水解酶類。急性胰腺炎發作患者在腹痛開始后的幾小時內，血液淀粉酶活力升高，約12 h后達到峰值；并至少在5 d后活力回復至參考范圍內。由于多種非胰腺疾病如腮腺炎、腎功能不全等也會引起 檢測血清、尿液中 -淀粉酶的升高。其升高程度低于急性胰腺炎發作時。急性胰腺炎是一種急腹癥，必須及時做出正確的診斷和鑒別診斷。1929年Elman等發現血清淀粉酶升高對診斷急性胰腺炎有價值，使診斷有了可靠的客觀指標，淀粉酶的測定使成為急性胰腺炎最常用的比較準確的診斷方法，尿淀粉酶測定因標本易采集，而被作為急性胰腺炎首選的檢查項目^[2]。一般而言，尿淀粉酶活力較正常高出2倍以上才有意義，年齡性別對酶活力無影響，胸、腹水測定淀粉酶也常被臨床上作為診斷依據。血液和尿液中的淀粉酶活性，并不一定成平行關系。一般認為血液中淀粉酶活性反應正確、敏感，但在急性胰腺炎時，血液淀粉酶上升為一過性，易造成誤診、漏診、而相對尿液淀粉酶出現高值往往時間較長。血液和尿液同時測定對急性胰腺炎的診斷和鑒別診斷具重要的價值。

2 方法學比較

由于測定原理和底物性質的不同，淀粉酶的測定方法已超過200種以上。這些方法可歸納為二類：天然淀粉底物方法和(分子組成)確定底物方法。以天然淀粉為底物的測定方法，如淀粉分解法、糖化法和色素淀粉法等。由于天然淀粉分子結構的不確定，故不同植物來源的淀粉和不同批號的淀粉，其分子結構和化學性質不盡相同，因此難以達到方法學標準化，測定誤差大。目前除碘·淀粉法外，這類方法已被淘汰。使用(分子組成)確定的淀粉酶底物和輔助酶與指示酶組成的淀粉酶測定系統，可以改進酶反應的化學計量關系，能更好地控制和保持酶水解條件的一致性。這些底物有小分子寡聚糖(含3～7個葡萄糖單位)和對·硝基苯酚·糖苷等。其中，麥芽戊糖和麥芽四糖是極好的淀粉酶底物，試劑穩定，水解產物確定，化學計量關系明確。目前市售試劑盒就有好幾種，以寡聚糖為底物的淀粉酶測定系統^[1]。常用的碘-淀粉比色法，方法雖簡單，但重復性不好，酶反應線性差，測定范圍窄，高單位時往往誤差較大^[3]，常困擾著臨床的診斷與鑒別診斷，國內外專家在這方面做了大量的探討^[4-6]。碘量法中的碘比色法因底物難以標準化，反應不成零級反應等缺點而被認為不是理想方法，但因其簡單、快速、靈敏和價廉而在國內應用較廣。糖化法因受內源性GLU的干擾，熒光法需特殊儀器，染料稀釋法中的染料淀粉需離心分離等缺點，均被認為不是理想方法。染料釋放法中的另一類以染料與可溶性限定底物結合的方法，近年來得到不斷的發展主要表現為人工合成的底物分子結構明確，穩定性顯著提高^[7]，這類方法變成了推薦方法，其方法為動力法，隨著生化分析儀的普及，此方法得以實施，已成為目前α-淀粉酶測定方法的主流。由于多學科新技術在干化學領域相互滲透，結合干化學分析有了長足的發展，干化學法在臨床生化檢驗中得以應用推廣。該法具有簡便、快速、試劑保存時間長、干擾因素少等優點，而成為急診生化檢驗的又一新方法。干化學是指將液體檢測樣品直接加樣到干燥試劑片上，以被測樣品的水分作為溶劑所引起的特定的化學反應，從而進行化學分析的方法，是以酶法為基礎的一類分析方法。就淀粉酶干片而言，其方法也來源于染料稀釋法。它是由上至下分為上層載片、涂片層、試劑層、支持物和下層載片五層，粘合成一個簿片，試劑層中的活性試劑是染色的支鏈淀粉和一種媒染劑，其他成分包括顏料，粘合劑和表面活性劑。將標本加在載片上，圖片層均勻擴散，此層含有染色淀粉，染色淀粉與標本中的淀粉酶作用，水解成小分子的染色糖類，該糖類擴散至下面的試劑層形成很強的顏色復合物，在固定保溫期后，測定來自有色層的反射光量，從而得出淀粉酶的濃度^[8]。干化學法由于大家的認知程度，儀器價格，試劑價格等諸多因素還不能推廣。

3 結論與展望

我國地域廣闊、人口眾多、經濟發展還很不平衡，有不少貧窮地區，所以很難在短時間內普及動力法淀粉酶測定。干化學法，濕化學法，比色法并存的現象還需持續一段時間。干化學發與濕化學法許多專家學者的探討具有很好的相關性^[9]。隨著干化學技術與配套儀器的日益成熟，干化學分析必將得到越來越廣泛的推廣應用，在急診生化檢側中發揮其應有的作用。

參 考 文 獻

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