橢圓葉花錨中熊果酸含量的測定

李志軍

摘要用薄層色譜法和反相高效液相色譜法對青海兩地區野生橢圓葉花錨中熊果酸含量進行定性定量分析。結果表明,超聲法提取橢圓葉花錨中的熊果酸含量較高,青沙山地區花錨中熊果酸含量高于大通寶庫鄉。

關鍵詞花錨;熊果酸;反相高效液相色譜;含量測定

中圖分類號S58;Q946文獻標識碼A文章編號 1007-5739(2009)11-0016-01

橢圓葉花錨(Halenia elliptica D. Don)為龍膽科花錨屬植物,是藏藥中用于治療肝膽系統疾病的常用植物藥,泛稱“藏茵陳”?；ㄥ^的主要化學成分為山酮(Xanthone)、黃酮(Flavone)和三萜(Triterpene)類化合物,已經分離鑒定了15種山酮和黃酮成分。熊果酸體外對G+和G-菌及酵母菌均有抗菌活性,還有抗糖尿病、抗潰瘍及降低血脂的作用。近年來的研究顯示,熊果酸除具有抗突變、抗促癌、抗氧化作用外,對消化道腫瘤細胞和白血病細胞還有細胞毒和誘導細胞凋亡的作用。

1材料與方法

1.1供試材料

供試材料為橢圓葉花錨,于2008年8月初采自青海大通寶庫鄉和平安青沙山,將地上部分自然陰干,粉碎后備用。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器。Waters515高效液相泵,Waters 2996DAD檢測器,Waters Empower色譜工作站,Waters色譜柱恒溫箱,WFH-203B三用紫外分析儀(上海精科實業有限公司生產),電子分析天平,KQ-250DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司生產),RT-9型中藥粉碎機(浙江省縉云縣超力機械廠生產),硅膠Gf 254薄層板(青島海洋化工生產)。

1.2.2試劑。甲醇為色譜純(山東禹王實業有限公司禹城化工廠生產),娃哈哈純凈水,氯仿、乙酸乙酯、甲醇、濃硫酸、磷酸均為分析純。熊果酸對照品(中國藥品生物制品檢定所生產),純度均大于98%。

1.3實驗方法

1.3.1對照品溶液制備。準確稱取熊果酸對照品,加甲醇制成160μg/mL的熊果酸對照品溶液。

1.3.2樣品溶液制備。分別取兩地花錨樣品,每份樣品各2.0g,5次重復。將稱好的樣品置于具塞錐形瓶中,準確加入20mL體積分數為95%的乙醇,超聲處理2h,過濾,濾渣用95%的乙醇洗滌2次,合并濾液,于25mL容量瓶中定容,搖勻,靜置。取適量上述樣品液過0.45μm微孔濾膜,在選定的色譜條件下測定有效成分含量。

1.3.3熊果酸鑒別。取樣品溶液和對照品溶液各10μL點于同一硅膠G板上,以氯仿∶乙酯(體積比)=1∶1為展開劑,展開后取出,晾干。以硫酸∶甲醇(體積比)= 1∶2為顯色劑,置烘箱中烘至顯色清晰。在樣品色譜中,與對照品相應的位置上,顯相同紫紅色的斑點。

1.3.4熊果酸含量測定的色譜條件。THERMO C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm);流速1.0mL/min;柱溫30℃;流動相甲醇-0.4%磷酸(85∶15);檢測波長215nm;色譜分離圖見圖1。

2結果與分析

2.1線性關系考察

用25μL微量進樣器吸取熊果酸160μg/mL 對照品溶液2.0μg、4.0μg、6.0μg、8.0μg、10.0μg、12.0μg注入液相色譜儀,記錄峰面積,以熊果酸對照品進樣量(μg)為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線。結果表明,熊果酸在0.32~1.60μg之間線性關系良好?；貧w方程為y=1 025 388 x-103 368.8(R2=0.999 2)。

2.2 精密度實驗

準確吸取熊果酸對照品溶液5μL,分別重復進樣5次,峰面積積分值RSD為0.93%。

2.3穩定性實驗

準確吸取熊果酸樣品溶液各5μL,于0h、3h、6h、9h、12h

測定峰面積積分值,RSD為1.09%。

2.4重復性實驗

各取同一樣品5份,分別按照含量測定項下的方法測定,記錄熊果酸面積積分值,RSD為1.56%。

2.5加樣回收率

分別取已知含量的5份花錨樣品各約1g,精密加入熊果酸對照品,按“1.3.2”法提取,在原色譜條件下測定,計算回收率,平均回收率為96.51%。

2.6花錨樣品中熊果酸的含量

分別取每份樣品溶液10μL進行分析,并測定峰面積積分值。計算得青沙山地區花錨熊果酸質量分數為0.234%,大通地區花錨熊果酸質量分數為0.153%?？梢钥闯?青沙山地區花錨品質較好。

3結論

3.1提取方法的選擇

比較乙醇超聲和乙醇回流提取方法發現,超聲提取熊果酸含量較高,而且超聲法所用時間短,設備簡單,操作方便。

3.2流動相選擇

結合本實驗結果并參考前人研究,甲醇和H3PO4(0.4%)作為流動相效果較好。

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