半夏的組織培養與快繁試驗

摘 要:以傳統中藥半夏的小塊莖為外植體進行組織培養，對適合不定芽分化增殖、生根的培養基進行了研究。結果表明，利于愈傷組織誘導的培養基為MS+6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0.2 mg/L，利于不定芽增殖的培養基為MS+6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L，利于生根的培養基為MS+ NAA 0.5 mg/L。試驗表明，應用本項組織培養技術大批量生產優質半夏種苗是可行的。

關鍵詞:半夏;不定芽誘導;增殖;組織培養;快速繁殖

中圖分類號:S567.25+9.043文獻標識號:A文章編號:1001-4942(2010)01-0010-02Tissue Culture and Rapid Propagation of Pinellia ternata

YANG Yu-zhen1， WANG Xi-yu2 ， HU Ru-shan1， SUN Ting1

(1. Center of Plant Tissue Culture， Nanyang Agricultural School， Nanyang 473003， China;2. Nanyang Garden Bureau， Nanyang 473003， China)

Abstract The small tubers from Pinellia ternata were used as explants for tissue culture.The culture media for multiplication of adventitious bud and rooting were studied in this paper. The results indicated that the suitable culture medium for inducing calli was MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L， while that for multiplication of adventitious bud was MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L，for rooting was MS + NAA 0.5 mg/L. And it was practicable to produce a large number of high quality Pinellia ternata plantlets by this tissue culture technique.

Key words Pinellia ternata; Adventitious bud induction; Multiplication; Tissue culture; Rapid propagation

半夏(Pinellia ternata)是一味常用中藥，屬天南星科半夏屬，以塊莖入藥。傳統中藥是以野生半夏為原料，既破壞了野生植物資源，又滿足不了藥材供應。人工栽培繁殖力低， 生產周期長，常規育種和育苗無法提供足夠的種苗。應用現代生物學手段對其進行組織培養，建立半夏無性系快速繁殖體系，可以提高其繁殖系數，而且不受地區、季節與氣候限制，便于工廠化生產。

1 材料與方法試驗材料為當地野生半夏。選取健壯半夏的塊莖，用清水沖洗干凈，75%酒精浸15 s，0.1%升汞消毒15 min，然后用無菌水沖洗4～5次，在無菌條件下把半夏塊莖縱切為直徑1 cm切塊，分別接種在不同培養基上。置于2 000 lx光照下，培養25～30 d。

當愈傷組織膨大，出現有綠色小芽點時，轉移到不定芽分化培養基上，每個配方接種20瓶，培養一段時間后，將叢生芽分離接種于篩選出的適合芽分化的培養基上，繼續進行繼代增殖。

當叢生芽長到5 cm左右時自底部切下，接種于生根培養基上進行生根培養，每個生根配方接種20瓶，30 d后進行觀察。

培養條件:基本培養基為MS，每種培養基均加入蔗糖3%，瓊脂0.6%，pH 5.6～5.8，培養溫度24℃。

2 結果與分析

2.1 生長與分化情況

將消毒處理后的塊莖小切塊接種于誘導培養基上，不同激素配比下的誘導情況見表1。

表1結果表明，配方(4)生長較好，外植體周圍有較多顆粒狀愈傷組織，易分散。接種于培養基(2)上的莖尖，愈傷組織過大，過于疏松; 接種于培養基(6)上的外植體形成愈傷組織很小，過于致密。

表1 不同激素配比對誘導形成愈傷組織的影響

培養基編號激素配比6-BANAA誘導愈傷組織情況(第30 天觀察)

(1)(2)0.51.00.20.2外植體周圍愈傷組織過于疏松

(3)2.00.2外植體周圍邊緣開始增厚，出現有愈傷組織。上半部的愈傷組織呈白色，表面較致密，光滑，呈顆粒狀凸起;塊莖的下半部的愈傷組織呈灰色，表面粗糙，呈根狀凸起，不易分散。

(4)0.20.5外植體周圍有較多顆粒狀愈傷組織

(5)0.50.5外植體周圍有少許顆粒狀愈傷組織

(6)1.00.5外植體周圍有少許褐色愈傷組織注:基本培養基為MS，激素濃度單位均為mg/L，下表同。

2.1 叢生芽的分化情況試驗結果(表2)顯示，接種于培養基(12)上的愈傷組織塊， 不定芽萌動長成大量叢生芽，芽叢健壯，芽高6.8 cm左右。在培養基(12)上培養約30 d后芽的分化較多，宜將叢生芽切下接種于繼代培養基(12)上，使其成苗后再進行切段培養。此時一些瓶中有少量不定根形成，但比較細弱。

表2不同培養基激素水平對芽分化的影響

培養基激素濃度

處理6-BANAA接種瓶數叢生芽分化較多，生長較好的瓶數叢生芽平均高度(cm)

(7)1.00.120185.2

(8)1.00.220125.0

(9)2.00.220104.3

(10)3.00.220132.7

(11)1.00.520122.7

(12)2.00.520206.8

(13)3.00.52072.3

2.3 生根培養

生根培養基(14)～(17)上生長情況見表3。

從生根情況看，接種于配方(14)上的莖段生根數適中，根粗壯，生根率也高，為最佳配方。接種于配方(15)上的莖段生根也比較多，但根細長，試管苗移栽時不易成活。

表3 不同生根培養基對生根的影響

培養基生根數(條)生根率(%)苗和根的生長情況

(14)MS+ NAA0.55～690芽叢健壯、葉色深綠，同時生出粗壯根系

(15)MS+NAA1.0455苗形態正常，但根系較細弱

(16)MS+IBA1.02～336苗纖細、叢生狀，根較細長

(17)MS+IAA2.02～330葉色淡綠，長勢較弱，根細長

3 煉苗移栽

當幼苗長出5～6片葉，根長3 cm左右時，即可開蓋于溫室內煉苗，煉苗2 d后將苗取出，用清水洗凈根部的瓊脂，置于溫室苗床內，注意保濕，逐步使試管苗適應溫室環境，以防萎蔫。當葉片轉綠增大，出現1～2片新葉，移入營養缽。營養土為粗砂∶土 = 1∶2，注意保濕，煉苗40～50 d。當幼苗長出3～5片新葉時方可下田移栽，成活率可達98%以上。

4 小結

用組織培養方法進行半夏的快速繁殖，可在短期內繁殖出大批量的優良種苗，保持品種優良性狀，縮短推廣時間，提高產量和品質。

本試驗結果表明，利于愈傷組織誘導的培養基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L;利于不定芽增殖的培養基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L;利于生根的培養基為MS+NAA 0.5 mg/L。

參 考 文 獻:

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