大白菜根腫病人工接種鑒定方法比較

摘 要:采用4種人工接種方法對大白菜根腫病進行苗期接種鑒定。結果表明，蘸根法的發病率與病情指數最高;菌土法隨菌液濃度升高，發病率及病情指數均增加;浸芽法無論發病率還是病情指數均最低;注射法接種后50天調查的發病率及病情指數均明顯高于30天的調查結果。注射法在4種接種方法中操作最簡單，適合育種中對大量材料進行抗病性鑒定。

關鍵詞:大白菜;根腫病;接種鑒定

中圖分類號:S341.1+9文獻標識號:A文章編號:1001-4942(2010)01-0078-02

大白菜根腫病是由蕓薹根腫菌(Plasmodiophora brassicae Woronin)侵染引起的一種世界性病害。該病為土傳真菌性病害，病原菌可在土壤中存活8年以上，受侵染的根組織大量增生，膨大形成瘤狀腫根，致使根的正常生理功能受到影響，根系生長和吸收能力下降，植株生長發育受阻，大白菜不能形成正常的葉球，甚至枯萎死亡。近年來，該病在山東省發生面積不斷擴大，危害逐年加重。為準確鑒定試材的抗病性，本試驗采用4種接種方法對大白菜根腫病進行了苗期接種鑒定，試圖找出一種在通常條件下快速而準確的抗病性鑒定方法，為抗病育種提供依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料大白菜品種為“耐熱8號”。育苗基質為青島市農業科學研究院配制的育苗土(蘸根法所用基質為珍珠巖)。

1.2 接種液的制備將預存于-18℃冰箱內的大白菜根腫塊(取自本院蔬菜田)攪碎，四層紗布過濾，冷凍離心機4 000 r/min離心10 min，棄上清，用蒸餾水懸浮沉淀，共重復3次，最后棄上清，用蒸餾水將懸浮液孢子濃度調至2×108個/ml。4℃保存備用。

1.3 接種方法

1.3.1 注射法 將種子播于裝有消毒育苗基質的營養缽中，播后用移液器吸取菌液1 ml注射于種子下方，于25～28℃下培養。2008年8月4日播種，9月3日調查;2009年4月10日播種，5月31日調查發病情況。

1.3.2 浸芽法 2008年8月5日浸種，24℃催芽。8月6日待芽長2 mm時進行菌液浸泡，濃度同上，設3個處理，浸泡時間分別為15、30、45 min，后正常播種，于9月24日調查發病情況。

1.3.3 蘸根法 2008年8月6日采用珍珠巖作基質播種，8月18日將無病蟲幼苗取出用自來水洗去基質，吸干水分，放入育苗穴盤，將根部置于裝有菌液的塑料盒中，濃度同上。浸根時間分別為4、6、8 h，然后重新定植于裝有消毒育苗基質的營養缽中，9月24日調查發病情況。

1.3.4 菌土法 將營養缽灌透底水，用直徑2 cm的打孔器在基質上打深度為3 cm左右的孔，每孔均勻注入2 ml(孢子含量約40×104個/L)和0.5 ml菌液(孢子含量約10×104個/L)，2008年8月4日播種，9月4日調查發病情況。

1.4 調查分級標準參照文獻[3]分級。

2 結果與分析

從表1可以看出，不同接種方法發病時間不同，對材料的鑒定結果也存在明顯差異。菌土法和注射法接種后30天，從外部即觀察到病害發生;蘸根法和浸芽法接種至發病時間相對較長，尤其浸芽法接種后50天發病仍較輕。

從發病率和病情指數看，蘸根法在所有方法中發病率和病情指數均最高，3個處理的發病率均達100%，并且病情指數差異不明顯。浸芽法3個處理的發病率和病情指數均較低，并且隨浸泡時間延長，發病率和病情指數并未隨之增大。菌土法中使用了2個菌液濃度，隨接種液濃度增大，發病率及病情指數均隨之增大。注射法2008年接種后30天調查發病率為47.06%，病情指數為14.38;2009年接種后50天調查發病率為79.17%，病情指數為34.72。表14種接種方法試驗結果

接種方法浸芽法15min30min45min蘸根法4h6h8h菌土法10×104個/L40×104個/L注射法2008年2009年

播種至調查日數50505050505030303050

發病率(%)33.3343.2434.2110010010041.1865.7147.0679.17

病情指數19.0511.5816.9275.8974.3180.6117.6451.8414.3834.72

注:除菌土法外，其它各法菌液濃度均相同。

3 小結與討論

從調查結果看，在接種濃度相同的情況下，蘸根法的發病率與病情指數最高，這可能因為該法能使大白菜幼苗根系全面接觸菌液，3個時間處理間病情指數差異不明顯，因此以后可將其蘸根時間定為4 h。該接種方法準確率高，但操作較為繁瑣，不適合大量材料的篩選鑒定。菌土法的結果表明，隨菌液濃度升高，發病率及病情指數均增加，因此該法的使用要嚴格進行濃度試驗，以防止在材料篩選中造成偏差。浸芽法的3個時間處理的發病率和病情指數均較低，因此該法雖然操作簡便，但不適用于接種鑒定。注射法只進行了一個菌液濃度的試驗，2008年發病率和病情指數偏低，可能與調查過早有關。注射法在4種接種方法中，操作最簡單，適合育種中對大量材料進行抗病性鑒定。因此有關注射法接種濃度和適宜調查時間，還需進一步試驗研究。

本試驗中由于播種至調查日期不同，可能導致試驗結果的差異，尤其菌土法和注射法調查過早，可能是造成發病率和病情指數偏低的主要原因，今后將統一調查時間對幾種方法進一步試驗，以找出適用于抗病育種最準確簡便的抗病性鑒定方法。

參 考 文 獻:

[1] 孫保亞，沈向群，郭海峰，等.十字花科植物根腫病及抗病育種研究進展[J].中國蔬菜，2005，4:34-37.

[2] 唐文華.北京十字花科蔬菜根腫病的發生和鑒定[J].植物保護學報，1990，16(1):17-18.

[3] 李曉歐，吳飛燕.大白菜根腫病苗期人工接種抗病性鑒定技術初報[J].中國蔬菜，1990，6:6-9.

[4] 丁云花，簡元才.十字花科蔬菜根腫病菌生理小種及接種方法[J].中國蔬菜，2005，8:29-31.