流感嗜血桿菌耐藥性分析

柯永堅，朱紅軍，肖亮生，黃江玲，馬錦霞

(廣東省汕頭市中心醫院檢驗科，廣東 汕頭 515031)

流感嗜血桿菌耐藥性分析

柯永堅，朱紅軍，肖亮生，黃江玲，馬錦霞

(廣東省汕頭市中心醫院檢驗科，廣東 汕頭 515031)

目的了解我院2008年1月至2010年6月臨床分離的136株流感嗜血桿菌耐藥性及產β-內酰氨酶率。方法采用常規方法進行分離培養，并采用法國生物梅里埃公司全自動微生物分析系統VITEK-2compact及配套試劑NHI鑒定卡和V+X、V、X因子進行鑒定，用K-B法測定其藥敏結果,按CLSI2009版判斷結果,以Nitrocefin試劑做β內酰胺酶測定。結果136株流感嗜血桿菌中產β內酰胺酶40株,產酶率29.4%；耐藥主要集中在復方新諾明(57.4%)、氨芐西林(51.5%)、左旋氧氟沙星(27.9%)；對亞胺培南及頭孢二、三代的敏感率達100%。結論流感嗜血桿菌有較高的耐藥率及β內酰胺酶產酶率，臨床上應注意正確、合理使用抗菌藥物。

流感嗜血桿菌；耐藥性；β-內酰胺酶

流感嗜血桿菌為需氧、革蘭陰性球桿菌，是人類呼吸道感染的常見病原菌，可引起獲得性感染。主要引起人類中耳炎、肺炎、咽炎、及其他呼吸道感染等疾病[1]。隨著流感嗜血桿菌分離率的不斷提高和其耐藥性的不斷上升，其致病性已受到普遍關注。因此，流感嗜血桿菌的耐藥性和產酶率的分析對臨床具有重要的意義。本文對本院的流感嗜血桿菌感染及藥敏情況作了回顧性分析，為臨床合理用藥和治療提供依據。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 標本為來自我院2008年1月至2010年6月的住院患者及少量門診患者，標本主要是痰液。患者采集標本前均未使用過抗生素或使用抗生素者停藥一周以上。

1.2 試劑 嗜血桿菌分離平板 (HIN巧克力平板)、HTM藥敏培養基 (購自廣東省江門市環凱貿易有限公司)，VITEK2NHI試劑卡 (購自法國生物梅里埃公司)，藥敏紙片、Ⅴ+Ⅹ、Ⅴ、Ⅹ 因子均購自英國Oxoid公司。標準菌株流感嗜血桿菌ATCC49247，購自中國藥品生物制品檢定所。

1.2.1 菌株分離與鑒定 送檢標本立即接種血平板和HIN巧克力平板,置于35℃，5%CO2培養24～48h，挑取血平板上不生長、HIN巧克力平板上生長的透明或半透明、扁平、濕潤的露滴狀疑似菌落做革蘭染色，革蘭染色呈陰性短小桿菌、部分呈球桿狀、少數呈細絲狀等多形態性。做衛星試驗，同時進行Ⅴ、Ⅹ、Ⅹ+Ⅴ因子需求試驗，根據菌落形態、染色鏡檢、衛星試驗及因子需求試驗等特點進行菌株鑒定[2]。同時采用法國生物梅里埃公司全自動微生物分析系統VITEK2-compact及配套試劑NHI試劑卡進行鑒定。

1.2.2 β-內酰胺酶測定 采用頭孢硝噻吩法,按照說明書操作。將Nitrocefin紙片濕潤，涂上嗜血桿菌菌落，觀察紙片顏色變化，變紅表示β-內酰胺酶試驗陽性，不變色為陰性。

1.2.3 藥敏試驗 采用K-B法分別進行阿奇霉素、氨芐西林、復方新諾明、環丙沙星、頭孢呋辛、頭孢曲松、氯霉素、亞胺培南、左旋氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦等10種藥物的敏感性測定 (AST試驗)，按CLSI2009版的試驗要求和標準來判定試驗結果。質控菌株為ATCC49247。

2 結果

2.1 β-內酰胺酶檢測 136株流感嗜血桿菌中檢出40株β-內酰胺酶陽性,產酶率為29.4%。

2.2 流感嗜血桿菌的析藥敏結果見表1。

表1 68例流感嗜血桿菌耐藥性分布

3 討論

流感嗜血桿菌主要寄居于人類上呼吸道黏膜，常引起下呼吸道感染、肺炎等嚴重疾病，由于流感嗜血桿菌致病性強。其所致疾病大致分為原發感染和繼發感染，前者主要屬于外源性感染，通過呼吸道傳播，常見于兒童；后者主要由寄居于上呼吸道的無莢膜菌株所致，常見于老人及免疫功能低下患者。兩類感染均可引起呼吸道本身疾患，亦可引起其他部位的感染，如菌血癥、腦膜炎、膿毒性關節炎等[3]。同時，由于環境污染、藥物濫用及機體免疫功能下降等多方面原因，流感嗜血桿菌的耐藥率呈逐年上升。

流感嗜血桿菌由于自身缺乏某些酶類 (生長因子)，其生長需要V、X因子的共同存在和5%～8%CO2環境。本實驗室采用了英國Oxoid公司提供的因子紙片及加入了萬古霉素的HIN培養基,抑制了革蘭陽性菌生長，增加了流感嗜血桿菌的選擇性而提高分離率。但是從以往相關報道比較[4]，本院流感嗜血桿菌的分離率偏低。這主要與臨床取材質量和送檢的時間有關，由于流感嗜血桿菌在離體后存活率低，標本應在疾病早期采集；采集后應在15～30min內送檢。

流感嗜血桿菌對各類抗生素的耐藥性與其他細菌相比雖處于較低水平，但較過去已大大提高。其耐藥率的不斷上升，主要與產β-內酰胺酶有關,由表1可見，流感嗜血桿菌對氨芐西林的敏感率為48.5%，而對氨芐西林/舒巴坦的敏感率為88.2%，說明流感嗜血桿菌耐藥機制主要是由于產生β-內酰胺酶，水解了氨芐西林分子結構上的β-內酰胺環，使氨芐西林失去活性而耐藥。本院流感嗜血桿菌β-內酰胺酶陽性率為29.4%，而國內文獻報道流感嗜血桿菌產生β-內酰胺酶率在2.6～45%之間[5]，產酶率基本一致。β-內酰胺酶陽性菌株全部耐氨芐西林，可見，β-內酰胺酶陽性能預測嗜血桿菌對青霉素、氨芐西林、阿莫西林耐藥[6]。而對頭孢二、三代和亞胺培南的敏感率達100%，臨床可首選這些藥物對流感嗜血桿菌感染進行治療。

[1]臧煥平,賴國祥.老年人流感嗜血桿菌相關呼吸道疾病研究進展[J].醫學綜述,2007,13(2):119-121.

[2]李影林.臨床微生物學及檢驗[M].北京:人民衛生出版社,1995:282.

[3]吳春鳳,姜煥好,曾東良,等.2004至2005年我院嗜血桿菌的分離及其耐藥性[J].中國微生態學雜志,2007,19(1):78-79.

[4]陳民均,謝秀麗,張秀珍,等.北京上海廣州地區的流感嗜血桿菌分離及藥敏試驗[J].中華傳染病雜志,1998,16(4):46.

[5]李雪芬,孔海深,陳東寶,等.流感嗜血桿菌在呼吸道感染意義及耐藥分析[J].上海醫學檢驗雜志,1999(14):72-77.

[6]朱澤航,蔡逸婷.人群呼吸道中嗜血桿菌的分布及其耐藥性[J].解放軍預防醫學雜志,2007,25(1):13-16.

R378.4+1,R446.5,Q939.92

A

1674-1129(2010)06-0575-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2010.06.017

柯永堅，1969年3月出生，男，漢族，大專，主管技師，廣東省惠來縣人，長期從事臨床微生物檢驗工作。