GC法同時測定療筋涂膜劑中冰片和薄荷腦的含量

李得堂， 唐洪梅*， 蔡慶群， 張麗娟， 何嘉侖

(1.廣州中醫藥大學第一附屬醫院，廣東 廣州510405;2.廣州中醫藥大學附屬中山市中醫院，廣東 中山528400;3.廣州中醫藥大學，廣東廣州510405)

療筋涂膜劑由大黃、兩面針、冰片、薄荷腦等中藥組成，具有活血祛瘀、消腫止痛的功效。主要用于外傷性疾病和風濕性疾病。處方中冰片(合成龍腦)是一味常用藥，具有清熱、消腫、止痛等功效，薄荷腦可用于皮膚或黏膜產生清涼感以減輕不適及疼痛。且冰片、薄荷腦一定量可以增加涂膜劑中有效成分的透皮吸收［1］。冰片(合成龍腦)主要成分是互為異構體的龍腦和異龍腦，其化學結構無特征紫外吸收，薄荷腦為薄荷素油中得到的一種飽和的環狀醇，因此氣相色譜法是測定這類化合物較好方法。本實驗建立GC法同時測定療筋涂膜劑中冰片，薄荷腦的含量，方法簡便，雜質無干擾，分離效果好，結果準確，可作為該制劑揮發性成分質量控制的方法之一。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Angilent 6890N GC色譜儀;FID檢測器，載氣為高純氮氣(99.999%)Angilent Chemstation工作站(美國Angilent公司)，超聲波清洗器(上海科導超聲儀器有限公司)，恒溫干燥箱(北京市朝陽區來廣營醫療器械廠)，DK-S24型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏試驗設備有限公司)，電子分析天平(SARTORIUS AG GOTTINGEN Germany BP211D)。

1.2 試藥 療筋涂膜劑(制劑室自制);水楊酸甲酯對照品供含量測定用(批號:110707-200609，中國藥品生物制品檢定所);薄荷腦對照品供含量測定用(批號:110728-200506，中國藥品生物制品檢定所);冰片對照品供含量測定用(批號:110743-200504，中國藥品生物制品檢定所);其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:HP-5(0.53 mm×30 m×1 μm)石英毛細管色譜柱，柱溫:50℃(1 min)以10℃/min速率升到80℃(5 min)，再以10℃/min升到130℃(3 min)，載氣:氮氣1.0 mL/min;燃氣:氫氣30 mL/min為;助燃氣:空氣300 mL/min;尾吹氣:氮氣25 mL/min，進樣口溫度:230℃，FID檢測器溫度:250℃。進樣量:1 μL，分流進樣，分流比10∶1，理論板數按龍腦峰計算應不低于1 900;冰片、薄荷腦和水楊酸甲酯與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。

2.2 內標溶液的制備 精密稱取水楊酸甲酯1 000 mg，置50 mL的量瓶中，用乙酸乙酯定容。精密吸取1 mL置于5 mL量瓶中，用乙酸乙酯定容備用。

2.3 對照品溶液的制備 精密稱取五氧化二磷減壓干燥的冰片對照品58.915 mg、薄荷腦對照品25.495 mg，置于10 mL量瓶中，用乙酸乙酯定容，作為冰片、薄荷腦的混合對照品貯備液，再分別精密量取上述對照品貯備液各1 mL置于10 mL量瓶中，精密加入1 mL內標溶液，用乙酸乙酯定容。

2.4 供試品溶液的制備 取本品約0.6 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯10 mL，精密稱定重量，超聲10 min，放冷，再精密稱定重量，用乙酸乙酯補足減失的重量，搖勻，靜置10 min，濾過。精密量取續濾液2 mL，置5 mL量瓶中，精密加入1 mL內標溶液，用乙酸乙酯定容。

2.5 方法的專屬性考察 按處方比例制成缺冰片、薄荷腦陰性對照，照供試品制備方法制備缺冰片、薄荷腦陰性樣品溶液，精密吸取溶液1 μL，照2.1項下色譜條件測定，結果見圖1。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，有相同保留時間的色譜峰，而陰性對照色譜上在此保留時間無干擾。

圖1 對照品(A)、缺冰片陰性(B)、缺薄荷腦陰性(C)、缺冰片和薄荷腦陰性(D)、樣品(E)GC色譜圖

2.6 線性關系考察 精密吸取混合對照品貯備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分別置于 5 mL 量瓶中，各精密加入內標溶液1 mL，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取1 μL，注入氣相色譜儀測定，由對照品濃度(X)與對照品峰面積/內標峰面積之比值(Y)進行回歸，得回歸方程，冰片:Y=0.333 4X－0.019 9，r=0.999 8;薄荷腦:Y=0.342 5X－0.004 9，r=0.999 7。結果表明冰片和薄荷腦依次在1.178 3～5.891 5 mg/mL，0.509 9～2.549 5 mg/mL濃度范圍內線性關系良好，注:冰片峰面積以龍腦和異龍腦峰面積之和計算。

2.7 精密度試驗 取同一批供試品溶液，按上述色譜條件，連續進樣5次，進行測定，分別計算冰片和薄荷腦的含量，結果RSD分別為1.17%和1.84%。

2.8 穩定性試驗 取同一批供試品溶液，按上述色譜條件，間隔一定時間(0、2、4、8、12、24 h)進樣測定，分別計算冰片和薄荷腦的含量，結果RSD分別為1.52%和2.48%。

2.9 重復性試驗 取同一批號樣品5份，按照含量測定項下方法制備5份供試品溶液，按2.1項下色譜條件，進行測定，分別計算冰片和薄荷腦的含量，結果RSD分別為1.96%和2.49%。

2.10 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的同一批樣品約0.30 g，分別精密加入一定量的冰片和薄荷腦對照品，按上述樣品制備方法制備加樣回收供試品溶液，平行操作6份，按照上述2.1項下色譜條件測定并計算其回收率，結果見表1、2。

表1 冰片加樣回收率試驗結果(n=6)

表2 薄荷腦加樣回收率試驗結果(n=6)

2.11 樣品的測定 取3批療筋涂膜劑按2.4項下篩選的方法制備供試品溶液，按上述2.1項下色譜條件測定，通過回歸方程計算，結果見表3。

表3 樣品測定結果(n=3)

3 討論

因冰片，薄荷腦具有揮發性，在常溫下不穩定，生產過程中容易損失，因此含量測定中選用冰片，薄荷腦為指標，故選用GC法對其進行含量測定。中國藥典已收載了冰片的含量測定方法，用此色譜條件測定冰片含量，冰片中龍腦峰和薄荷腦峰分離度達不到要求，本試驗比較了不同柱溫:140℃恒溫(中國藥典2005版冰片含量測定方法)［2］、初始溫度110℃以7℃/min升溫至200℃、初始溫度80℃以10℃/min升溫至130℃、初始溫度80℃以10℃/min升溫至120℃，再以2℃/min升溫到130℃、初始溫度80℃(2 min)以10℃/min升溫至130℃(1 min)，再以2℃/min升溫到140℃(1 min)、初始溫度80℃(5 min)以10℃/min升溫至130℃(5 min)、初始溫度50℃(1 min)以10℃/min升溫至80℃(5 min)，再以10℃/min升溫到130℃(3 min)，分離效果以最后一個程序升溫方法最好，故選擇柱溫為初始溫度50℃(1 min)以10℃/min升溫至80℃(5 min)，再以10℃/min升溫到130℃(3 min)。

內標物篩選試驗結果，以水楊酸甲酯為內標物較為理想，且陰性對照無干擾。

本制劑制法中冰片、薄荷腦為直接加入，本試驗供試品制備中的提取方法選擇為超聲提取［3-4］，文獻報道超聲15 min測定含量最高，經過反復實驗，比較超聲提取時間 5、10、15、20、30 min，發現超聲提取5 min含量不再有增加的趨勢，為確保各個廠家產品冰片、薄荷腦均有良好溶出，故選擇超聲10 min。

冰片(合成龍腦)含有龍腦和異龍腦，2005年版中國藥典中冰片(合成龍腦)的含量以龍腦計，而其他文獻［5-7］也參照藥典方法，將冰片(合成龍腦)的含量以龍腦計，筆者認為以此方法無法完全反映冰片質量，應以冰片計更為合理。有文獻報道［8］比較以龍腦和異龍腦的總量計與以冰片計的含量測定結果差異，發現具有一致性(CV=0.3%)，故本試驗方法選用冰片為對照品，含量以冰片計。

［1］李得堂，唐洪梅，丘振文，等.促滲劑對療筋涂膜劑中芍藥苷經皮滲透的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2009，15(3):62-65.

［2］中國藥典［S］.一部.2005:98.

［3］管玉云，程 正.氣相色譜法測定婦炎靈膠囊中樟腦和冰片的含量［J］.中國醫院藥學雜志，2007，27(1):74-75.

［4］陸海濤，劉小紅.氣相色譜法測定馬應龍麝香痔瘡膏中龍腦的含量［J］.中國醫院藥學雜志，2005，25(4):335-336.

［5］王愛民，黃 勇，王永林，等.大口徑毛細管柱氣相色譜法測定菊黃上清含片中龍腦的含量［J］.中國中藥雜志，2006，31(2):159-160.

［6］范 斌，柏 冬，劉 泓，等.氣相色譜法測定艾奇康膠囊中龍腦的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2009，15(6):15-17.

［7］薛東升，荊樹中，宋慶宏.氣相色譜法測定雙清注射液中冰片的含量［J］.中成藥，2008，30(5):780-782.

［8］阮 昊，林 斌，周 方，等.CGC測定五靈止痛膠囊中冰片的含量［J］.中國現代應用藥學雜志，2009，26(4):326-328.