參桂膠囊處方再優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)研究

鄧向濤， 董玉秀， 李宗鐸

(1.河南省腫瘤醫(yī)院，河南 鄭州450003;2.河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州450003)

參桂膠囊由人參、川芎、桂枝三味中藥研制而成，具有益氣通陽(yáng)、活血化瘀的功效，臨床上用于缺血性心臟病療效顯著。現(xiàn)代研究表明，人參的主要有效成分是人參總皂苷，其中人參皂苷Rb組分(包括Rb1、Rb2、Rb3)可明顯增強(qiáng)皮下注射異丙腎上腺素小鼠的耐缺氧能力，對(duì)抗腦垂體后葉素所致大鼠急性缺血性心電圖改變［1］;人參皂苷 Re、Rg1、Rb2、Rc對(duì)整體動(dòng)物的冠狀動(dòng)脈、腦血管、椎動(dòng)脈、肺動(dòng)脈均有擴(kuò)張作用［2］。川芎的活性成分有阿魏酸、川芎嗪、川芎揮發(fā)油，阿魏酸具有抑制血小板聚集、促進(jìn)血小板解聚、抗血栓形成、解除血管平滑肌痙攣、抗氧化、提高膜穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)免疫等作用［3］;川芎嗪能夠擴(kuò)張血管，增加冠脈流量，改善心肌供氧，降低心肌耗氧［4］;川芎揮發(fā)油具有改善微循環(huán)、增加腦血流量等作用［5］。桂枝揮發(fā)油中的主要成分桂皮醛有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、解熱、擴(kuò)張血管、降壓、解痙、活血通經(jīng)作用［6］。本文從各藥物所含有效成分入手，采用均勻設(shè)計(jì)方法篩選出最佳組合與配比，為參桂膠囊的二次開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

1 儀器與材料

ASB240U生物信號(hào)分析系統(tǒng):成都遨生電子有限公司。

人參皂苷(武漢生物科技有限公司，總皂苷含量為90.82%，人參皂苷Rg1和Re的總含量為17.44%)，鹽酸川芎嗪(北京市燕京制藥廠，含量為100%)，阿魏酸(武漢遠(yuǎn)城科技發(fā)展有限公司，含量為74.5%)，川芎揮發(fā)油、桂枝揮發(fā)油(吉安市福達(dá)天然藥用油廠)，參桂膠囊(上海玉丹藥業(yè)有限公司，批號(hào)050328，臨用前用0.5%CMC－Na溶液配成所需濃度)，戊巴比妥鈉(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司，批號(hào)F20020915)，垂體后葉素(上海第一生化藥業(yè)有限公司，批號(hào)051103，臨用前用NaCl注射液配成1 u/mL的濃度)，吐溫－80(江蘇晨牌藥業(yè)集團(tuán))。

Wistar大鼠，體重230～250 g，♀♂各半，河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):醫(yī)動(dòng)字第410117號(hào)。

2 方法與結(jié)果

2.1 劑量設(shè)置

參桂膠囊處方中治療心肌缺血的物質(zhì)基礎(chǔ)主要有:人參皂苷、阿魏酸、川芎嗪、川芎揮發(fā)油和桂枝揮發(fā)油，參桂膠囊即是根據(jù)這些成分的理化性質(zhì)提取研制而成，故以此為重新組方的對(duì)象。由于各有效成分在提取制備過(guò)程中存在一定的損失，故各有效成分的劑量設(shè)置大體以文獻(xiàn)報(bào)道藥材含量的最高值(川芎嗪除外)為上限。人參在原方中為君藥，故人參皂苷劑量設(shè)置的下限不能為零，以制劑中的實(shí)測(cè)值為標(biāo)準(zhǔn)，其余成分劑量設(shè)置的下限均為零。為了減少試驗(yàn)次數(shù)，將有效成分中的川芎揮發(fā)油和桂枝揮發(fā)油合并為一個(gè)因素即芎桂揮發(fā)油(川芎揮發(fā)油和桂枝揮發(fā)油的混合物)，兩者的比例與參桂膠囊的比例相同，即川芎揮發(fā)油∶桂枝揮發(fā)油=1.9∶0.6。經(jīng)大鼠與人的劑量換算及動(dòng)物預(yù)試驗(yàn)，確定垂體后葉素致大鼠心肌缺血實(shí)驗(yàn)中各有效成分的劑量范圍為人參皂苷(X1)63～189 mg/(kg·d);阿魏酸(X2)0～16.4 mg/(kg·d);芎桂揮發(fā)油(X3)0～0.13 mL/(kg·d);鹽酸川芎嗪(X4)0～576 mg/(kg·d)。

將上述四個(gè)因素各等分為7個(gè)水平，分別用1～7代表四個(gè)因素(X1、X2、X3、X4)的 7 個(gè)水平，按均勻設(shè)計(jì) U7(74)表(表1)的安排進(jìn)行試驗(yàn)。7個(gè)處方的受試品分別按表中的劑量配制(10 mL/kg)，溶劑為0.5%CMC－Na溶液，揮發(fā)油用吐溫－80 增溶，用量為 0.68%［7］。

2.2 垂體后葉素致大鼠心肌缺血試驗(yàn)

取230～250 g Wistar大鼠90只，♀♂各半，隨機(jī)分為9組，每組10只。處方1～7組分別灌胃相應(yīng)的受試品;參桂膠囊組灌胃參桂膠囊內(nèi)容物3.0 g/(kg·d);空白組灌胃0.5%CMC－Na溶液(內(nèi)含0.68%吐溫－80)。灌胃容積均為10 mL/kg。連續(xù)灌胃給藥10 d，末次給藥1 h后，3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(38 mg/kg)，將大鼠背位固定，電極連接于ASB240U生物信號(hào)分析系統(tǒng)，記錄正常Ⅱ?qū)?lián)心電圖，然后由舌下靜脈注射垂體后葉素(Pit)0.5 u/kg(0.5 mL)，速度 10 s推完，即刻記錄靜脈注射后 15 s，30 s，1 min，2 min，3 min，5 min時(shí)的Ⅱ?qū)?lián)心電圖，測(cè)定給Pit前后T波峰值的變化，以3 min內(nèi)T波變化值為指標(biāo)，用SPSS(社會(huì)科學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件包)11.0軟件進(jìn)行組間比較;用UD(均勻設(shè)計(jì))2.20軟件進(jìn)行多元回歸分析，預(yù)測(cè)優(yōu)化結(jié)果。見(jiàn)表1。

表1 均勻設(shè)計(jì)U7(74)表

2.3 結(jié)果與分析

2.3.1 組間比較

以3 min內(nèi)T波變化值為指標(biāo)，各組之間用SPSS 11.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果見(jiàn)表2。除處方1外，其余處方均顯著降低3 min內(nèi)T波變化值(P＜0.05);處方2和處方5的對(duì)抗作用極顯著，與參桂膠囊組相比也有顯著性差異(P＜0.05)。

2.3.2 回歸模型的建立與分析

均勻設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 垂體后葉素(pit)致大鼠3 min內(nèi)T波變化

表3 均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果

以各原料藥的劑量為相應(yīng)的因素值，3 min內(nèi)的ΔT值為Y值，應(yīng)用UD 2.20軟件進(jìn)行二次多項(xiàng)式逐步回歸分析，求得回歸方程為:

復(fù)相關(guān)系數(shù)r=0.999 9，方差分析顯著，結(jié)果見(jiàn)表4。

回歸方程中的Y值代表處方對(duì)垂體后葉素致心肌缺血拮抗作用的強(qiáng)弱，其值越小說(shuō)明拮抗作用越強(qiáng)，處方的療效越好，故對(duì)試驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化時(shí)，Y值應(yīng)取最小值。采用網(wǎng)格嘗試法優(yōu)化，UD2.20軟件得出的結(jié)果為:X1(人參皂苷)63 mg;X3(芎桂揮發(fā)油)0.13 mL;X4(鹽酸川芎嗪)438 mg。

表4 方差分析

2.4 優(yōu)化處方的驗(yàn)證

取230～250 g Wistar大鼠20只，♀♂各半，隨機(jī)分為2組，每組10只。優(yōu)化處方組灌胃按優(yōu)化結(jié)果所制成的受試品，空白組灌胃0.5%CMC－Na溶液，按照2.2項(xiàng)下的方法檢測(cè)藥效。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 優(yōu)化處方驗(yàn)證結(jié)果(±s，n=10)

表5 優(yōu)化處方驗(yàn)證結(jié)果(±s，n=10)

注:與空白組比較，*P＜0.01。

空白組0.46±0.12優(yōu)化處方組 0.17±0.08*

優(yōu)化處方組與空白組的比值小于均勻設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)中各處方組與同批試驗(yàn)空白組的比值，說(shuō)明此處方確為最佳處方，其中固態(tài)原料藥人參皂苷，鹽酸川芎嗪的配比(重量比)為1∶6.95，劑量為501 mg/kg;液態(tài)提取物川芎揮發(fā)油，桂枝揮發(fā)油的配比(體積比)為1.9∶0.6，劑量為0.13 mL/kg。

3 討論

3.1 中醫(yī)認(rèn)為冠心病心肌缺血之病機(jī)以心脾腎陽(yáng)氣虛衰為本，瘀血濁邪阻滯脈道為標(biāo)，本虛標(biāo)實(shí)，因虛致實(shí)［8］。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，利用垂體后葉素使冠狀動(dòng)脈、毛細(xì)血管、小動(dòng)脈、小靜脈收縮，導(dǎo)致心臟血氧供應(yīng)障礙，造成急性心肌缺血模型。由于大鼠心電圖ST段極短，幾乎與T波融合，故將T波抬高或下降幅度作為評(píng)價(jià)心肌缺血損傷的指標(biāo)。

3.2 川芎嗪在藥材中的含量很低，在制劑中難以檢出，但其人工合成的鹽酸鹽用于缺血性心腦血管疾病效果顯著，故川芎嗪最高水平劑量的設(shè)定參照臨床上的最高用量。

3.3 UD 2.20軟件的分析結(jié)果中，阿魏酸的量為零，優(yōu)化處方最終由人參皂苷、川芎揮發(fā)油、鹽酸川芎嗪、桂枝揮發(fā)油組成。其中，人參皂苷是人參中的有效物質(zhì)，川芎揮發(fā)油和川芎嗪是川芎中的有效物質(zhì)，桂枝揮發(fā)油則是桂枝中的有效物質(zhì)。從有效成分的歸屬上看來(lái)，優(yōu)化處方與原處方的組成相一致。與組方成分相比，優(yōu)化處方中缺少阿魏酸，這可能與下列因素有關(guān):實(shí)驗(yàn)設(shè)置的劑量與其它組分相比偏低，優(yōu)化結(jié)果易趨于零;阿魏酸的主要藥理作用為改善血液的流變性，在治療心肌缺血方面處于輔助地位。

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