降脂靈膠囊的質量標準研究

許 勇，王 柯，季 申

（上海市食品藥品檢驗所，上海 201203）

降脂靈是由三七、丹參、銀杏葉和燈盞花四味中藥提取物制成的膠囊劑。為上海上聯藥業有限公司和上海劍蘭生物制品有限公司生產的中藥制劑，原標準僅有檢查項，為控制藥品質量，保證臨床用藥的安全性和有效性，我們建立了用薄層色譜方法鑒別本品中三七、丹參和銀杏葉三味藥材的方法，并采用高效液相色譜法對制劑中三七的活性成分三七皂苷R1和人參皂苷Rg1進行了測定，建立的定性、定量方法均簡便、準確、專屬性強，可有效地控制本品的質量。

1 儀器、試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀，紫外-可見光檢測器，Chemstation色譜工作站。C18固相萃取小柱(35 mg，Waters公司)；銀杏葉對照藥材及人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、隱丹參酮、丹參酮IIA對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供。樣品:降脂靈膠囊樣品(批號為 090801、090701、090501)及陰性樣品均由上海上聯藥業有限公司和上海劍蘭生物制品有限公司提供。乙腈為色譜純(Merck公司)，其余試劑均為分析純由中國醫藥(集團)上海化學試劑公司提供。

2 薄層色譜鑒別

2.1 三七的薄層鑒別 取本品1粒的內容物，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rb1對照品、人參皂苷Rg1對照品及三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作為對照品溶液。取按處方除去三七的陰性樣品，同法制成陰性樣品溶液。吸取上述兩種溶液各1 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性樣品液無干擾，見圖1。

圖1 三七TLC圖譜

2.2 丹參的薄層鑒別 取本品5粒的內容物，加乙醚30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮至約1 mL，加于中性氧化鋁柱上(8 g，100～200目，內徑15 mm)，以乙酸乙酯5 mL洗脫，收集洗脫液，作為供試品溶液。另取隱丹參酮對照品和丹參酮IIA對照品，加乙酸乙酯制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作為對照品溶液。再取按處方除去丹參的陰性樣品，同法制成陰性樣品溶液。吸取供試品溶液10～20 μL，對照品溶液3 μL，分別點于同一硅膠 G 薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯(17∶3)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性樣品液無干擾，見圖2。

圖2 丹參TLC圖譜

2.3 銀杏葉的薄層鑒別 另取銀杏葉對照藥材1 g，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為對照藥材溶液。吸取2.1項下的供試品溶液和銀杏葉對照藥材溶液各1 μL，再取按處方除去銀杏葉的陰性樣品，同法制成陰性樣品溶液。分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%的三氯化鋁乙醇溶液，熱風吹干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點。陰性樣品液無干擾，見圖3。

圖3 銀杏葉TLC圖譜

3 人參皂苷Rg1對照品和三七皂苷R1的含量測定

3.1 色譜條件 色譜柱:Thermo ODS-C18HYPERSIL(4.6 mm ×200 mm，5 μm)；流動相:以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按表1中的規定進行梯度洗脫；流速:1.0 mL/min；檢測波長:203 nm；柱溫:30℃；進樣量:10 μL，理論板數按三七皂苷R1峰計算，不低于10000。結果樣品中人參皂苷Rg1對照品和三七皂苷R1與相鄰峰分離度大于1.8，陰性樣品溶液在與人參皂苷Rg1對照品和三七皂苷R1色譜峰相同位置處無干擾峰，表明樣品中其他成分對人參皂苷Rg1對照品和三七皂苷R1的測定無干擾，見圖4～6。

表1 梯度洗脫表

圖4 三七皂苷R1和人參皂苷Rg1對照品高效液相色譜圖

圖5 樣品高效液相色譜圖

3.2 對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、三七皂苷R1對照品適量，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg10.6 mg、三七皂苷R10.1 mg的混合溶液，即得。

圖6 陰性樣品高效液相色譜圖

3.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品0.2 g，精密稱定，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3.4 陰性對照溶液的制備 取按處方除去三七的陰性樣品，按3.3項下的制備方法制成陰性對照溶液。

3.5 線性關系考察 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、三七皂苷R1對照品適量，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg11.062 mg、三七皂苷R13.602 mg的混合對照品貯備溶液，精密量取混合對照品貯備溶液1.0、2.5、5.0、10.0 mL，分別置 50 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，配成相應質量濃度的對照品溶液，分別將對照品貯備溶液和對照品溶液進樣10 μL，記錄峰面積。以進樣濃度(mg/mL)為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，進行分析，得回歸方程:三七皂苷 R1為:Y=2.98×103X+8.85，r=0.999(n=6)；人參皂苷 Rg1為 Y=2.22×103X－1.41，r=0.999(n=6)。結果表明，三七皂苷R1在0.02124～1.062 mg/mL范圍內，進樣濃度與峰面積呈良好的線性關系，人參皂苷Rg1在0.07204～3.602 mg/mL范圍內，進樣濃度與峰面積呈良好的線性關系。

3.6 精密度試驗 精密吸取濃度分別為0.1054 mg/mL、0.9530 mg/mL的三七皂苷R1和人參皂苷Rg1對照品的混合溶液10 μL，按上述色譜條件連續進樣6次，測定，計算三七皂苷R1和人參皂苷Rg1峰面積的RSD分別為0.72%和0.11%，結果表明儀器精密度良好。

3.7 穩定性試驗 吸取同一供試品溶液，在上述色譜條件下，分別于 0、3、8、14、20、34 h 進樣測定，結果三七皂苷R1和人參皂苷Rg1峰面積的RSD分別為0.71%和0.41%。表明供試品溶液在34 h內基本穩定。

3.8 重復性試驗 取同一批樣品6份，分別按3.3項下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，三七皂苷R1和人參皂苷Rg1平均含量分別為4.96 mg/粒、29.7 mg/粒，RSD 分別為 0.61% 和1.7%。表明樣品重復性良好。

3.9 加樣回收率試驗 取已知含量的同一批樣品9份(1.534 mg/g)，分別加入三七皂苷R1和人參皂苷Rg1對照品適量，按供試品溶液方法制備供試液，測定，結果見表2，3。

3.10 樣品測定 按上述供試品溶液的制備方法和測定條件，測定3批樣品中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的含量，用外標法計算，結果見表4，5。

4 討論

4.1 三七［1］10、銀杏葉［1］220藥材的薄層鑒別方法，收載于《中國藥典》2005年版一部，但復方制劑降脂靈膠囊中三七、銀杏葉的薄層鑒別方法尚未見報道。在進行三七的薄層鑒別時，我們采用了甲醇超聲處理的方法，提取三七中的皂苷成分。結果方法簡便、易行，且毒性較小并在薄層板上沒有雜質干擾。并采用鑒別三七的供試品溶液同時對銀杏葉進行有效鑒別，結果起到了一舉兩得的效果。

表2 三七皂苷R1加樣回收率試驗

表3 人參皂苷Rg1加樣回收率試驗

表4 樣品中三七皂苷R1測定結果

表5 樣品中人參皂苷Rg1測定結果

4.2 丹參藥材［1］52的薄層鑒別方法，收載于《中國藥典》2005年版一部，但采用薄層色譜法同時鑒別制劑降脂靈膠囊中隱丹參酮和丹參酮IIA的方法還尚未見報道。丹參的活性成分隱丹參酮和丹參酮IIA均為對熱不穩定的化合物，為使其能有效的被提取出來，我們利用了隱丹參酮和丹參酮IIA可以被中性氧化鋁吸附，后被乙酸乙酯洗脫的性質，有效、快捷地將其分離出來，最終在薄層色譜上沒有雜質干擾。

4.3 檢測波長的確定 經二極管陣列檢測器進行紫外光譜掃描，樣品色譜圖中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1色譜峰的紫外光譜與對照品一致，在203 nm處有最大吸收，故確定檢測波長為203 nm。

4.4 含量測定提取方法的選擇 三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的含量測定方法文獻已報道的有高效液相色譜法［2-4］、薄層掃描法［5］，但復方制劑降脂靈膠囊中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的含量測定方法尚未見報道。在試驗中采取回流提取、超聲提取等多種方法進行了試驗，結果超聲處理提取效率最高，故采用超聲處理的提取方式。同時我們對水、50%甲醇、甲醇、正丁醇4種提取溶劑進行了考察，結果，水的提取效率最低，正丁醇次之，當采用純甲醇進行提取時，三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的提取效率最高，故選擇用甲醇制備三七皂苷R1和人參皂苷Rg1對照品溶液和供試品溶液。

4.5 測定成分的選擇 三七藥材中的主要活性特征成分有三七皂苷 R1、人參皂苷 Rg1、人參皂苷Rb1，試驗中曾經摸索了同時測定3個主要活性成分的方法，但是因處方中的其它味藥材對人參皂苷Rb1的液相色譜有干擾，故最終選擇只測定三七皂苷R1和人參皂苷Rg1。另外，在試驗中還發現，供試品色譜中有人參皂苷Re的存在，因其含量較低，故未對其進行測定，但是也提示我們，本方法可以同時測定三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Re。因采用薄層掃描法測定人參皂苷，其三七皂苷R1和人參皂苷Re兩斑點很難分離，本實驗方法能有效分離兩者，并同時測定三七中含量較高的指標性成分三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的含量，為控制含有三七藥材的產品質量提供了新途徑。

［1］中國藥典［S］.一部.2005.

［2］林曉輝，張雪原，林史珍，等，高效液相色譜法測定心靈丸中三七皂苷 R1的含量［J］. 今日藥學，2009，19(1):44-45，27.

［3］武國順，丁艷芬，楊 冬，等，HPLC測定調經養顏膠囊中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷 R1的含量［J］.中成藥，2006，28(12):1734-1736.

［4］唐 云，倪瑋燁，束志凌.HPLC法測定散結鎮痛膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷 Rb1、三七皂苷 R1的含量［J］.藥學進展，2009，33(7):328-329.

［5］楊景紅，張啟興，沈德鳳.救爾心膠囊中三七皂苷R1的薄層掃描含量測定［J］.黑龍江醫藥科學，2001，24(5):16.