超聲法提取枸杞多糖工藝條件優選

蔡 宇

(暨南大學藥學院，廣東 廣州510632)

枸杞具有補腎養肝、潤肺明目、益精、補血等功效［1］。枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides，LBP)是枸杞的有效成分之一。經研究發現，LBP具有降血糖、抗疲勞、增強免疫、耐缺氧、延緩衰老、促進排鉛等多種生物功能［2，3］。熱水浸提法是枸杞多糖提取的常用方法，但其提取時間長，耗能多。超聲波提取是近年來中藥提取分離研究應用較多的方法，具有提取效率高、提取時間短、能耗低、提取藥液雜質少、有效成分易于分離純化等優點［4］。本研究采用正交實驗法篩選超聲法提取枸杞多糖的適合條件，以枸杞多糖提取量為考察指標，并與常規提取方法進行比較，為超聲法用于枸杞多糖的提取提供理實驗依據。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

枸杞，購于廣州市清平藥材市場，于60℃烘箱中烘烤1.5 h，取出后置于干燥器中放置24 h，備用。無水葡萄糖，分析純，上海伯奧公司生產，批號:200802008。濃硫酸，分析純，廣州市東紅化工廠，批號:080401202。苯酚，分析純，汕頭西隴化工廠，批號:071105。

1.2 供試品溶液的制備

1.2.1 超聲提取法提取 稱取枸杞9份，每份10 g，按照正交實驗設計的條件提取。每次提取后過濾，合并濾液，濃縮至10 mL，備用。

1.2.2 煎煮法提取 稱取枸杞子10 g，加10倍水于80℃水浴鍋中浸泡2 h，于電磁爐上加熱，沸后煎煮1.5 h，稍冷過濾，收集濾液;濾渣加8倍水，于電磁爐上加熱，沸后煎煮1 h，稍冷過濾，合并濾液，濃縮至10 mL，備用。

1.2.3 枸杞多糖的分離 將取濃縮液離心處理(3 000 r/min，10 min)，除去水不溶性雜質，傾出上清液加5倍量無水乙醇，快速混勻30 s，3 000 r/min離心15 min，傾去上清液，沉淀加3倍量無水乙醇，方法同上，反復兩次。用水將沉淀定量轉移到50 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻即得枸杞粗多糖液，濃度0.2 g(生藥)/mL。待測。

1.3 枸杞多糖含量的測定

采用苯酚－硫酸法測定枸杞多糖的含量。

1.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取無水葡萄糖適量，加水溶解稀釋制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。

1.3.2 標準曲線的制備 分別精密吸取標準對照品溶液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL 置于帶塞試管中，然后依次精密加入 2.0，1.8，1.6，1.4，1.2，1.0 mL 蒸餾水，再各加 6%的苯酚試劑1.0 mL，混勻，精密加入5 mL濃硫酸，混勻后放置5 min，置沸水浴中加熱15 min，立即轉入冷水浴中冷卻至室溫。于490 nm下測定吸光度值。以濃度－吸光度值做直線，經回歸分析得回歸方程。

1.3.3 供試品溶液枸杞多糖含量的測定 精密吸取樣液0.5 mL三份，分別置于10 mL具塞試管中，精密加入蒸餾水1.5 mL，6%苯酚試劑1.0 mL，混勻，再精密加入濃硫酸5 mL，混勻后放置5 min，置沸水浴中加熱15 min，立即轉入冷水浴中冷卻至室溫，于490 nm下測定吸光度值。吸光度值帶入標準曲線回歸方程，計算濃度。

1.4 提取方法比較

稱取枸杞子，分別按照正交實驗得到的最適超聲提取條件和水煎煮法提取枸杞多糖，每種方法重復3次，比較枸杞多糖提取量的平均值。

1.5 數據統計

2 結果

2.1 標準溶液的配制

精密稱取無水葡萄糖51.2 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解稀釋到刻度，濃度1.024 mg/mL。

2.2 標準曲線

以各濃度的標準液的體積對吸光度做直線，得方程y=6.041 3x+0.004 9，r=0.999 5。

2.3 超聲法提取枸杞多糖正交實驗結果 見表1～3。

表1 超聲法因素水平

表2 超聲法提取枸杞多糖L9(34)正交試驗設計與結果

表3 方差分析

從方差分析表可以看出，超聲法提取枸杞多糖中水量對有效成分提取量的影響有統計學意義，P＜0.05;提取次數和提取時間對有效成分提取量的影響沒有統計學意義，P＞0.05。從K值可見，所加水量為14倍，提取時間為15 min，提取次數為3次時枸杞多糖提取量最高。綜合上述結果可知，超聲法提取枸杞多糖的最佳條件為:水量14倍、提取時間15 min，提取次數3次。

2.4 超聲提取和水煎煮法提取枸杞多糖的比較

超聲法提取與水煎法提取比較，枸杞多糖提取量略高，但二者沒有顯著性差異，結果見表4。采用超聲提取法提取更省時，更節能，提取效率更高。

表4 兩種方法枸杞多糖提取量比較

3 討論

枸杞子系茄科植物枸杞的干燥果實，性甘平，具有補腎養肝、潤肺明目、益精骨、補血之功效。枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides，LBP)是從枸杞子中分離出的有效成分之一，具有降血糖、抗疲勞、增強免疫、耐缺氧、延緩衰老、促進排鉛等多種生物功能。本實驗采用正交實驗篩選超聲法提取枸杞多糖的適合條件，結果顯示:超聲法提取加水量為14倍，提取時間為15 min，提取次數為3次時枸杞多糖提取量最高;超聲法提取與水煎法提取比較，枸杞多糖含量無顯著性差異，但耗能較少，提取效率更高。可作為枸杞多糖提取的有效方法之一，但其用于大生產的提取條件還有待于進一步研究。

［1］唐 軍，姚虹霞，王燕平.枸杞子藥理作用進展［J］.中華現代醫學與臨床，2006，5(4):44－45.

［2］黃秋蚌，陳遠鋒.枸杞多糖的研究及其進展［J］.食品研究與開發雜志，2006，27(1):172－174.

［3］蔡天革等.枸杞多糖對染鉛大鼠海馬腎上腺素和去甲腎上腺素影響［J］.中國職業醫學，2006，33(2):139－140.

［4］鐘 玲，尹蓉莉.超聲提取技術在中藥提取中的研究進展［J］.西南軍醫，2O07，9(6):84－87.

［5］龔 濤，任大明，王 楠.枸杞多糖提取工藝的研究［J］.生物技術，2005，15(6):78.