貓豆胍的質量研究

黃增瓊， 蔣偉哲， 黃興振， 黃 敏， 巫世紅

(廣西醫科大學藥學院，廣西南寧530021)

貓豆胍是從貓豆中提取分離得到的一種單體成分，其化學結構式見圖1。貓豆，又名貓爪豆、狗爪豆、龍爪豆，是豆科藜豆屬植物龍爪藜豆Stizotobium cochinchinensis(Lour).Tang et Wang的種子［1］。貓豆中含有左旋多巴，是國內提取左旋多巴最主要的原料藥材［2］。我們的前期研究發現，貓豆胍具有一定的鎮靜催眠作用［3］。但對其質量控制方法的研究尚無報道。為了確保貓豆胍的產品質量，本實驗研究建立了準確、可靠、專屬性強的質量控制方法。

圖1 貓豆胍化學結構式

1 儀器和試藥

1.1 儀器

威瑪龍LC-9000D高效液相色譜儀(南寧市威瑪龍色譜科技有限公司);Sartorius ME215S電子天平(北京賽多麗斯儀器系統有限公司);AS5150A超聲波處器(天津奧特比賽恩斯有限公司);X-6顯微熔點測定儀(北京泰克儀器有限公司)。

1.2 試藥

貓豆胍對照品，純度99.54%(廣西醫科大學新藥研究開發中心提供);貓豆藥材(廣西邦爾植物制品有限公司提供，經右江民族醫學院附屬醫院劉春榮副主任中藥師鑒定);貓豆胍樣品(自制);甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 貓豆胍的制備方法

取貓豆適量，以0.1 mol/L鹽酸溶液滲漉提取，提取液濃縮，經732型強酸性陽離子交換樹脂交換，蒸餾水洗至中性，1%氨水作為洗脫劑洗脫。收集含有貓豆胍的洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得貓豆胍粗品。反復重結晶，得貓豆胍精品，經HPLC測定，純度大于98%。

3 性狀

3.1 外觀性狀及溶解度

取本品，觀察其外觀性狀。本品為白色或類白色結晶性粉末，無臭，無味。微溶于水，溶于酸性或堿性水溶液;在乙醇中極微溶解;在石油醚中幾乎不溶。

3.2 熔點

取本品，用顯微熔點測定儀測定熔點，熔點為208～212℃(分解)。

3.3 吸收系數

取本品，精密稱定，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，定量稀釋，制成每1 mL中約含30 μg的溶液，按中國藥典2005年版二部附錄IV A，在324 nm波長測定吸光度，本品的吸收系數為423-428。

4 鑒別方法

4.1 化學法

取本品適量，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，加1～2滴改良的碘化鉍鉀試劑，產生桔紅色沉淀。

取本品適量，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，加1～2滴碘－碘化鉀試劑，產生棕色沉淀。

取本品適量，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，加1～2滴硅鎢酸試劑，產生白色沉淀。

4.2 紫外分光光度法

取本品適量，加0.1 mol/L冰醋酸制成每1 mL含10 μg的溶液，按紫外-可見分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄IV A)測定，在324 nm波長處有最大吸收，246 nm波長有次大吸收。

4.3 紅外分光光度法

取本品適量，按紅外分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄IV C)測定，紅外吸收光譜圖中有芳香雜環、氨基、仲氨基、羰基和羥基等特征吸收峰，與對照品紅外吸收光譜圖一致。

4.4 薄層色譜法

取本品適量，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，制成濃度為1 mg/mL的供試品溶液。另取貓豆胍對照品，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，制成濃度為1 mg/mL的對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版二部附錄ⅤB)試驗，吸取上述溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(10∶2∶3)為展開溶劑，展開，取出，晾干，在365 nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色熒光斑點。

5 含量測定

5.1 色譜條件與系統適用性實驗

色譜柱:PhenomenexTMC18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動相:0.1 mol/L冰醋酸-甲醇(95∶5);流速:1.0 mL/min;檢測波長324 nm;柱溫:室溫;進樣量20 μL。

按上述色譜條件，取5.2項下各溶液，進樣測定。理論塔板數按貓豆胍峰計算不低于10 000。在該條件下測定，陰性對照無干擾。見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

5.2 溶液的配制

對照品溶液 取貓豆胍對照品約10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸溶解至刻度，配制成濃度為0.118 0 mg/mL的對照品貯備液。精密量取貯備液10 mL，置25 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸至刻度，制成濃度為0.047 2 mg/mL的對照品溶液。

供試品溶液 取貓豆胍樣品約35 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸溶解至刻度，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸至刻度，即得。

陰性對照溶液 以0.1 mol/L冰醋酸溶液作為陰性對照溶液。

5.3 線性關系考察

精密量取 5.2 項下對照品貯備液 0.5，1，2，4，8 mL，分別置于10 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸至刻度，搖勻，制成濃度分別為 0.005 9，0.011 8，0.023 6，0.047 2，0.094 4 mg/mL的系列溶液，分別進樣測定。以對照品進樣量(μg)為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線并進行線性回歸計算，得線性回歸方程為:Y=2 000 000X－29 078，r=0.999 7。結果表明，貓豆胍進樣量在0.118～1.888 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

5.4 精密度實驗

取同一份對照品溶液，重復進樣測定 6次，RSD為0.89%，表明本法精密度高。

5.5 重復性實驗

取同一批樣品6份，按5.2項下方法制備供試品溶液，分別進樣測定，RSD為1.60%，表明本法重復性良好。

5.6 穩定性實驗

取同1份供試品溶液，室溫放置。分別于0，2，4，8，12 h進樣測定，結果RSD為0.63%，表面樣品溶液在室溫下12 h內穩定。

5.7 加樣回收率實驗［4］

取已知含量的同一批樣品9份，每3份為1組，分別加入對照品適量，按供試品溶液制備方法制備，進樣測定，計算回收率和RSD，結果見表1。

表1 加樣回收率實驗結果(n=9)

5.8 樣品的含量測定

取3批貓豆胍樣品，每批2份，按“5.2”項下方法制備供試品溶液，每份樣品進樣測定3次。另取對照品溶液，進樣測定。貓豆胍的平均含量為98.06%，RSD為1.04%。

6 討論

貓豆是廣西特色藥材資源，從貓豆中提取左旋多巴的技術已經比較成熟并實現了產業化。為充分利用貓豆資源，我們對貓豆中的單體成分貓豆胍進行了研究。前期研究表明，貓豆中的貓豆胍含量約為0.35%，具有進一步開發利用的價值。

實驗中對薄層色譜法鑒別貓豆胍的展開條件進行了探索，以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)展開時，展開速度較慢，樣品斑點分不開，脫尾較嚴重;以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)進行實驗，樣品無法展開。經反復探索，以乙酸乙酯-甲酸-水(10∶2∶3)為展開劑時，展開較好。

檢測波長的選擇:貓豆胍在324 nm波長有最大吸收，在246 nm波長有次大吸收。在246 nm波長處測定，樣品中的少量左旋多巴和其它雜質成分也有吸收，對實驗有一定干擾。而采用324 nm波長進行測定，雜質成分在該波長條件下無吸收，專屬性強，故確定測定波長為324 nm。

參考有關文獻［5］，以0.1 mol/L 冰醋酸-甲醇(90 ∶10)為流動相測定貓豆胍含量時，出峰時間過早，樣品峰未能與溶劑峰分離。當流動相比例調整為0.1 mol/L冰醋酸-甲醇(95∶5)時，貓豆胍的保留時間在7 min左右，分離度好和峰形均較好。

實驗結果表明，所建立的貓豆胍質量標準，可有效控制產品質量。

［1］江蘇新醫學院.中藥大辭典［M］.上海:上海科學技術出版社，1977:1423.

［2］蔣偉哲，周燕文，吳 闖，等.不同產地貓豆中左旋多巴的含量比較［J］.中草藥，2000，31(11):861.

［3］黃增瓊，蔣偉哲，黃興振，等.貓豆胍鎮靜催眠和抗震顫麻痹作用研究［J］.中草藥，2009，40(2):276-278.

［4］謝衛鋒，高玉珍，陳莉琳.感冒滴丸質量標準研究［J］.中成藥，2008，30(8):1171-1174.

［5］黃海濱，許學健，奉建芳.高效液相色譜法測定貓豆中左旋多巴的含量［J］.廣西植物，1994，14(3):293-294.