光阻法檢查注射液中不溶性微粒影響因素分析

呂長淮，吳 瑋，胡 丹

（安徽省宿州市藥品檢驗所，安徽宿州 234000）

不溶性微粒指除氣泡外可流動的、隨機存在于液體制劑包括滅菌粉針劑所制成的液體中的不溶性外來物質。不溶性微粒檢查指檢查靜脈用注射劑（溶液型注射液、注射用無菌粉末、注射用濃溶液）及供靜脈注射用無菌原料藥中不溶性微粒的大小及數量[1]。檢查注射液中不溶性微粒的方法主要有顯微計數法和光阻法。《中國藥典》2000年版將光阻法收錄作為檢查注射液中不溶性微粒第二法，用以檢查100 ml以上注射液，2005年版將其改為第一法，作為注射液中不溶性微粒檢查的首選方法，適用范圍擴大為100 ml以下小容量注射液及注射用無菌粉末，2010年版將適用范圍進一步擴大至供靜脈注射用無菌原料藥。光阻法具有操作簡單、快速、靈敏、自動化及智能化程度高、取樣體積準確等特點，是目前注射液中不溶性微粒檢測較為先進的技術，被各國藥典廣泛收錄作為控制注射液質量的重要方法。在近年來的應用研究中發現，光阻法檢查注射液中不溶性微粒過程中存在諸多影響因素，現對其影響因素作一歸納概述，以便在標準修訂時參考，使檢測方法更趨合理完善。

1 取樣方式的影響

光阻法檢測注射液中不溶性微粒的取樣方法，《中國藥典》2005年版和2010年版規定：25 ml及25 ml以上的注射液，采取直接傾注法檢測；25 ml以下的注射液，采取直接取樣或合并取樣；對于注射用無菌粉末和黏度大的注射液可稀釋后再測定。

1.1 小容量注射液全體積取樣方式的影響

小容量注射液全體積取樣法（單支直測法）能觀察每支情況，污染機會少，可考察多支安瓿檢查結果的重現性，體現出瓶間差異，但實際操作中存在以下影響因素。①全體積取樣時，第一瓶或前幾瓶的讀數應棄去，至少需5~10 ml，使管道被所測樣品充滿，有些樣品與管道中水相混的過程可能會產生氣泡、乳光等現象，使測定數據偏高。②對于一些水溶性差的樣品，如果用全體積法測定，樣品在管道中與水相混時，可能會在局部析出沉淀，不僅使測定結果偏高，甚至造成管路堵塞。③全體積取樣操作較難控制，暫停鍵按慢了，管路吸入空氣，使結果偏高；暫停鍵按早了，樣品不能完全抽取，結果偏低[2]。④小體積注射液全體積取樣時，偶有劑量不足或取樣頭位置離開液面等原因造成管內有氣泡產生。⑤某些安瓿底部中間突起，全體積取樣時，須將取樣針沿安瓿壁插入底部，盡可能多地抽取溶液，一般每支測定時總要剩下0.1 ml藥液，取樣針可保留0.3~0.4 ml的樣品，再加上瓶內殘存的死體積，對于1 ml、2 ml等小規格的樣品，全體積取樣幾乎不可能實施，操作不當即可吸入氣泡[3]。⑥安瓿在割鋸掰開時，會大量引入微粒[4]，在開啟瓶口時，瓶口會有碎玻璃屑或粉塵落入瓶中，使測定數據偏高。

1.2 小容量注射液合并取樣方式的影響

對于1 ml、2 ml等小規格不宜采用全體積取樣的樣品，采用合并取樣時也存在影響因素。①小規格注射液合并取樣時取樣量大，用砂輪割鋸安瓿會大量增加微粒，實際操作中，如果割鋸后直接掰開，會大量引入微粒，使測定數據偏高。盡管在用砂輪割鋸安瓿后用微粒檢查用水淋洗劃痕，在安瓿掰開時，仍會有玻璃屑或粉塵落入安瓿內，使測定數據偏高。②合并取樣體積在30 ml以下測量時，因藥液量少，攪拌器露出水面將氣泡帶入探頭中，使測值出現異常[5]。

2 儀器對測定的影響

微粒檢測儀器自身也存在干擾因素，如微氣泡、靜電凝集等均可產生假性微粒[6]。注射用粉針劑用純凈水溶解后，用兩臺儀器分別測定，結果差異較大，可能與儀器的傳感器分辨率、微粒計數的準確性等因素有關[7]，還可能與儀器設計原理、儀器光路以及儀器的標定有關[8]。

3 其他影響因素

3.1 顏色的影響

部分顏色較深的注射液光阻法測定其不溶性微粒計數結果偏高，可能是由于光束無法穿透深色樣品池，如復方丹參注射液和當歸注射液，但用顯微計數法測定計數結果相對較低[9]。

3.2 黏度的影響

黏度大的注射液也會影響測定，直接測定會造成儀器管路堵塞，應用純化水或適宜溶劑稀釋后測定。

3.3 析出結晶的影響

易析出結晶的注射液，易堵塞管路，也不適宜采用光阻法測定。邱逢鋼等[10]探討用光阻法測定甘露醇注射液不溶性微粒，測定時將甘露醇注射液在30℃水浴上加熱20 min，使藥液溫度保持在25~30℃，再采用光阻法檢測，可以克服測試過程中因析出結晶發生微孔管堵塞，使測定順利進行，為易析出結晶注射液的測定提供了可行的方法。

3.4 攪拌速度

藥液的攪拌速度對測定結果也有影響，而且不同品種影響程度不同[11]。

4 結語

光阻法作為檢測注射液中不溶性微粒的主要方法，已顯示出其優越性；但由于存在如上所述的影響因素，使得檢測結果有時會有偏差，適用范圍有一定的局限性。所以《中國藥典》2005年版和2010年版雖然將光阻法作為首選方法，但仍保留了顯微計數法，當光阻法測定結果不符合規定或供試品不適于用光阻法測定時，應采用顯微計數法進行測定，并以顯微計數法的測定結果作為判定依據，保證了檢測結果的準確性。

正因為光阻法檢測注射液中不溶性微粒存在諸多干擾因素，使其研究領域和范圍不斷向縱深拓展，采用統計學手段對小容量注射劑不溶性微粒測定結果進行分析，可獲知其不溶性微粒污染的統計學特征，從而有助于在整體上了解小容量注射劑不溶性微粒污染的現狀[12]。對注射液[13]和注射用無菌粉末[14]不溶性微粒光阻法檢查結果進行不確定度分析，以找出影響不確定度的因素。隨著光阻法技術應用研究的深入，影響測定的因素會逐步得到解決，光阻法檢測注射液中不溶性微粒這一先進技術在控制靜脈用注射劑質量上將會發揮越來越重要的作用。

[1]國家藥典委員會.中國藥典(二部)[S].北京:化學工業出版社,2010:附錄71.

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[4]毛璐,甄健存,陳志剛.塑料及玻璃安瓿開啟方法對注射劑不溶性微粒污染的影響[J].中國藥事,2005,19(11):664.

[5]王暉,徐騰.小容量注射液不溶性微粒檢查取樣方法的考察[J].解放軍藥學學報,2009,25(4):377.

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[8]陳祝康,彭興盛,陳桂良.小容量注射液和注射用無菌粉末中不溶性微粒的測定方法研究[J].藥學實踐雜志,2004,22(2):89.

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[14]邱海強,劉曉瑜.注射用頭孢呋辛鈉不溶性微粒檢查的不確定度分析[J].藥學與臨床研究,2008,16(4):325.