一種經濟可行的鑒定葡萄球菌的方法

許淵

(上海市閘北區彭浦新村街道社區衛生服務中心檢驗科 上海 200435)

葡萄球菌是引起人類各種感染的常見病原菌之一。以往只認為金黃色葡萄球菌是致病的,而其它凝固酶陰性的葡萄球菌(coaglualase negative Staphylococcus CNS)是人類及動物皮膚與粘膜上正常菌群之一。但近年來這些葡萄球菌又成為尿路感染,菌血癥或敗血癥,心瓣膜修復術、長期流動性腹膜析等重要醫源性感染的病原菌[1～5]。因此,有必要對所有的葡萄球菌都進行準確的鑒定。鑒定葡萄球菌的方法較多,目前應用較多的是Kloos 1982和1985年[7～8]提出的方案生產的各種試劑盒,但進口試劑盒價格昂貴,鑒定值也不算高,給病人加重了負擔。因此,本文為尋找一種價格遠低于進口試劑盒,而鑒定值又比較高的適合我國國情的簡單快速的方法進行了嘗試,現報道如下。

1 資料與方法

1.1 菌株來源

我們挑選了中山醫院近期臨床分離出的93株的葡萄球菌及上海市第一人民醫院提供的由Vitek鑒定出的5株菌。

1.2 方法

根據Manual of Cl inical Microbiology1995年版上提供的鑒定葡萄球菌的試驗,再結合API、Vitek等我們從中挑選了針對性和特異性較高的20種反應,制成微量生化反應板條,同時用氧化酶、葡萄糖發酵、觸酶、凝固酶、菌落色素、溶血情況為補充試驗。

表1 試驗方法的生化反應

表2 98株菌的鑒定值分布

表3 試驗結果

表4 試驗方法與API的比較結果

上表中(表1),1～2及23～26不放在板條上,分開做,3～22一共20種反應按照一定配方配制后,加入20孔的塑料板條,每孔100uL,冰凍保存。使用時,每孔加入濃度相當于0.5McFar land的待測菌懸液100uL,其中精氨酸、鳥氨酸、尿素滴加石蠟油以提供厭氧環境,放入35℃溫箱18～24h后即可讀結果。其中VP與硝酸鹽還原需滴加試劑后10min內讀結果。板條上20孔的反應結果與氧化酶、葡萄糖發酵、及凝固酶觸酶、色素、溶血得到一個9位號碼,(氧化酶和葡萄糖發酵組成一個號碼,其它24個反應每3個組成一個號碼),將號碼輸入已設計的軟件中,即可得到鑒定結果及其鑒定值。

1.3 比較試驗

挑選出其中的20株菌,同時做現在臨床應用較多API Staph。

2 結果

我們對98株菌鑒定出的結果,發現其中60.7%的菌株鑒定值>80%,但也有11.8的菌株鑒定值較低<60%。鑒定值特別低的菌株多為一些較少分離出的菌株,如海葡萄球菌,中間型葡萄球菌等,可能為非對人致病菌,詳見表2。

對其中25株鑒定值較高的菌株API作對照的結果詳見表2,表4。

從上面的結果對比可看出,該方法對金葡,表葡的鑒定值比較高,與API的一致性也較高(金黃色葡萄球菌的一致性可達100%,表皮葡萄球菌也達到了85.7%,因為其中有1株表皮葡萄球菌API沒有鑒定出來)。但對其它CNS的鑒定值比較低,與API的一致性也只有50%。

3 討論

從以上試驗結果可看出,我們所正在研究的方法與API 對20株葡萄球菌的鑒定一致性達到了80%,金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌還要高。從中也可以發現API Staph仍然對一部分葡萄球菌未能鑒定出結果來。相信經過不斷的摸索與改進,該方法一定能夠更加成熟與完善,能夠造福于更多的病人。

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