絨毛膜促性腺激素對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)祖細(xì)胞移植的影響

邵莉進(jìn) 張紅娟 陳新磊 米梅艷

睪丸間質(zhì)祖細(xì)胞(PLC)是一種較幼稚的細(xì)胞，類似于睪丸間質(zhì)中未分化的間質(zhì)干細(xì)胞，能增殖分化為成熟的睪丸間質(zhì)細(xì)胞。而Leydig細(xì)胞的主要功能是合成和分泌睪酮并受黃體生成素(LH)調(diào)控。在體內(nèi)，睪丸受下丘腦-垂體-睪丸軸的調(diào)節(jié)，

LH直接作用于Leydig細(xì)胞刺激睪酮的合成。有研究認(rèn)為，發(fā)育的睪丸間質(zhì)細(xì)胞中需要LH引發(fā)類固醇合成反應(yīng)，在研究大鼠睪丸內(nèi)黃體生成素受體(LHR)表達(dá)和功能再現(xiàn)的分子機(jī)制中發(fā)現(xiàn):在未發(fā)育成熟的睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)，LHR的出現(xiàn)以及低水平表達(dá)不依賴LH;但是，睪丸間質(zhì)細(xì)胞后續(xù)的成熟過程，包括類固醇合成的起始和LHR表達(dá)的增加是依賴LH的［1］。研究顯示，絨毛膜促性腺激素(HCG)與LH有相同的受體，可替代體內(nèi)LH的作用刺激Leydig細(xì)胞合成睪酮［2］。本研究制作去勢(shì)大鼠模型，進(jìn)行PLC移植，觀察HCG對(duì)移植后睪酮分泌濃度的影響，探討PLC生長分化機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 經(jīng)分離、鑒定的17～18 d齡SD雄性乳大鼠PLC;健康成年SD雄性大鼠20只，體重250 g，均屬于河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 主要試劑及材料 RPMI-1640培養(yǎng)基，胎牛血清，二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱，HCG，瑞士SerozymeⅠ型內(nèi)分泌定量測定儀。

1.3 方法 20只SD雄性大鼠，手術(shù)切除雙側(cè)睪丸及附睪(去勢(shì))。去勢(shì)3周后，用1 ml注射器向大鼠腎包膜下各個(gè)方向依次均勻注射預(yù)先抽取好的移植細(xì)胞懸液0.1 ml［(4～5)×107個(gè)細(xì)胞］，移植細(xì)胞為本實(shí)驗(yàn)室預(yù)先培養(yǎng)5 d的PLC，活性達(dá)98%，經(jīng)鑒定純度達(dá)90%左右。

1.4 HCG激發(fā)試驗(yàn) 將移植后的大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組10只。實(shí)驗(yàn)組每隔2周肌內(nèi)注射HCG 20 U，對(duì)照組則肌注相同體積的0.9%氯化鈉溶液。分別于去勢(shì)前、去勢(shì)后、移植后2、4、8周從鼠尾取血，離心收集血清，通過磁酶免方法測定睪酮含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，組內(nèi)比較采用方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2組在移植后睪酮分泌量均較去勢(shì)后3周明顯增高(P＜0.01)，但較去勢(shì)前比較睪酮值明顯降低(P＜0.01)。經(jīng)HCG刺激后實(shí)驗(yàn)組睪酮濃度與對(duì)照組相比無明顯增高(P＞0.05)。見表1。

表1 去勢(shì)SD大鼠進(jìn)行PLC移植后對(duì)hCG刺激分泌睪酮情況n=10，ng/ml，±s

表1 去勢(shì)SD大鼠進(jìn)行PLC移植后對(duì)hCG刺激分泌睪酮情況n=10，ng/ml，±s

注:與對(duì)照組比較，*P＞0.05;與去勢(shì)后3周比較，#P＜0.01

組別 去勢(shì)前 去勢(shì)后3周 移植后2周 4周 8周對(duì)照組 3.5±0.5 0.10±0.0 0.48±0.08# 1.30±0.21# 2.30±0.38#實(shí)驗(yàn)組 3.5±0.5 0.10±0.0 0.51±0.03*# 1.31±0.25*# 2.18±0.56*#

3 討論

睪丸間質(zhì)細(xì)胞的主要功能是分泌睪酮，其分泌活動(dòng)受丘腦下部、垂體以及自身的調(diào)節(jié)。下丘腦分泌的促性腺激素釋放激素作用于腦垂體前葉，該部位以脈沖形式分泌具有高生物活性的LH。LH可刺激睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)睪酮的合成。另有研究認(rèn)為，發(fā)育的睪丸間質(zhì)細(xì)胞中需要LH引發(fā)類固醇合成反應(yīng)，在研究大鼠睪丸內(nèi)LHR表達(dá)和功能再現(xiàn)的分子機(jī)制中發(fā)現(xiàn):在未發(fā)育成熟的睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)，LHR的出現(xiàn)以及低水平表達(dá)不依賴LH;但是，睪丸間質(zhì)細(xì)胞后續(xù)的成熟過程，包括類固醇合成的起始和LHR表達(dá)的增加是依賴LH的［1］。在去勢(shì)大鼠體內(nèi)雄激素水平很低甚至測不到，由雄激素引起的下丘腦-垂體軸的抑制作用降低，大鼠體內(nèi)LH水平較高，有利于移植PLC的增殖分化及促進(jìn)LHR表達(dá)增高。而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明在不用任何外源性促性腺激素條件下，移植的PLC可以存活，且逐漸生長分化成熟，具有一定分泌睪酮的能力，可以在一定程度彌補(bǔ)生殖功能不足。

HCG是胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種促性腺激素，HCG與LH有相同的受體，可替代體內(nèi)LH的作用刺激Leydig細(xì)胞合成睪酮［2］。本實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用HCG刺激移植大鼠后睪酮分泌量無明顯增高(P＞0.05)。考慮可能與重復(fù)多次應(yīng)用hCG刺激有關(guān)。有研究認(rèn)為，LH或HCG對(duì)LH/HCG受體的調(diào)節(jié)是雙向的，生理水平的LH或HCG能維持或升調(diào)節(jié)其自身受體水平;但超生理水平、特別是長期的作用，導(dǎo)致受體降調(diào)節(jié)，同時(shí)影響受體后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)。同時(shí)調(diào)節(jié)也是多元的:同源性調(diào)節(jié)和非同源性調(diào)節(jié)。前者是指循環(huán)中LH或hCG水平影響其自身受體水平;后者是指其他的內(nèi)分泌、旁分泌和自分泌因子發(fā)揮對(duì)受體的調(diào)節(jié)作用。該調(diào)節(jié)作用可以是刺激作用，也可能是抑制作用，可以直接影響細(xì)胞表面受體數(shù)量和受體基因表達(dá)和或影響受體后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)［3］。故而影響睪丸間質(zhì)細(xì)胞合成和分泌睪酮。其具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

1 Tena-Sempere M，Rannikko A，Kero J，etal.Molecularmechanismsof reappearance of luteinizing hormone receptor expression and function in rat testis after selective leydig cell destruction by ethylene dimethane sulfonate.Endocrin-ology，1997，138:3340-3348.

2 王鮮忠，潘紅梅，吳建云，等.FSH對(duì)體外培養(yǎng)間質(zhì)細(xì)胞睪酮生物合成的影響.中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2005，21:13.

3 張才田，戴曉華編譯.黃體生成激素/人絨毛膜促性腺激素受體研究進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué)計(jì)劃生育生殖健康分冊(cè)，2007，26:169.