調(diào)寧蛋白表達(dá)水平與慢性乙型肝炎患者肝臟微循環(huán)障礙的關(guān)系

代雪楓 嚴(yán)家春 李峻峰 徐長(zhǎng)江 袁蘇娜

調(diào)寧蛋白（Calponin，CaP）是平滑肌所特有的重要調(diào)控蛋白。研究顯示，它具有調(diào)節(jié)平滑肌收縮、抑制細(xì)胞增殖及參與細(xì)胞骨架的維持等作用[1～3]。慢性乙型肝炎（CHB）的一個(gè)重要病理變化就是肝臟微循環(huán)障礙。基于肝臟組織血液供應(yīng)的特殊性，有必要對(duì)CaP在CHB患者肝臟血管改建中的作用進(jìn)行研究。我們對(duì)200例CHB患者肝活檢組織進(jìn)行了CaP檢測(cè)，以探討它們之間的關(guān)系。

材料與方法

一、材料與分組 收集2004年1月至2007年12月我院200例CHB肝活檢組織，男143例，女57例，年齡15～57歲（平均年齡29.5±8.5歲）。按照國(guó)內(nèi)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，包括 CHB 輕度（G1～G2）、CHB 中度（G3）和CHB重度（G4）及肝硬化（LC）各50例。經(jīng)免疫組化檢測(cè)，患者肝組織HBsAg皆陽(yáng)性。另選10例肝組織HBsAg陰性，肝組織學(xué)大致正常者作對(duì)照。

二、肝組織學(xué)檢查 采用16號(hào)肝活檢針抽取2條肝組織，其長(zhǎng)度≥1.5cm。其中一份用10%福爾馬林固定，常規(guī)制片，備HE及免疫組化染色；另一份按照電鏡技術(shù)制樣，備電鏡觀察。根據(jù)肝竇Ⅳ型膠原分布范圍，將肝竇毛細(xì)血管化定為輕（占肝小葉≥1%）、中（占肝小葉≥33%）、重型（占肝小葉或假小葉≥60%）。

三、肝組織CaP免疫組化檢測(cè) 采用S-P法檢測(cè)肝組織CaP的表達(dá)。抗CaP單克隆抗體及免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。判斷標(biāo)準(zhǔn)：陰性（－）：無(wú)明顯陽(yáng)性細(xì)胞；陽(yáng)性（＋）：顯棕黃色，肝細(xì)胞質(zhì)膜散在表達(dá)，肝竇及毛細(xì)血管灶性或斷續(xù)表達(dá)，其表達(dá)范圍均占所觀察視野的10%～30%；強(qiáng)陽(yáng)性（＋＋）：顯深棕黃色或黃褐色，肝細(xì)胞、肝竇壁內(nèi)皮細(xì)胞、膽管細(xì)胞、成肌纖維細(xì)胞、血管纖維間隔及炎癥區(qū)的梭形細(xì)胞等均有表達(dá)，表達(dá)范圍占所觀察視野的30%以上。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用x2檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為有顯著性差異。

結(jié) 果

一、調(diào)寧蛋白在CHB肝組織的定位 在對(duì)照組，CaP僅在匯管區(qū)的血管及膽管壁有弱表達(dá)，其余肝組織無(wú)表達(dá)；而在CHB組，CaP在肝實(shí)質(zhì)及肝間質(zhì)細(xì)胞均有表達(dá)。在CHB肝組織，CaP表達(dá)主要分布于肝細(xì)胞（圖1）、小膽管或膽管樣細(xì)胞（圖2）、肝竇壁內(nèi)皮細(xì)胞（圖3）、肌纖維帶（圖4）、毛細(xì)血管增生區(qū)域（圖5）、貯脂細(xì)胞及成肌纖維細(xì)胞（圖6）。免疫組化染色提示，CaP表達(dá)變化有以下特點(diǎn)：A：有肝竇擴(kuò)張或阻塞的內(nèi)皮細(xì)胞及貯脂細(xì)胞示陽(yáng)性表達(dá)，纖維帶內(nèi)的小血管及其周邊的肝細(xì)胞、炎癥區(qū)域周圍的肝細(xì)胞、假小葉的肝細(xì)胞則示強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；B：纖維瘢痕組織中的膽管或膽管樣細(xì)胞及成肌纖維細(xì)胞示陽(yáng)性表達(dá)；C：肝竇毛細(xì)血管化及肝竇擴(kuò)張的內(nèi)皮細(xì)胞、增生的血管內(nèi)皮細(xì)胞及其肌纖維帶則示強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（圖4）；D：異型增生的肝細(xì)胞示陽(yáng)性表達(dá)（圖7）。

圖1 肝細(xì)胞CaP強(qiáng)陽(yáng)性（SP×400）

圖2 膽管細(xì)胞CaP陽(yáng)性（SP×400）

圖3 肝竇及血管內(nèi)細(xì)胞CaP表達(dá)（SP×400）

圖4 肌纖維束CaP表達(dá)（SP×400）

圖5 毛細(xì)血管增生區(qū)CaP表達(dá)（SP×400）

圖6 貯脂及成肌纖維細(xì)胞CaP表達(dá)（SP×400）

圖7 異型增生肝細(xì)胞CaP表達(dá)（SP×400）

二、調(diào)寧蛋白表達(dá)與CHB肝內(nèi)病變的關(guān)系 本組資料提示，CaP表達(dá)與CHB肝內(nèi)病變的輕重程度有關(guān)：在CHB輕度組，少數(shù)病例（24%）肝組織CaP表達(dá)，與對(duì)照組相似，且強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)少見（6%）；而在CHB重度組，肝組織中CaP表達(dá)陽(yáng)性占33%，強(qiáng)陽(yáng)性占67%（P＜0.01）；在LC組，除假小葉內(nèi)的肝細(xì)胞CaP示彌漫性強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)外，纖維組織內(nèi)的小膽管上皮細(xì)胞、擴(kuò)張的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、成肌纖維細(xì)胞及平滑肌纖維帶（圖4）皆表達(dá)上調(diào)，與上述組間有極顯著性差異（P＜0.01）。肝組織CaP表達(dá)及組織定位與CHB肝內(nèi)病變的關(guān)系見表1。

表1 CaP在肝組織的表達(dá)變化及定位

三、調(diào)寧蛋白表達(dá)與肝竇毛細(xì)血管化的關(guān)系 本組伴肝竇毛細(xì)血管化者161例（81%）。資料顯示，在CHB重度肝組織同時(shí)發(fā)生肝竇閉塞及擴(kuò)張改變，肝竇毛細(xì)血管化病變也較重，CaP表達(dá)范圍廣，顯色深；而在CHB輕度組，則肝細(xì)胞示濁腫，肝竇狹窄多見，肝竇擴(kuò)張罕見，肝竇毛細(xì)血管化也較輕，CaP表達(dá)范圍小，顯色弱，提示CaP表達(dá)變化與肝竇毛細(xì)血管化的輕重程度同步（表2）。

表2 調(diào)寧蛋白表達(dá)與CHB肝竇毛細(xì)血管化的關(guān)系

討 論

本研究發(fā)現(xiàn)，①CaP在對(duì)照組肝組織定位于血管及膽管，其余組織無(wú)表達(dá)；②在CHB肝組織，則肝細(xì)胞、貯脂細(xì)胞、成肌纖維細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮及毛細(xì)血管化的內(nèi)皮細(xì)胞、小膽管上皮細(xì)胞、平滑肌纖維帶等組織均有CaP表達(dá)；③CaP表達(dá)隨CHB肝組織的變性壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度的加重而表達(dá)上調(diào)；④伴隨肝竇擴(kuò)張、血管增生、肝竇毛細(xì)血管化及纖維化，CaP強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率增加，提示CaP表達(dá)調(diào)節(jié)受CHB肝臟微循環(huán)障礙狀態(tài)的影響。

CaP主要生理功能是調(diào)節(jié)平滑肌的收縮和舒張[5，6]。正常生理情況下，平滑肌受到外界刺激時(shí)，通過(guò)Ca2和磷脂激活蛋白激酶C，導(dǎo)致CaP磷酸化，不再抑制肌球蛋白ATP酶活性，平滑肌收縮；反之則平滑肌舒張[7，8]。本研究發(fā)現(xiàn)，CaP表達(dá)變化與CHB肝微循環(huán)障礙有關(guān)。資料顯示，在肝內(nèi)病變較輕時(shí)，匯管區(qū)血管炎癥雖較明顯，但血管破壞及阻塞的范圍較局限，肝界板完整或輕微破壞，肝細(xì)胞水腫及肝竇狹窄是局限的，中央靜脈完整，表明其有局限性血供輸入不良。而在肝內(nèi)病變較重時(shí)，不僅肝實(shí)質(zhì)伴隨顯著的血管增生及肝竇毛細(xì)血管化，而且這些增生的血管可形成匯管與匯管、匯管與中央靜脈甚至跨小葉連通，即構(gòu)成所謂的橋形壞死或纖維化，導(dǎo)致肝小葉嚴(yán)重紊亂，在LC組肝細(xì)胞被血管間隔分隔為大小不同的團(tuán)塊（假小葉），因其無(wú)中央靜脈，加之肝細(xì)胞水腫引起肝竇閉塞，故導(dǎo)致肝小葉血液輸入和輸出障礙。在這樣的病理狀況下，可能反饋地引起CaP合成分泌增加，也可能引起Ca2＋的變化，以改變ATP酶活性方式使CaP磷酸化或脫磷酸化，加速肝組織血液的輸入和輸出，以調(diào)整不利的病理環(huán)境。

本資料證實(shí)，CaP在CHB肝組織合成分泌是增加的。CaP分泌上調(diào)應(yīng)增強(qiáng)血管的收縮[9，10]，這與CHB輕度組肝竇閉鎖，毛細(xì)血管化的血管多閉合較一致。然而，在本組肝病重度組，CaP在肝組織表達(dá)雖然增加，但多數(shù)肝竇及血管則示擴(kuò)張改變。我們認(rèn)為，肝竇及血管擴(kuò)張表明肝內(nèi)壓力增加，系門脈高壓所致，而CaP除了可啟動(dòng)肌球蛋白輕鏈磷酸化，促進(jìn)肌動(dòng)蛋白與肌球蛋白結(jié)合及ATP酶活性，增加肌絲滑行及平滑肌收縮外[11，12]，尚有抑制ATP酶活性，減少肌動(dòng)蛋白運(yùn)動(dòng)的功能，從而使平滑肌舒張，在門脈高壓下而引起肝竇毛細(xì)血管擴(kuò)張。

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