胃癌組織中MTA1蛋白及微血管密度檢測

林存俠,溫洪濤#,張 蕾,張云漢

1)鄭州大學第一附屬醫院消化內科鄭州 450052 2)鄭州大學第一附屬醫院腫瘤科鄭州 450052 3)鄭州大學第一附屬醫院病理科鄭州 450052

#通訊作者,男,1968年2月生,博士,教授,主任醫師,研究方向:消化道腫瘤的基礎與臨床,E-mail:wenhongtao68@163.com

胃癌是發病率較高的一種惡性腫瘤,嚴重危害人類的生命與健康,早期多發轉移是其一個重要的生物學特性[1]。MTA1(metastasisassociated gene 1)是最近發現的一個腫瘤轉移相關基因,盡管其功能尚未完全清楚,但已有的研究[2]表明,其表達產物MTA1蛋白與多種腫瘤的浸潤、轉移密切相關。微血管密度(microvessel density,MVD)反映腫瘤新生血管的增生程度,腫瘤組織中 MVD越高,腫瘤越易浸潤、轉移[3]。為了解胃癌組織中 MTA1蛋白的表達及其與MVD的關系,作者進行了如下研究。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集鄭州大學第一附屬醫院病理科 2006年 9月至 2008年 9月 63例胃腺癌組織存檔蠟塊,患者術前均未接受化療、放療及免疫治療等,其中男 34例,女 29例,年齡 35.0～77.0 (57.4±11.0)歲;高、中分化腺癌22例,低分化腺癌41例;侵及淺肌層者 9例,侵及深肌層者 22例,侵及漿膜層者 32例;有淋巴結轉移者 36例,無淋巴結轉移者 27例。另選同期 12例胃潰瘍手術患者潰瘍旁正常胃黏膜組織作對照,其中男 7歲,女 5例;年齡36.0～75.0(56.1±9.8)。標本均經病理學證實。

1.2 主要試劑 山羊抗人MTA1多抗購自美國Santa Cruz公司,工作濃度為1:200;濃縮型鼠抗人CD105單抗(工作濃度 1:100)和免疫組織化學通用試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 2種組織中TA 1蛋白及M VD檢測 標本均經體積分數為10%甲醛固定,石蠟包埋,4μm厚連續切片3張,1張行 HE染色以確定病理性質,另外2張用于免疫組織化學檢測。切片常規脫蠟、脫水,抗原經高溫高壓修復,嚴格按免疫組化試劑盒說明書步驟進行操作。分別以已知MTA1蛋白陽性的乳癌組織、CD105陽性的扁桃體組織作為陽性對照,用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果判斷標準 MTA1蛋白陽性染色顆粒主要位于胞核內,部分細胞胞質也呈陽性反應。采用Barnes等[4]半定量法進行陽性結果判定,每例選擇10個高倍視野,計算MTA1陽性細胞數占視野中腫瘤細胞總數的百分比:無陽性表達計0分,＜25%計1分,25%～計 2分,50%～計 3分,≥75%計 4分。按染色強度計分:淺黃色計 1分,棕黃色計2分,棕褐色計 3分。將 2項指標評分相乘,總分0分為陰性(-),＞1分為陽性(+)。依照Weidner等[5]的判斷標準進行MVD判定:所有染成棕色的單個內皮細胞或內皮細胞簇均計數為 1個血管,管徑 ＜50 μm、單個染色細胞及成群無管腔的染色細胞均作為微血管計,而管徑 ＞50μm及肌層較厚者均不作為微血管計。先于低倍鏡下尋找 MVD最高的區域,然后在高倍鏡下選擇 3個視野計數微血管,取平均值即為MVD。

1.5 統計學處理 采用SPSS 10.0進行統計分析,應用 χ2檢驗、t檢驗或單因素方差分析比較不同類型胃組織及不同臨床病理特征的胃癌組織中 MTA1蛋白和MVD的表達情況,檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 2種胃組織中M TA 1蛋白的表達及MVD比較 MTA1蛋白的表達見圖1A、1B。CD105標記的微血管主要分布于腫瘤組織,特別是腫瘤邊緣區,在正常胃黏膜中表達較弱或不表達(圖 1C、1D)。胃癌組織中MTA1蛋白的表達及MVD高于正常胃黏膜組織,見表 1。

圖1 正常胃黏膜及胃癌組織中M TA 1蛋白及微血管檢測結果(SP,×400)A,B:分別為正常胃黏膜和胃癌組織中MTA1蛋白的表達;C,D:分別為正常胃黏膜和胃癌組織中MVD的表達。

表1 2種胃組織中M TA 1蛋白的表達及MVD比較

*χ2=9.380,P=0.002;#t=9.974,P＜0.001。

2.2 胃癌組織中M TA1蛋白表達及M VD與臨床病理特征的關系 見表2。

表2 胃癌組織中MTA 1蛋白表達及M VD與臨床病理特征的關系

2.3 胃癌組織中M TA1蛋白的表達與MVD的關系 MTA1蛋白表達者MVD值(47.49±7.69)高于MTA1蛋白未表達者(36.77±5.71)(t=5.265,P＜0.001)。

3 討論

自從Toh等[6]利用Southern印跡雜交法分離出鼠乳癌相關基因 MTA1及其對應的人類同源物MTA1之后,MTA1及其表達產物與腫瘤的關系就成了研究的熱點。MTA1蛋白在腫瘤浸潤轉移中的作用目前還不清楚,研究[7]證明 MTA1蛋白是核小體重塑和組蛋白去乙?；笍秃衔锏囊粋€組成部分,可通過與組蛋白去乙?；?HDACs)結合,趨化HDACs到達目標基因的啟動子區域,通過去除其組蛋白的乙酰基從而重塑染色質結構,促進基因組DNA與組蛋白結合,使某些染色質區域的結構由松散變得更加緊密,從而導致某些抑制腫瘤浸潤轉移的基因的轉錄受到抑制,降低其表達水平。

作者的研究結果顯示:胃癌組織中MTA1蛋白的表達水平高于正常胃黏膜組織;胃癌組織中侵及漿膜者MTA1蛋白表達水平高于未侵及漿膜者,低分化者高于高中分化者,有淋巴結轉移者高于無淋巴結轉移者。說明MTA1蛋白的表達與胃癌的發生及浸潤、轉移有關,MTA1蛋白的過表達可能是胃癌發生發展的促進因素。

有研究[8]報道,MTA 1可能是通過增強低氧誘導因子1α(HIF-1α)的穩定性和轉錄活性間接使血管內皮生長因子的轉錄活性和表達增強,最終導致新生血管的形成,但具體機制尚不清楚。作者的研究結果表明,MTA1蛋白陽性表達的胃癌組織中MVD的表達高于MTA1蛋白陰性表達者,提示胃癌組織中MTA 1蛋白的過表達可能與微血管的生成密切相關,具體機制有待于進一步研究。

綜上所述,MTA1蛋白在胃癌的發生發展中發揮重要作用,可能與其促進胃癌組織的微血管生成有一定關系。深入研究 MTA1蛋白及其編碼基因,進而研究它們與腫瘤的關系對于進一步揭示腫瘤的浸潤、轉移機制和探尋更為有效的治療手段具有重要意義。

[1]Karin M.Nuclear factor-kappa B in cancer development and progression[J].Nature,2006,441(7 092):431

[2]高冬玲,陳奎生,趙志華,等.食管鱗狀細胞癌組織中MTAl和E-cadhcrin蛋白的表達[J].鄭州大學學報:醫學版,2007,42(6):1 028

[3]Thielemann A,Kopczyński Z,Filas V,etal.The Determ ination of VEGF and MVD,among patients with p rimary breast cancer[J].Pathol Oncol Res,2008,14(2):137

[4]Barnes DM,Dub lin EA,Fisher CJ.Immunohistochem ical detection of p 53 p rotein inmammary carcinoma:an important new independent indicator of prognosis[J].Hum Pathol,1993,24(5):469

[5]Weidner N,Folkman J,Pozza F,etal.Tumor angiogenesis:a new significant and independentprognostic indicator in early-stage breast carcinoma[J].JNatl Cancer Inst, 1992,84(24):1 875

[6]Toh Y,Pencil SD,Nicolson GL.A novel candidatemetastasis-associate gene,m ta1,differentially exp ressed in highlymetastatic mammary adenocarcnoma cell lines[J].J Biol Chem,1994,269(37):22 958

[7]Nicolson GL,Nawa A,Toh Y,et al.Tumormetastasis-association human MTA 1gene and itsMTAl protein product: role in epithelial cancer invasion,p roliferation and nuclear regulation[J].Clin Exp Metastasis,2003,20(1):19

[8]Moon H,Cheon H,Chun K,et al.Metastasis-associated p rotein l enhances angiogenesis by stabilization of HIF-1 alpha[J].Oncol Rep,2006,16(4):929