乳腺癌中雄激素受體的表達及臨床意義

李靖華 柳克曄 王曉春 楊季紅

乳腺癌是一種激素依賴性腫瘤，多數研究認為其發病率的增加與雌激素有關［1］，而關于雌激素受體(ER)和孕激素受體(PR)的研究也顯示，ER、PR是乳腺癌的獨立預后因子［2］，針對它們的治療也已經成為乳腺癌的一線內分泌治療方案［3］。然而女性乳腺癌的發病率顯示絕經后女性亦是高發年齡段，而此時女性體內雌激素大量減少，因此除了雌激素，還可能有其他因素導致乳腺癌的發生。雄激素在一些研究中顯示是絕經后女性乳腺癌發病的高發因素，且雄激素大多通過雄激素受體(AR)發揮作用［4］，但目前研究結果不盡一致［5，6］。因此我們應用流式細胞術(FCM)對乳腺癌組織進行AR檢測，了解AR與乳腺癌臨床特點、病理指標的關系，為乳腺癌的預后判斷及內分泌治療積累資料、提供依據。

1 資料與方法

1．1 一般資料 收集河北大學附屬醫院普外科、腫瘤外科2009年6月至2010年3月乳腺癌確診但，術前未行任何治療的病例60例，年齡33～75歲，平均年齡(51±9)歲。乳腺癌手術切除標本，70%乙醇固定。其中組織學分級Ⅰ級8例，Ⅱ級36例，Ⅲ級16例。26例乳腺癌伴腋下淋巴結轉移。

1．2 方法 將固定于70%乙醇中的腫瘤組織標本經0．9氯化鈉溶液沖洗后，放在150目的銅網上，下置一平皿，用眼科剪刀將組織剪碎，用眼科鑷子輕搓組織，邊搓邊用0．9氯化鈉溶液沖洗，經300目尼龍網濾除細胞團塊，收集濾下的細胞懸液。1 000 r/min，離心5 min，棄上清;加入1 ml PBS將細胞懸浮計數并調整細胞濃度為1×107/ml時，此懸浮液為單分散細胞懸液。將單細胞懸液分裝3管(陰性、陽性對照組及實驗組)，實驗組加入雄激素受體抗體100μl，充分振搖，36℃避光反應30 min;實驗組及陽性對照組各加入二抗100μl，避光反應，然后進行FCM檢測。兔抗多克隆雄激素受體抗體購自北京博奧森生物技術有限公司。

1．3 結果判定 AR經流式細胞儀檢測后所得結果為具體數值，無需判定。對標本組織同時行免疫組化檢測結果判定標準為:ER、PR陽性表達為細胞胞核呈棕黃色顆粒，Her-2陽性染色位于胞膜，陽性標準為胞膜染色或胞膜、胞漿同時染色。每張切片中陽性細胞＜25%或無陽性細胞為陰性，陽性細胞＞25%為陽性。

1．4 統計學分析應用SPSS 11．5統計軟件，計量資料以ˉx±s表示多組間比較用方差分析，兩組間比較采用t檢驗，相關分析采用直線相關和等級相關，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 AR在乳腺癌中的表達 AR值最小值為291．79，最大值為512．49，平均為(361 ±58)。

2．2 乳腺癌組織中的AR表達與臨床特點、病理參數的相關性60例乳腺癌組織中AR的不同表達與腫瘤大小、組織學分級、TNM分期、淋巴結轉移情況、月經情況、ER、PR、HER-2比較情況見表1。我們得到以下結果:AR的表達與腫瘤大小有關聯，腫瘤≤2 cm者，雄激素受體表達較高(427±42)，與2～5 cm腫瘤及＞5 cm腫瘤(343±32，314±29)相比差別有統計學意義(P=0．000);其表達與組織學分級有關聯，組織學分級

Ⅰ級者雄激素受體表達值較高(447±50)，與Ⅱ、Ⅲ級者(357±31，322±38)相比差異有統計學意義(P=0．000)。與ER蛋白表達呈正相關(r=0．347，P=0．000)。與 TNM分期、絕經與否，PR、Her-2及淋巴結轉移情況不相關(P＞0．05)。

表1 AR表達與乳腺癌臨床特點、病理指標的關系±s

表1 AR表達與乳腺癌臨床特點、病理指標的關系±s

項目 AR t或F值 P值314±29絕經是(n=36) 370 ±52 0．650 0．521否(n=24) 356±48組織學分級Ⅰ(n=8) 447±50Ⅱ(n=36) 357 ±31 15．075 0．000Ⅲ(n=16) 322±38 ER陽性(n=36) 389 ±46 3．975 0．000陰性(n=24) 320±27 PR陽性(n=40) 352 ±54 －1．252 0．221陰性(n=20) 380±64 Her-2陽性(n=30) 373 ±63 1．093 0．284陰性(n=30) 350±51淋巴轉移有(n=26) 349 ±52 －1．403 0．171無(n=34) 378±62Ⅰ期(n=6) 357±27 TNMⅡ期(n=46) 367 ±53 0．554 0．581Ⅲ期(n=8) 334±39≤2(n=18) 427±42腫瘤大小(cm)＞2且≤5(n=28) 343 ±32 21．849 0．000＞5(n=14)

3 討論

AR屬于核受體超家族成員，主要存在于靶細胞的核內。人AR基因定位于X染色體長臂(Xq11～12)，含有8個外顯子和7個內含子，全長約90 kb，編碼918個氨基酸。AR有4個功能結構域，分別是低保守的氨基端結構域、高保守的DNA結合結構域、鉸鏈區與高保守的羧基端配體結合結構域，不同的結構域有不同的功能［7］。AR調節轉錄活化主要是通過氨基端和羧基端兩個結構域來完成的。

本研究發現，AR表達與腫瘤大小、組織學分級呈負相關。即腫瘤越小、組織學分級越低，AR的表達越高，我們的研究結果與 Ogawa 等［8，9］的研究一致。Ogawa 等［8］應用免疫組化法檢測227例原發性乳腺癌中AR的表達，發現越小的腫瘤AR陽性率越高(P=0．045)，Monifar等［9］應用抗 AR 單克隆抗體對乳腺癌標本進行檢測發現AR在Ⅰ級的腫瘤表達為88%，在Ⅱ級和Ⅲ級的腫瘤中分別為71%和47%。表明AR的高表達可能預示腫瘤惡性程度較低。

我們的研究還發現，AR的表達與ER的陽性表達率呈正相關，即ER陽性者AR的表達高，與文獻報道相似［8，9］。Ogawa等［8］研究發現 AR 與 ER 表達相關(P=0．027)。Monifar等［9］的研究表明:90%分化Ⅰ級的侵襲性癌與55%分化Ⅱ級的侵襲性癌表現為ER+/AR+，而絕大多數分化Ⅲ級的侵襲性癌表現為ER-/AR-。因為目前一般認為ER的表達是預后良好與否的指標，即ER陽性者預后較好，而AR的表達又與ER呈正相關，所以AR的高表達也可能預示著預后良好。國外文獻已有相關報道［4，10］。Agrawal等［10］研究表明 AR 陽性者 5 年內的局部復發率為22．6%(48/212)，陰性者的局部復發率為52．2%(144/276)。在所有局部復發患者中，AR陽性者所占比率為25%，明顯低于AR陰性者(占75%)，差異有統計學意義(P=0．023)。Shippinger等［4］的研究也有相似發現，即 AR 陽性患者復發后的平均生存時間(21．89個月)高于AR陰性患者(11．99月)。我們的研究還需進行長期隨訪，才能得出預后結論。我們的研究沒有發現AR與Her-2、PR、TNM分期、淋巴結轉移情況和絕經與否有關。

1 Chlebowski RT，Kuller LH，Prentice RL，et al．Breast cancer after use of estrogen plus progestin in postmenopausal women．N Engl JMed，2009，360:573-587．

2 Chevallier B，Heintzmann F，Mosseri V，et al．Prognostic value of estrogen and progesterone receptors in operable breast cancer．Results of a univariate and multivariate analysis．Cancer，1988，62:2517-2524．

3 Gnant M，Mlineritsch B，Schippinger W，et al．Endocrine therapy plus zoledronic acid in premenopausal breast cancer．N Engl JMed，2009，360:679-691．

4 ShippingerW，Regitnig P，Dandachi N，et al．Evaluation of the prognostic significance of androgen receptor expression in metastatic breast cancer．Virchows Arch，2006，449:24-30．

5 Carreno G，Del Casar JM，Corte MD，et al．Local recurrence after mastectomy for breast cancer:analysis of clinicopathological，biological and prognostic charactersitics．Breast Cancer Res Treat，2006，6:43-48．

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9 Moinfar F，Okcu M，Tsybrovskyy O，et al．Androgen receptors frequently are expressed in breast carcinomas potential relevance to new therapeutic strategies．Cancer，2003，98:703-711．

10 Agrawal A K，Jilen M，Grzebieniak Z，et al．Androgen receptors as a prognostic and predictive factor in breast cancer．Folia Histochem Cytobiol，2008，46:269-276．