三種不規(guī)則抗體篩選方法對(duì)比分析

范少英 楊君青

紅細(xì)胞ABO血型以外的不規(guī)則抗體是引起輸血不良反應(yīng)、新生兒溶血病、血型鑒定困難及疑難配型等的主要原因［1］。交叉配血不合時(shí)，對(duì)有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要接受多次輸血者必須按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》有關(guān)規(guī)定作抗體篩選試驗(yàn)［2］。本文采用微柱凝膠法、凝聚胺法和LIM抗人球法對(duì)獻(xiàn)血者血清進(jìn)行不規(guī)則抗體檢測(cè)。

1 材料與方法

1．1 試劑 各種血型抗原抗血清均由Immucor Gamma公司提供。抗IgG，C3d由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供。抗體篩查細(xì)胞由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供，由3個(gè)細(xì)胞組成，包括 Rh，Kidd，MNSs，Duffy，Diego，Kell，Lewis，P 等 8 個(gè)血型系統(tǒng)的19個(gè)抗原互補(bǔ);抗體鑒定細(xì)胞由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供。凝膠卡由達(dá)亞美公司提供。聚凝胺試劑盒由臺(tái)灣貝索公司提供。

1．2 儀器 KA-2200小型臺(tái)式離心機(jī)(日本久保田公司)，瑞士達(dá)亞美卡式血型配血系統(tǒng)。

1．3 方法

1．3．1 使用商品的篩選細(xì)胞分別采用微柱凝膠法、凝聚胺法、LIM抗人球法對(duì)倍比稀釋后的各種抗血清進(jìn)行檢測(cè)，比較三種實(shí)驗(yàn)方法對(duì)不同血型系統(tǒng)抗體的敏感性。見表1。

1．3．2 對(duì)用微柱凝膠法篩查存在不規(guī)則抗體的獻(xiàn)血者血清用凝聚胺法和LIM抗人球法進(jìn)行確認(rèn)，比較三種實(shí)驗(yàn)方法用于抗體篩查的適用性。

2 結(jié)果 見表1。

表1 3種實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定不同血型系統(tǒng)抗體效價(jià)比較

表2 3種實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體的效價(jià)比較

3 討論

不規(guī)則抗體指不符合ABO血型系統(tǒng)規(guī)則的血型抗體，分為IgM抗體和IgG抗體。IgM分子量較大在鹽水介質(zhì)中能直接連接相應(yīng)的紅細(xì)胞，使之發(fā)生肉眼可見的凝集，IgG在鹽水介質(zhì)中不凝集而只能致敏帶有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，必須通過其他介質(zhì)如酶法、低離子強(qiáng)度溶液法、抗人球蛋白法、聚凝胺法、凝膠法等血清學(xué)技術(shù)才能檢出［3］。

抗體篩選技術(shù)要求是盡量不漏檢有臨床意義的抗體，盡快完成抗體檢測(cè)。臨床常用的不規(guī)則抗體篩查技術(shù)中抗人球蛋白法被認(rèn)為是理論上最明確、最準(zhǔn)確的方法，但正是由于其繁瑣的操作，又不能同時(shí)對(duì)多份標(biāo)本檢測(cè)，因此不適用于大批量篩查，只能將該實(shí)驗(yàn)方法用在對(duì)少數(shù)標(biāo)本的確定中。在抗人球法的基礎(chǔ)上加上LIM使試驗(yàn)方法更加敏感。微柱凝膠法簡(jiǎn)單、方便、敏感性高，結(jié)果易判斷又能較長(zhǎng)時(shí)間保存，標(biāo)本用量少，又能同時(shí)檢測(cè)多份標(biāo)本［4］。微柱凝膠法可適用于常規(guī)的抗體篩查，但該方法相對(duì)于其他兩種方法成本較高。凝聚胺法靈敏度高、價(jià)廉、快速，且操作簡(jiǎn)單方便，但是反應(yīng)溫度為室溫，因此無法排除室溫以下反應(yīng)的無臨床意義的冷抗體的干擾。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出微柱凝膠法靈敏度略優(yōu)于LIM抗人球法，凝聚胺法對(duì)有些血型系統(tǒng)靈敏度又高于其他兩種方法，對(duì)于Lewis血型系統(tǒng)凝聚胺法靈敏度明顯低于其他兩種方法。但是臨床上極少見到因Lewis抗體所致的溶血性輸血反應(yīng)，原因是a．Lewis抗原只是吸附在紅細(xì)胞上，且可以放散。b．供(受)者血漿中的可溶性Lewis抗原可中和受(供)者的循環(huán)抗體。除此以外，在生理的溫度下，大多數(shù)Lewis抗體不會(huì)廣泛地起反應(yīng)［5］。

綜上所述，筆者認(rèn)為應(yīng)該根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件選擇適當(dāng)?shù)目贵w篩選實(shí)驗(yàn)方法。對(duì)于基層實(shí)驗(yàn)室用凝取勝胺法進(jìn)行常規(guī)篩檢，遇到陽性標(biāo)本再用微柱凝膠法或LIM抗人球法復(fù)檢不失為一個(gè)較好的選擇。

值得注意的是，在抗體篩查試驗(yàn)陽性應(yīng)進(jìn)一步明確抗體的反應(yīng)特性比如反應(yīng)溫度范圍、是否激活補(bǔ)體等，判斷該抗體是否具有臨床意義。如果條件允許最好能鑒定抗體類型，區(qū)分是自身抗體、類抗體還是同種抗體，了解抗體的來源，為交叉配血提供詳細(xì)的資料。

1 Moise KJ．Red blood cell alloimmunization in pregnancy．JSemin Hematol，2005，42:169-178．

2 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部．臨床輸血技術(shù)規(guī)范．2000．106．

3 雷再芬．1501例預(yù)輸血者血清抗體篩選的臨術(shù)意義．中國(guó)基層醫(yī)藥，2010，17:639-640．

4 李勇主編．實(shí)用血液免疫學(xué)血型理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù)．北京:科學(xué)技術(shù)出版社，2006．595．

5 劉達(dá)莊主編．免疫血液學(xué)．第1版．上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，2002．77．