河北省2008年HIV-1感染者分子流行病學研究

李巧敏 趙宏儒 趙翠英 李保軍 苗香芬 路新利 胡園園 邢輝

HIV具有高度變異的生物學特性，使得其在傳播過程中產生了許多相對獨立的基因序列特征的組和亞型［1］，同時形成了特定地區或特定人群的不同亞型分布。為及時掌握河北省艾滋病病毒1型(HIV-1)的主要亞型類別和分布特點，監測不同人群中亞型毒株的分布和基因變異規律，對2008年新發現的HIV-1感染者開展HIV-1流行毒株亞型分布和變異情況研究，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在2008年新報告的HIV感染者中隨機抽樣64份，其中性傳播途徑44例(異性傳播14例，同性傳播30例)，血液傳播4例，吸毒傳播5例，不詳9例。

1.2 樣品采集與處理 在對2008年新發現的HIV感染者進行流行病學調查時，用真空抗凝采血管采取靜脈血，分離血漿和淋巴細胞富集液于－80℃備用。使用Qiagen公司QIAamp Viral RNA Mini Kit或Roche公司MagNA Pure LCsystem核酸自動提取儀按照說明書提取血漿樣本的病毒RNA。

1.3 HIV基因擴增和純化 擴增gag基因和env基因2個片段確定病毒基因型別。第一輪采用TaKaRa One Step RT-PCR試劑，第二輪PCR擴增基于Tiangen PCR Master Mix，按照試劑說明書操作。所用引物見表1。第二輪PCR產物經1%瓊脂糖凝膠電泳，用QIANGEN公司的QIAquick gel extraction kit，按照說明提純擴增的HIV-1 DNA片段。

內部控制環境是企業內部控制要素中的基礎環節，是保證內部控制順利實施的基本前提。企業要想營造完善的內部控制環境必須從內部控制制度框架的構建著手，以此為基礎，充分發揮內部控制環境的作用。例如：企業應將內部控制的理念灌輸到每一名員工的心中，將內部控制融入到企業的所有日常經營管理環節中，從而為內部控制的順利實施營造良好的環境，為內部控制的順利實施提供制度保障。再例如：作為企業的高層管理者必須結合自身的實際情況，高度關注并重新認識內部控制制度的重要性，并在企業內部成立合規的監察部門，實現對企業各個業務處理流程的動態化合規監察。另外，企業還必須站在全局發展的角度對內部控制的實施做一個整體規劃。

1.4 核苷酸序列測定 以提純的PCR產物為模板，測序引物用e7和GUX/GDX，用ABI公司3730型DNA全自動序列進行序列測定。

1.5 HIV-1亞型確定和系統進化樹分析 獲得的gag基因區和env基因區序列與HIV-1國際參考株比對后進行系統進化樹分析，分別確定不同基因的亞型，對于發現的新重組模式的序列進行重組斷點分析，結合2個基因片段的結果確定樣本亞型。用Los Alamos HIV database網站下載分型參考株序列。綜合分析獲得的gag基因區和env基因區的序列，與HIV-1國際參考株比對。用MEGA4.0軟件進行系統進化樹分析。分別確定不同基因的亞型，對于B/C重組亞型主要以gag基因判別。

表1 擴增的HIV-1基因片段和引物

2 結果

2.2 河北省HIV-1毒株系統進化樹分析 根據其gag和env基因片段，與HIV-1各個亞型國際參考株進行比對后構建系統進化樹，結果見圖1、2。

2.3 在本次流行病學調查中，采集血樣64份，獲得序列58份，共存在5種亞型。其中，B亞型為河北省HIV傳播的主要流行毒株，占43.1%(25/64)，主要分布于血液傳播途徑、性傳播途徑人群中;其次是CRF01-AE和CRF07-BC亞型毒株，各占25.9%(15/64)。CRF01-AE亞型毒株主要分布在同性傳播人群中，CRF07-BC亞型毒株的分布人群比較復雜，包括性傳播途徑、吸毒以及不詳等人群。具體亞型的分布情況見表2。

2.1 擴增結果 gag基因片段擴增陽性54份，占84.4%;env基因片段擴增陽性58份，占90.6%。其中，測序后獲得gag基因序列52條，env基因序列54條。

圖1 2008年河北省HIV env基因系統進化樹分析

圖2 2008年河北HIV gag基因系統進化樹分析

時值明治維新(1868年)，33歲的加藤由新政府重新任命為開成所教授職并。1869(明治2)年，34歲時就任大學大丞一職。1871(明治4)年成為文部大丞。其后數年間，數次被明治政府任官授職，但皆辭職。至1877(明治10)年，42歲時由文部大輔、田中不二麻呂被任為東京大學法學部、理學部、文學部的3學部綜理(起初，醫學部綜理是池田謙齋)。1881(明治14)年有所改正，加藤成為4學部的初代總理(從此年設置學部長一職，外山正一就任文學部長)。

卡夫卡父子關系的痛苦之處在于：卡夫卡無法成為父親，無法找到屬于自己的坐標，更不可能用父親的標準來衡量自己那個完全迥異的世界，而卡夫卡顯然一生都受困于此；父親的蠻橫無理擊潰了卡夫卡，以至于他認為一切困難都可以擊倒他；而父親粗暴的愛也并沒有教會卡夫卡責任和承擔，教會他勇敢地選擇并為之付出代價。卡夫卡無法在內心樹立起一個屬于自己的強大形象，并達到最終真正的成長。

表2 2008年河北省樣本亞型分布情況

3 討論

2008年河北省發現了5種HIV-1亞型毒株。其HIV-1流行毒株主要為B亞型毒株，占43.1%(25/64);其次是CRF01-AE和CRF07-BC亞型毒株，各占25.9%(15/64)。B亞型毒株主要分布于血液途徑傳播、性傳播途徑人群中;CRF01-AE亞型毒株主要分布在同性傳播人群中。性傳播人群中亞型種類比較復雜，除以 B亞型為主外，還發現 CRF01-AE、CRF07-BC、CRF08-BC和C四種亞型。2007年進行的HIV-1分子流行病學調查時，也是發現了此5種HIV-1亞型毒株，但是不同的是，5種HIV-1亞型毒株的比例發生了明顯的變化。2008年的HIV-1分子流行病學調查發現，B亞型毒株依然是主要的流行株，但是比例有所下降，CRF01-AE亞型毒株所占比例由29.4%降至25.9%。CRF-BC亞型毒株所占比例明顯上升，尤其是CRF07-BC亞型毒株，在2007年的全國HIV-1分子流行病學調查中僅有1例［2］，2008年上升至15例，所占比例由2.9%上升至25.9%。可以看出，CRF07-BC亞型毒株在我省近幾年開始普遍流行。可見，隨著HIV-1流行時間的推移和傳播途徑的多樣化，HIV-1流行的亞型比例在發生變化，人群分布也進一步復雜化。

我省血液途徑傳播的人群中主要流行B亞型，這與我國供受血感染者中以B亞型為主相一致。但是除在供受血感染者中存在外，性傳播途徑人群中也發現了B亞型毒株［3］。我國的CRF01-AE亞型從東南沿海省市向周邊迅速擴散，我省的CRF01-AE亞型在同性戀人群中蔓延迅速，比例增長明顯，應引起高度重視。同時CRF07-BC亞型比例的增加，說明HIV-1的感染途徑愈來愈多樣化［4］。由于HIV-1感染的血液傳播途徑基本已被控制，經性傳播途徑和母嬰傳播途徑感染的比例開始迅速上升。據此，我們今后的工作重點應適當轉移，大力宣傳，加強對高危人群干預和監測，采取綜合多樣措施，切實有效地預防艾滋病的傳播，控制經性傳播蔓延的趨勢。

1 Robertson D，Bradac J，Foley B，et al.HIV-1 nomenclature proposal.Science，2000，288:55-56.

2 趙翠英，邢輝，趙宏儒，等.河北省2007年HIV-1流行毒株基因序列測定及亞型分析.中華流行病學，2009，30:871-872.

3 潘曉紅，姚亞萍，夏時暢，等.浙江省2003-2005年HIV-1感染者分子流行病學研究.中國艾滋病性病，2007，13:308-310.

4 劉麗花，卜憲嶺，李衛紅，等.男性性行為人群HTV-I基因序列測定和亞型分析.河北醫藥，2010，32:287-288.