泉州市318例HIV抗體篩查陽性的確認(rèn)結(jié)果分析

楊育紅，陳杰毅，陳明春，劉建忠，吳幼玲

(福建省泉州市疾病預(yù)防控制中心，福建泉州 362000)

艾滋病是我國重點防治的重大傳染病，艾滋病檢測工作是艾滋病防治工作的基礎(chǔ)，包括HIV抗體檢測、HIV抗原檢測、核酸檢測、病毒載量測定、CD4細(xì)胞和CD8T淋巴細(xì)胞檢測等等，其中血清學(xué)HIV抗體的檢測是艾滋病檢測中最常用的方法，它是診斷艾滋病感染者和艾滋病的主要指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)檢測項目。因為HIV抗體是患者感染了HIV后最容易檢出并且持續(xù)時間最長的免疫標(biāo)志物，且抗體檢測的方法多種，大多簡單、經(jīng)濟便于廣泛推廣應(yīng)用。我國《艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》規(guī)定常規(guī)HIV抗體檢測的程序分為初篩(篩查和復(fù)檢)和確認(rèn)試驗。篩查及復(fù)檢試劑常用的是酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)和快速檢測試劑，如明膠顆粒凝集試驗(PA)、膠體金、膠體硒等，確認(rèn)試驗?zāi)壳皣鴥?nèi)常用的是免疫印跡試驗(WB)。本實驗室自2008年開展HIV抗體確認(rèn)工作以來，共對318例HIV抗體篩查陽性的標(biāo)本進(jìn)行WB確認(rèn)，為了解篩查陽性標(biāo)本與與確認(rèn)結(jié)果之間的關(guān)系，對確認(rèn)結(jié)果進(jìn)行如下分析。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2008年至2009年泉州市各篩查實驗室送檢的初篩陽性或可疑的標(biāo)本及我室自愿咨詢檢測初篩為陽性或可疑標(biāo)本，共318例。

1.2 方法與試劑 初篩實驗試劑采用：珠海麗珠試劑有限公司生產(chǎn)的HIV1/2酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)雙抗原夾心法和美國雅培生產(chǎn)的HIV1/2膠體硒試劑或廈門英科新創(chuàng)的膠體金診斷試劑。確認(rèn)試驗試劑為新加坡Genelabs公司生產(chǎn)的HIV-1/2免疫印跡試驗(Western blot)試劑。所有檢測試劑均在有效期內(nèi)并嚴(yán)格按照各自說明書操作。儀器采用奧地利Anthos公司生產(chǎn)的2010型酶標(biāo)儀，鄭州安圖生物的Anthos fluido型洗板機和MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司生產(chǎn)的Autoblot System 20全自動蛋白印跡儀。方法按 《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》(2004年)的要求，所有初篩陽性或可疑的標(biāo)本先用ELISA和金標(biāo)或硒標(biāo)復(fù)檢，復(fù)檢均陰性按陰性報，均陽性或一陰一陽進(jìn)一步用WB試劑確認(rèn)。

2 結(jié)果

2.1 318份篩查陽性標(biāo)本經(jīng)WB確認(rèn)后，227份確認(rèn)為HIV-1抗體陽性 (71.4%)，48份確認(rèn)為HIV-1抗體不確定 (15.1%)，43份確認(rèn)為HIV-1抗體陰性(13.5%)。

2.2 在227份WB確認(rèn)陽性標(biāo)本中，ELISA和硒標(biāo)或金標(biāo)的結(jié)果均為陽性，其中ELISA的S/CO值＞11的占98.2%，S/CO值在6～11之間占1.8%，即確認(rèn)陽性標(biāo)本中ELISA的S/CO值均＞6，見表1。

2.3 在48份不確定標(biāo)本中，45份ELISA陽性，占93.8%，S/CO值平均為 5.43，其中 S/CO值＞6占33.3%，結(jié)果見表1。48份標(biāo)本中7份硒標(biāo)或金標(biāo)陽性，其中有5份ELISA和硒標(biāo)或金標(biāo)均陽性。

2.4 在43份陰性標(biāo)本中，ELISA陽性35份，占81.4%，S/CO值平均為2.51，其中S/CO值＞6僅 2例，88.4%S/CO值＜4，見表1。43份中有8份硒標(biāo)或金標(biāo)陽性，無ELISA和硒標(biāo)或金標(biāo)均陽性的標(biāo)本。

表1 ELISA結(jié)果S/CO值與WB確認(rèn)結(jié)果的關(guān)系

2.5 在 WB確認(rèn)陽性標(biāo)本的條帶中，gp160、gp120、p66出現(xiàn)的百分率最高100%，其次是gp41、p31、p24， 為99.6%，p51為 97.8%， p17為 84.1%，p55最少50.7%。在不確定標(biāo)本中，p24出現(xiàn)的幾率最高，為85.4%，其次是gp160(58.3%)，與文獻(xiàn)報道的一致[1]。陰性標(biāo)本未出現(xiàn)任何條帶。結(jié)果見表2。

3 討論

表2 陽性和不確定WB試驗反應(yīng)條帶

隨著艾滋病檢測技術(shù)的發(fā)展，HIV篩查試劑的敏感性和特異性也在不斷提高，目前ELISA多使用的是第三代HIV診斷試劑，其敏感性和特異性已接近國際水平，但仍然會有假陽性、假陰性和抗體不確定的結(jié)果等情況出現(xiàn)。分析比較ELISA與WB確認(rèn)試驗結(jié)果，可見：確認(rèn)陽性標(biāo)本中的S/CO值較大，均大于6，而確認(rèn)陰性和不確定的標(biāo)本中S/CO值相對較低，由此可見高S/CO值預(yù)示HIV抗體陽性的可能性較大，而S/CO值較低時HIV抗體陰性及不確定的可能性較大,這與國內(nèi)的一些報道是一致的[2～3]。但也有部分(18份，占5.7%)S/CO值大于6的強陽性標(biāo)本,確認(rèn)結(jié)果為陰性和不確定，分析其原因，可能①酶免試劑盒問題，如原料和工藝問題，②標(biāo)本問題，可能由于一些傳染病病原體與HIV某些抗原決定簇有交叉反應(yīng)[4]③一些標(biāo)本存在溶血、脂血、微生物污染等現(xiàn)象，增大了HIV抗體假陽性率。

《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》規(guī)定，復(fù)檢要用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑重復(fù)檢測。我們用ELISA和快速診斷試劑復(fù)檢，結(jié)果為雙陽性的標(biāo)本，確認(rèn)試驗陽性符合率較高，達(dá)到97.8%(227/232)，其余2.2%確認(rèn)結(jié)果為不確定，陰性結(jié)果未出現(xiàn)雙陽性標(biāo)本，反映出ELISA試驗加快速試驗是較好的初篩復(fù)檢手段。

有文獻(xiàn)報道WB方法經(jīng)常出現(xiàn)可疑雜帶[5]，但往往是假可疑真陰性。Tebourski F等采用PCR技術(shù)證明，WB方法所檢出的可疑標(biāo)本應(yīng)該報為陰性[6]。Jackson JB等通過長期跟蹤隨訪WB方法所檢出的可疑標(biāo)本，未能發(fā)現(xiàn)其變?yōu)殛栃訹7]。本實驗室48份確認(rèn)結(jié)果為不確定的標(biāo)本中，出現(xiàn)的條帶多為p24和gp160，條帶多比較細(xì)，顏色較淺或位置不確定，48份標(biāo)本中有10份3個月后進(jìn)行了復(fù)檢，結(jié)果可疑條帶依然存在，并未衍生出多樣條帶，按《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》判定為HIV陰性。由于318份標(biāo)本中不確定占了48份(15.1%)，大量可疑標(biāo)本的存在首先給檢驗人員帶來了判斷困難，其次，篩查陽性確認(rèn)實驗可疑的檢測結(jié)果，使艾滋病流行病學(xué)調(diào)查隨訪和疫情管理變得復(fù)雜，也給被檢者帶來了嚴(yán)重的心理負(fù)擔(dān)，再者由于復(fù)檢也增加了檢測成本。因此①期待WB確認(rèn)試劑的質(zhì)量有進(jìn)一步的完善或有更有效、實用的HIV確認(rèn)實驗方法盡快出現(xiàn)，②通過輔助檢測幫助判斷，如核酸檢測，該法直接檢測HIV-1的核酸而非抗體，可以很好地解決抗體檢測的假陽性，③修改現(xiàn)行的WB試驗陽性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)。

鑒于目前HIV感染人數(shù)的不斷增加，以及隨著HIV傳播的加速和對HIV認(rèn)識的提高，對醫(yī)院患者、高危人群、HIV感染者以及艾滋病病人的檢查率也越來越高。面對如此大量的篩查以及檢測工作，必須有過硬的技術(shù)力量，完善的實驗室管理制度和質(zhì)量控制以及高敏感性和高特異性的檢測試劑作保障。因此，要不斷提高整體檢測能力，優(yōu)先選擇經(jīng)國家參比實驗室評估的、質(zhì)量優(yōu)秀的試劑盒，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化操作，保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確全面無誤，為艾滋病防治工作提供準(zhǔn)確科學(xué)的依據(jù)。

[1]黑發(fā)欣,張啟云,孫偉東,等.HIV抗體篩查實驗陽性確認(rèn)實驗可疑和陰性標(biāo)本的對比分析 [J].中國性病艾滋病防治.2006,12(2):4～6.

[2]鮑作義,李敬云,米獻(xiàn)淼,等.我國現(xiàn)行HIV檢測策略和方法的應(yīng)用評價[J].中國性病艾滋病防治,2001,7(5):304～305.

[3]李 宏,王 哲,馬麗萍,等.HIV抗體初篩與確認(rèn)(WB)測試結(jié)果對比分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2003,13(6):752～753.

[4]李敬云.艾滋病的病原學(xué)診斷[M].北京:軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院出版,1999:28.

[5]Srivastava BI,Gonzales C,Loftus R,et al.Examination of HTLV-ⅠELISA-positive leukemia/lymphoma patients by western blottinggave mostly negative or indeterminate reaction[J].AIDS Res HumRetroviruses,1990,6(5):617～1627.

[6]Tebourski F,Slim A,Elgaaied A.The significance of combining WorldHealth Organization and Center for Disease Control criteria to resolveindeterminate human immunodeficiency virus type-1Western blot re-sults[J].Diagn Microbiol Infect Dis,2004,48(1):59～61.

[7]Jackson JB,Hanson MR,Johnson GM,et al.Long-term follow-up of blood donors with in determinate human immunodeficiency virus type 1 results on Western blot[J].Transfusion,1995,35(2):98～102.