亞甲藍(lán)光化學(xué)法血漿病毒滅活對凝血因子Ⅷ的影響

房景霞 劉鑫 孫紹秋 李玉梅 房輝

輸注病毒滅活血漿成為目前國內(nèi)外預(yù)防輸注血漿制品傳播傳染病的有效措施。亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活病毒是最近幾年才發(fā)展起來的新技術(shù)，該法滅活血漿中病毒的效果已被證實(shí)，我國部分地區(qū)血站已廣泛推廣應(yīng)用。亞甲藍(lán)是一種染料，屬于吩噻嗪類藥物，是臨床上常用的解毒劑，主要用于治療亞硝酸鹽和氰化物中毒。它能與病原微生物核酸和蛋白質(zhì)結(jié)合，在適當(dāng)波長的熒光照射下，發(fā)生一系列光化學(xué)或光生物效應(yīng)導(dǎo)致病原體失活。滅活病毒的效果與亞甲藍(lán)濃度，光照溫度、時間、強(qiáng)度，血袋容量等因素有關(guān)。本血站自2009年6月末起，采用該法對血漿進(jìn)行病毒滅活，為了解病毒滅活后血漿中凝血因子Ⅷ的變化，以及該法影響凝血因子Ⅷ含量改變的因素，對病毒滅活前后的凝血因子Ⅷ的含量進(jìn)行檢測。

1 材料與方法

1.1 研究對象 隨機(jī)抽取唐山市中心血站2009年10至11月無償獻(xiàn)血全血標(biāo)本60份(400ml/份)，均于采血后6 h內(nèi)濾除白細(xì)胞，離心，制備成新鮮液體血漿(200ml/份)。將血漿無菌留樣2ml(Ⅰ組)，檢測其中的Ⅷ因子含量。另外無菌留取2ml血漿(Ⅱ組)不加亞甲藍(lán)，剩余的血漿加入亞甲藍(lán)，將它們均放入病毒滅活箱中滅活。

1.2 試劑與儀器 一次性使用去白細(xì)胞塑料血袋(山東威高集團(tuán)醫(yī)用高分子制品股份有限公司，批號:0908153，有效期:2011.07);一次性使用病毒滅活裝置配套用輸血過濾器(淄博中保康醫(yī)療器具有限公司，批號:20090626，有效期:2011.05);J6-MZ大容量低溫離心機(jī)(美國Beckman公司);HDME-1A型醫(yī)用病毒滅活箱(上海輸血技術(shù)有限公司);低溫血液濾器工作柜(天津市正源制冷設(shè)備有限公司LBC2-22);SE250型高頻熱合機(jī)(深圳達(dá)科為醫(yī)療器械有限公司);CompoDock型無菌導(dǎo)管連接器(德國);STatr4半自動血凝儀(法國Stago公司);乏Ⅷ因子血漿(批號:S302002，有效期:2012.02)、APTT試劑(批號:TE090722，有效期:2012.12)、CaCl2 試劑(批號:00806031，有效期:2012.12)、IBS 稀釋液(批號:S0903005，有效期:2012.12)均由德國Marbury公司生產(chǎn)。

1.3 新鮮血漿的病毒滅活處理 將血漿通過無菌導(dǎo)管連接器與一次性使用病毒滅活裝置配套用輸血過濾器連接，向血漿中加入亞甲藍(lán)，混勻后使其終濃度為1 μmol/L左右，將加入亞甲藍(lán)的血漿平放入病毒滅活箱中的擱架上進(jìn)行照射，擱架的擺動頻率為60次/min，光照強(qiáng)度為30000～38000 lux，溫度為2～8℃，照射時間為35min。在低溫血液濾器工作柜內(nèi)，溫度為2～8℃，將光照后的血漿通過病毒滅活過濾器濾除亞甲藍(lán)，混勻后無菌留樣2ml(Ⅲ組)。檢測Ⅱ、Ⅲ組血漿中的Ⅷ因子含量。

1.4 檢測方法 Ⅷ因子含量的檢測采用STatr4半自動血凝儀，嚴(yán)格按照凝血因子Ⅷ檢測試劑的說明書方法操作。

2 結(jié)果

Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組血漿Ⅷ因子水平分別為(0.86 ±0.02)、(0.81±0.02)、(0.78 ±0.02)U/ml，3 組血漿Ⅷ因子水平間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。

3 討論

臨床上不安全的輸血除了免疫的因素之外，主要是來源于病原微生物以及其代謝產(chǎn)物的污染，特別是病毒的傳播已經(jīng)對輸血的安全性構(gòu)成了肯定并且后果嚴(yán)重的威脅。國內(nèi)外的研究報道均證實(shí)大多數(shù)的輸血后病毒感染是由“窗口期”問題引起的。在美國90%以上的輸血傳播人類免疫缺陷病毒(HIV)和乙型肝炎病毒(HBV)以及75%以上的輸血傳播丙型肝炎病毒(HCV)的危險均是來自“窗口期”感染的獻(xiàn)血。目前國內(nèi)各采供血機(jī)構(gòu)按照衛(wèi)生部的要求只進(jìn)行乙肝表現(xiàn)抗原(HBsAg)、抗HCV、抗HIV，梅毒抗體等的檢測，并沒有要求對其他如人類嗜T細(xì)胞病毒(HTLV)、巨細(xì)胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)等病毒進(jìn)行檢測。此外，可能通過輸血傳播疾病的新病毒也在不斷的被發(fā)現(xiàn)，這些造成了不能完全的剔除血液中的病毒。因此，要從根本上控制和杜絕輸血傳播的病毒性疾病，除了要加強(qiáng)獻(xiàn)血者的篩查之外，還必須要對血液進(jìn)行病毒滅活處理，這樣才有可能達(dá)到輸血安全的目的。血液中的病毒滅活的方法有很多，亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿病毒是近幾年發(fā)展起來的新技術(shù)，可以使大多數(shù)的脂質(zhì)包膜病毒和部分的非脂質(zhì)包膜病毒滅活，特別是對HCV、HBV、HIV等病毒的滅活效果更是理想，是目前惟一獲準(zhǔn)用于臨床的光化學(xué)血漿病毒滅活的技術(shù)［1］。國內(nèi)的部分地區(qū)血站已經(jīng)廣泛推廣應(yīng)用。亞甲藍(lán)本身是治療氰化物、亞硝酸鹽、醌類、苯胺及硝基苯等所引起的高鐵血紅蛋白血癥的藥物，與臨床上亞甲藍(lán)的使用劑量相比，用于血漿病毒滅活的亞甲藍(lán)使用劑量(1 μmol/L即300μg/L)是極其微量的，只相當(dāng)于高鐵血紅蛋白血癥治療劑量的幾百分之一。因此，在毒理學(xué)上是安全的。光化學(xué)法滅活病毒的機(jī)理主要是依靠光敏劑在光照度條件下，產(chǎn)生自由基(一類機(jī)制)或者單線態(tài)氧(二類機(jī)制)氧化損傷病毒的分子結(jié)構(gòu)，從而達(dá)到殺滅病毒的效果，與此同時，也造成了血漿中活性成分的損傷。

在本實(shí)驗(yàn)中通過對隨機(jī)抽樣的30份亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿病毒的凝血因子Ⅷ的含量進(jìn)行了檢測，與未經(jīng)滅活處理的同份血漿(Ⅰ組)相比，滅活后的凝血因子Ⅷ的含量(Ⅲ組)有所下降，再次證明了亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿病毒在殺滅病毒的同時，會對血漿中的有效成分造成影響，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，Ⅷ因子的含量仍然符合國家的標(biāo)準(zhǔn)，與國內(nèi)外其他的實(shí)驗(yàn)所得的結(jié)果相似，說明光照滅活過程中的熱變性效應(yīng)是造成凝血因子Ⅷ含量變化的重要因素［2］。除了熱效應(yīng)和光化學(xué)反應(yīng)是凝血因子Ⅷ含量變化的重要影響因素之外，還與時間、溫度、耗材和測量的方法等諸多因素有關(guān)。目前對單一人份的血漿病毒滅活國內(nèi)外大多采用亞甲藍(lán)光化學(xué)法，其使病毒滴度減少的程度與所用的光照強(qiáng)度和亞甲藍(lán)濃度直接相關(guān)［3］。亞甲藍(lán)光化學(xué)法進(jìn)行血漿病毒滅活，對血漿中凝血因子Ⅷ含量無顯著影響，滅活過程中的熱效應(yīng)和光化學(xué)反應(yīng)是凝血因子Ⅷ含量改變的重要因素。

1 錢開誠.血液成分病毒滅活研究的進(jìn)展.中國輸血雜志，2004，17(增刊):36-38.

2 程玉根，柏則蓉，賈紅志.亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿病毒對血漿成分的影響.臨床血液學(xué)雜志(輸血與檢驗(yàn)版)，2007，4:169-170.

3 黃文杰，范恩勇，孫海英，等.亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活血漿對凝血因子的影響.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2006，22:2193.