血管內(nèi)皮生長因子C和survivin表達與賁門癌進展及預(yù)后的關(guān)系

于金海,徐越超,袁 蒙,陳 巖,何 亮,王大廣,所 劍

(吉林大學第一醫(yī)院胃結(jié)直腸外科,吉林長春130021)

胃癌是我國高發(fā)的惡性腫瘤之一,其主要的轉(zhuǎn)移途徑是經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移,賁門癌是胃癌的一個特殊類型,其發(fā)病率逐年增高[1],因此,探討與賁門癌進展及預(yù)后相關(guān)的因素對指導(dǎo)其綜合治療有重要意義。研究表明[2],血管內(nèi)皮生長因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)可以特異性地促進淋巴管生長,在腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移中起重要作用;腫瘤細胞通過逃避細胞凋亡而迅速增殖,生長素(survivin)是家族成員,它通過抑制凋亡因子caspase-3和caspase-7的活性而抑制細胞凋亡,促進細胞增殖。本研究旨在探討VEGF-C、survivin及相關(guān)臨床病理指標與賁門癌進展及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

2000年1月至2005年12月間,我院普通外科手術(shù)切除賁門癌蠟塊標本64例。男38例,女26例;年齡36-79(平均67)歲;全部為腺癌。所有患者均行根治性手術(shù);中位隨訪時間為45.5(4-90)個月。

1.2 主要試劑和方法

1.2.1 試劑 鼠抗人VEGF-C抗體和兔抗人survivin抗體。免疫組化染色采用SABC法。試劑均為美國Zymed公司進口產(chǎn)品,購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2.2 染色評價 (1)VEGF-C表達:胞漿內(nèi)或胞膜上染成棕黃色顆粒的細胞為陽性細胞,在400倍光學顯微鏡下至少計數(shù)200個腫瘤細胞,如標本的陽性腫瘤細胞數(shù)超過10%,則此標本定為VEGF-C陽性,如少于或等于10%則定為VEGF-C陰性;見圖1。(2)survivin表達:胞漿內(nèi)或胞膜上染成棕黃色顆粒的細胞為陽性細胞,在400倍光學顯微鏡下至少計數(shù)200個腫瘤細胞,如標本的陽性腫瘤細胞數(shù)超過10%,則此標本定為VEGF-C陽性,如少于或等于10%則定為VEGF-C陰性;見圖2。

1.3 統(tǒng)計學分析 χ2檢驗,分析賁門癌VEGF-C、survivin表達與臨床病理指標的關(guān)系。t檢驗和方差分析(ANOVA)檢驗VEGF-C表達與和LMVD之間的相關(guān)關(guān)系。Kaplan-Meier法評估術(shù)后生存率,繪制生存曲線,采用log-rank檢驗分析兩生存曲線之間的關(guān)系。統(tǒng)計學軟件采用SPSS10.0。

2 結(jié)果

2.1 VEGF-C及survivin表達情況,VEGF-C表達和survivin表達的關(guān)系

VEGF-C陽必表達率為60.9%(39/64);survivin陽必表達率為54.7%(35/64)。VEGF-C表達陽性組survivin陽性表達率84.6%,高于survivin表達陰性組的8.0%。VEGF-C與survivin呈正相關(guān)性(P=0.003 05)。兩者表達分布關(guān)系見表1。

表1 64例賁門癌患者VEGF-C及survivin表達分布關(guān)系

2.2 VEGF-C和survivin與賁門癌臨床病理指標之間的關(guān)系

VEGF-C和survivin與賁門癌臨床病理指標之間的關(guān)系見表2。表2顯示,VEGF-C的表達與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期相關(guān);survivin的表達與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期相關(guān)。

表2 VEGF-C和survivin與64例賁門癌患者臨床病理指標之前的關(guān)系

2.3 VEGF-C、survivin與賁門癌的預(yù)后關(guān)系

25例VEGF-C陰性患者3年或5年生存率分別為70%和64%,39例VEGF-C陽性患者則分別為48%和35%;VEGF-C陽性組患者的生存率明顯低于陰性組患者(P=0.0213)。29例survivin陰性組患者的3年和5年生存率為73%和61%,35例survivin陽性組患者則分別為51%和34%;survivin陽性組患者的生存率明顯低于survivin陰性組患者(P=0.002 26)。見圖3。

圖1 VEGF-C在賁門癌中的表達

圖2 survivin在賁門癌中的表達

圖3 不同VEGF-C和survivin表達的賁門癌患者生存曲線

3 討論

胃癌是消化道常見的惡性腫瘤之一,其中賁門癌占16%[3],由于其解剖位置特別,其生物學特性及轉(zhuǎn)移亦較特殊,淋巴道轉(zhuǎn)移仍然是其主要轉(zhuǎn)移途徑。研究表明,血管內(nèi)皮生長因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C),有特異性促進淋巴管生成的作用,近年越來越引起人們的關(guān)注。Jeltsch等在過度表達VEGF-C的轉(zhuǎn)基因鼠的真皮層有大量擴張的淋巴管[4]。Skobe等[5]將轉(zhuǎn)染VEGF-C基因的MDA-MB-453/GFP人乳腺癌細胞注射于裸鼠腳墊,發(fā)現(xiàn)瘤內(nèi)新生淋巴管明顯增加,分化良好且與對照組有明顯差異,瘤內(nèi)淋巴管與瘤周相連。Ohta等[6]發(fā)現(xiàn)在惡性間皮瘤中瘤細胞VECF-C的表達與瘤內(nèi)及瘤周淋巴管數(shù)量明顯相關(guān)。Yonemura等[7]用RT-PCR和免疫組化法研究了胃癌中VEGF-C表達,發(fā)現(xiàn)多數(shù)侵入淋巴管的腫瘤細胞VEGF-C表達陽性,VEGF-C表達與淋巴結(jié)狀態(tài),淋巴管侵犯、腫瘤浸潤方式明顯相關(guān)。用原位雜交法研究一組黑色素瘤VEGF-C mRNA表達,發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)陽性組VEGF-C mRNA表達明顯高于淋巴結(jié)陰性組[6]。在一組前列腺癌和一組食管鱗癌的研究中也有類似發(fā)現(xiàn)[8,9]。我們研究發(fā)現(xiàn),賁門癌VECF-C表達率為60.9%,VECF-C陽性組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于VECF-C陰性組,提示VEGF-C促進了腫瘤淋巴系統(tǒng)播散。這與國外學者研究結(jié)論是一致的。

凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis,IAPs)是一類高度保守的抗凋亡基因表達產(chǎn)物,廣泛存在于各種惡性腫瘤細胞中,對凋亡調(diào)控發(fā)揮著重要的作用。survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成員,基因全長15 kb,有4個外顯子和3個內(nèi)含子,定位于人染色體17q25。此外,survivin的表達還具有細胞周期依賴性,特異性地在G2/M期表達,通過與細胞有絲分裂紡錘體的微管結(jié)合,參與對細胞基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。survivin表達于胚胎組織,而不見于終末分化的成熟組織,但在人類大多數(shù)的腫瘤組織和轉(zhuǎn)化細胞中大量表達。Kawasaki[10]等報道survivin與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。他們發(fā)現(xiàn)survivin在胃癌的陽性表達率為53.2%,癌旁及正常組織無表達。而Leung,Krieg[11]等研究發(fā)現(xiàn)survivin的表達水平與胃腺癌的病理演變有關(guān)。

survivin與VEGF關(guān)系密切,VEGF在血管生成中的抗凋亡作用可以通過誘導(dǎo)survivin的表達來實現(xiàn)[12]。而survivin的上調(diào)是內(nèi)皮細胞在血管生成過程中維持生存能力的必要條件。survivin通過促進血管內(nèi)皮細胞增殖和三維毛細血管網(wǎng)的形成,參與腫瘤新生血管的形成過程。VEGF促進survivin的表達而同時高表達的survivin又維持和保護了VEGF-C的促內(nèi)皮細胞功能,從而促進了腫瘤血管生成和浸潤轉(zhuǎn)移。survivin是血管形成中生長因子誘導(dǎo)的保護性基因,維持血管內(nèi)皮細胞的正常增殖。survivin不僅可以抑制腫瘤細胞的凋亡,而且可以抑制腫瘤血管內(nèi)皮細胞凋亡。促血管因子VEGF在腫瘤細胞中高表達,不僅直接促進血管形成,還可以誘導(dǎo)survivin表達,產(chǎn)生抗凋亡作用,引起血管過度增生。因此,二者共同作用,促進血管形成并有可能引起腫瘤轉(zhuǎn)移。

本研究中64例賁門癌VEGF-C陽性表達為39例,這些病例中survivin陽性33例,且二者之間有正相關(guān)性。進一步研究發(fā)現(xiàn),二者與賁門癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中,二者均是高表達,從上述情況中可以推測,.survivin與VEGF-C關(guān)系密切,是否存在survivin表達,產(chǎn)生抗凋亡作用,同時引起淋巴管過度增生,二者共同作用,促進賁門癌通過淋巴道轉(zhuǎn)移,這尚需要進一步研究證實。

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