銀線草的揮發油成分研究

初洪波,張 玲,張 瑜,赫玉芳

(吉林天藥現代中藥科技有限公司,吉林長春130012)

銀線草是金粟蘭科植物銀線草 (Chloranthus japonicus Sieb)的干燥全草,又名鬼督郵 (《本草經集注》)、獨搖草 (《唐本草》)和四塊瓦 (《廣西中藥志》)[1]。其味辛、苦,性溫,有毒,功能祛風除濕、散寒止痛、活血消腫[2]。銀線草的天然植物資源極為豐富,主要分布于我國黑龍江、吉林、河北、甘肅等省份。

超臨界流體萃取技術(supercritical fluid extraction,SFE)是近年來迅速發展的一種新型分離技術。CO2作為最常用的超臨界流體,具有操作溫度低、分離效率高,無毒、無溶劑殘留、無二次污染等優點,非常適合中藥有效成分的提取分離[3-7]。本文首次應用超臨界CO2萃取技術提取銀線草揮發油,利用毛細管氣相色譜-質譜法對其化學成分進行了定性定量分析。

1 儀器與材料

銀線草全草經吉林省中醫藥科學院嚴仲凱研究員鑒定為金粟蘭科植物銀線草(C.japonicus)的干燥全草;HA221-50-06型超臨界流體萃取裝置(江蘇南通華安超臨界萃取有限公司);HP6890A-5973型氣相色譜質譜聯用儀(美國Agilent科技有限公司);He(純度99.999%),CO2(純度99.9%)均由長春市光機氣體有限公司提供;乙醚,乙酸乙酯(分析純,北京化工廠)。

2 方法

2.1 揮發油的制備 銀線草藥材粉(通過20目篩)200 g,加入萃取釜,先靜態萃取30 min,后動態萃取90 min,從出口閥接物料,獲得萃取物,萃取條件見表1。

表1 超臨界CO2流體萃取條件

2.2 GC-MS分析測試條件[8]美國HP6890A-5973氣相色譜質譜儀聯用儀,G1701BA化學工作站數據處理系統。HP-1(30 m×0.25 mm,0.25 μ m)彈性石英毛細管柱;載氣為高純氦氣,載氣流量1.0 mL/min;進樣口溫度280℃;分流比50∶1;升溫程序:起始柱溫60℃,維持3 min,再以6℃/min升溫至300℃;離子源為EI源,離子源溫度200℃;接口溫度280℃;連接桿溫度200℃;電離電壓70 eV;發射電流34.6A;掃描范圍m/z 20～500,掃描速度2000 amu/s。

2.3 供試樣品的制備 超臨界萃取所得的總揮發油粗品,用10倍量的水稀釋,用相同體積的乙醚萃取5次,合并乙醚液,無水硫酸鈉脫水,低溫揮干乙醚,得到淡黃色透明油狀物,4℃密封保存備用。取少量揮發油提取物,用乙酸乙酯溶解,過0.45 μ m濾膜得供試品。

2.4 揮發油化學成分分析 揮發油供試樣品,用氣相色譜-質譜聯用儀進行分析鑒定。通過G1701BA化學工作站數據處理系統,檢索NIST98譜圖庫,并分別與八峰索引及EPA/NIH質譜圖集的標準譜圖進行對照、復合,再結合有關文獻進行人工譜圖解析,確定揮發油中的各個化學成分。按峰面積歸一化法進行定量分析,分別求得各化學成分在銀線草揮發油中的相對百分含量。

3 結果

對銀線草揮發油的GC-MS分析,測得揮發油氣相色譜共有62個峰,總離子色譜圖,共鑒定出34個化合物,利用面積歸一法計算各化合物相對含量,已鑒定化合物含量占總揮發油的81.38%,化學成分及相對含量結果見表2。

表2 銀線草揮發油化學成分及其含量

4 討論

分析結果表明,銀線草揮發油化學成分以亞油酸(相對含量為 30.490%),十六烷酸(19.096%),γ-谷甾醇(7.086%),9,12,15-十八碳三烯-1-醇(4.605%),反油酸(3.028%)為主,占總揮發油成分的64.31%。在檢測的化合物中,醇類化合物占總揮發油的16.33%,酸類化合物占 54.31%,酯類化合物占6.59%。經文獻檢索,所有化合物均首次從該植物中檢出。銀線草所含亞油酸、反油酸等不飽和脂肪酸占銀線草揮發油成分含量的33.52%。現代研究認為,不飽和脂肪酸通過與腫瘤細胞膜結合,使腫瘤細胞膜上的脂肪酸組成發生改變,破壞了腫瘤細胞膜結構,以致腫瘤細胞完全崩解;不飽和脂肪酸還可以通過影響免疫細胞的結構和功能來發揮免疫功能。所以,在抗腫瘤治療時,不飽和脂肪酸除了殺傷腫瘤細胞外,還能使病人的免疫功能不受影響[9]。其中,亞油酸是人體所必需的兩種脂肪酸之一,能夠抑制膽固醇的吸收,促進體內多余的膽固醇分解為膽酸從而降低血液中的膽固醇濃度,提高血管壁的彈性,預防動脈粥樣硬化。

銀線草揮發油中還含有部分微量物質,其生理功能亦是不容忽視。如欖香烯是非細胞毒性的廣譜抗癌物質,可以逆轉腫瘤細胞的耐藥性,有效地控制惡性胸腹腔積液[10];而花生酸產生的血栓素A2則具有極強的收縮血管和血小板聚集作用[11]。

總之,從不飽和脂肪酸含量與醫療保健方面考慮,銀線草揮發油成分有很高的開發利用價值。該研究結果為進一步對銀線草的開發和利用提供了可靠的實驗數據和理論依據。

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