五味子制劑提取工藝研究

程麗梅,于秀華,付 春,張永和

(1.長(zhǎng)春市人民醫(yī)院,吉林長(zhǎng)春130061;2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,吉林長(zhǎng)春130021)

五味子是民間常用的中藥,具收斂固澀,益氣生津,補(bǔ)腎寧心功效,藥用價(jià)值較高。其主要化學(xué)成分為木脂素、揮發(fā)油、苯甲酸等。本文以五味子醇中含量為指標(biāo),采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法,研究五味子軟膠囊提取的最佳工藝。

1 儀器與材料

1.1 藥材 五味子:經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院新藥中心鑒定符合《中國(guó)藥典》2005年版一部[2]的規(guī)定,為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果實(shí)。

1.2 儀器 LC-20AT型高效液相色譜儀(日本島津),SPD-10Avp紫外檢測(cè)器,UV-3000型紫外分光光度儀。

1.3 試藥 五味子醇甲對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào):857-200102及110857-200406,供含量測(cè)定用),甲醇為色譜純,水為重蒸餾水,其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 原料的篩選 五味子全果50 g,用水冷浸,挫去果肉,分出種子,干燥,分別稱定種子和果肉重量,另取五味子全果50 g,將上述3種藥材分別搗碎,過(guò)20目篩,加3倍體積的乙醇加熱回流3次,每次2 h,過(guò)濾,提取液適當(dāng)濃縮,定容于50 mL量瓶中,加乙醇至刻度,搖勻,精密吸取各提取液1～25 mL量瓶中,加乙醇至刻度,搖勻,即得。采用高效液相色譜法測(cè)定各提取物中五味子醇甲的含量。

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取五味子醇甲對(duì)照品約10 mg,精密稱定為 13.16 mg,置10 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取1 mL,置10 mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得(每1 mL含五味子醇甲0.1316 mg)。

2.1.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-水(65∶35)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2.1.3 線性關(guān)系的考察 精密吸取對(duì)照品溶液2,5,10,15,20,25 μ L按上述色譜條件分別注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積,則回歸方程為:Y=2008655.21X-21546.49,γ=0.9999,線性范圍:0.2632～ 3.290 μ g。

2.1.4 供試品溶液的制備 取上述3種粉末各約0.25 g,分別精密稱定,置20 mL量瓶中,加甲醇約18 mL,超聲處理(功率 250 W,頻率 40 kHz)20 min,取出,加甲醇至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

2.1.5 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ L,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。因此五味子軟膠囊的原料采用五味子的種子。

2.2 以五味子醇甲含量為指標(biāo)優(yōu)選最佳工藝 采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選乙醇回流提取最佳工藝。考查指標(biāo):出膏率和五味子醇甲含量。考查因素:按L9(34)正交試驗(yàn)表(表1)試驗(yàn)條件進(jìn)行乙醇回流提取,濾過(guò),濃縮,分別定容于50 mL量瓶中,作為樣品溶液。

分別精密量取定容后的1～9號(hào)醇提樣品溶液各1 mL,置5 mL量瓶中,分別加適宜溶劑稀釋至刻度,搖勻,即得。分別精密吸取2.1.1項(xiàng)下的對(duì)照品溶液與上述供試品溶液各10 μ L,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得(見(jiàn)表1-表3)。

表1 L9(34)正交試驗(yàn)因素水平表

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析表

查表得F0.05(2,2)=19.00,F0.01(2,2)=99.00,因此B(回流次數(shù))、D(加醇量)因素有極顯著性,且B3＞B2＞B1,D3＞D2＞D1,A因素(乙醇濃度)、C因素(回流時(shí)間)無(wú)顯著性,且A3＞A1＞A2,C3＞C1＞C2。即乙醇濃度、回流時(shí)間對(duì)該試驗(yàn)無(wú)多大影響。考慮到實(shí)際生產(chǎn)成本及實(shí)際生產(chǎn)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),確定最后工藝為:A2B3C3D3,即用6倍量90%乙醇,回流提取3次,時(shí)間為2,2,1 h。

2.3 最佳工藝的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 為考察上述最佳工藝的可靠性,按該工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),并按照前面實(shí)驗(yàn)的方法測(cè)定樣品中五味子醇甲的含量,分別為16.2,16.6,15.8 mg/g生藥。測(cè)定結(jié)果說(shuō)明,該工藝重復(fù)性好,確實(shí)為最佳的提取工藝。

3 小結(jié)

五味子提取工藝考察指標(biāo)有采用紫外分光光度法測(cè)定五味子醇甲[1],或采用高效液相色譜法測(cè)定五味子甲素含量的[2],本實(shí)驗(yàn)參照中國(guó)藥典[3]采用高效液相色譜法測(cè)定五味子醇甲含量,提高了實(shí)驗(yàn)精度。

[1]可成友,譚鳳華,邊薔,等.正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化五味子醇甲的提取工藝研究[J].山西中醫(yī),2009,25(4):40.

[2]潘新,劉霞,蔡敏芝.五昧子中五味子甲素的提取工藝研究[J].中成藥,2006,30(6):附2.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:44.