液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)中藥降壓制劑中摻入的尼群地平

魏 莉，張西如，高燕霞

（1.河北省食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)中心，河北 石家莊 050091； 2.河北省藥品檢驗(yàn)所，河北 石家莊 050011）

尼群地平（nitrendipine）為選擇性作用于血管平滑肌的鈣離子拮抗劑，能降低心肌耗氧量，對(duì)缺血性心肌有保護(hù)作用，可降低總外周阻力，使血壓下降，適用于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病和高血壓病的治療。近年來市場上出現(xiàn)在中藥降壓制劑中非法添加尼群地平的情況，患者在不知情的情況下長期、大量服用此類所謂的純中藥制劑極易造成生命危險(xiǎn)，因此有必要建立靈敏、可靠的分析方法對(duì)此進(jìn)行鑒定。筆者采用液相色譜及直接電噴霧串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用法，可以快速、準(zhǔn)確地對(duì)中藥降壓制劑中是否非法摻有尼群地平作出判斷。

1 儀器與試藥

LC-20AD型液相色譜儀（日本島津）；API 3200型質(zhì)譜儀（美國AB公司）；BP 211D型電子天平。尼群地平對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100585-200602）；標(biāo)有“純中藥制劑”的降壓樣品（河北省藥品檢驗(yàn)所市場抽樣品）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 液相色譜條件

色譜柱：Venusil MP C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.01 mol/L醋酸銨 -乙腈（45∶55）；檢測(cè)波長：200～400 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 質(zhì)譜、質(zhì)譜-質(zhì)譜條件

液相色譜條件：流動(dòng)相為乙腈-水（60∶40）；流速為0.5mL/min；進(jìn)樣量為 5 μL。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子化正離子檢測(cè)方式（ESI+）；質(zhì)荷比范圍為100～600；離子源電壓為5 000 V；霧化氣和加熱輔助氣均為10 L/min的高純氮?dú)猓粴夂煔鉃?0 L/min的壓縮空氣；離子源溫度為400℃。

質(zhì)譜-質(zhì)譜條件：錐孔電壓為10 V；去簇電壓為65 V；碰撞能量為25 V；檢測(cè)方式為全掃描一級(jí)質(zhì)譜、選擇離子二級(jí)全掃描質(zhì)譜。

2.3 溶液制備

精密稱取尼群地平對(duì)照品10 mg，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得貯備液；精密量取3 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取樣品20粒，精密稱定，將內(nèi)容物傾出，混勻，精密稱取2粒的量置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲溶解10 min，放至室溫，加流動(dòng)相至刻度，用0.45 μm的濾膜濾過，精密量取濾液3.0 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.4 尼群地平對(duì)照品的色譜、光譜及質(zhì)譜行為

采用正離子檢測(cè)方式對(duì)尼群地平對(duì)照品溶液進(jìn)行高效液相色譜、質(zhì)譜和質(zhì)譜-質(zhì)譜分析，結(jié)果保留時(shí)間為7.8 min，準(zhǔn)分子離子[M+H]+峰即 m/z為 361；對(duì) m/z為361的峰進(jìn)行二級(jí)全掃描質(zhì)譜分析，產(chǎn)生的主要碎片離子有 m/z 315.2，329.2，推測(cè)其質(zhì)譜裂解途徑如圖1所示。

2.5 供試品的定性檢測(cè)

圖1 尼群地平的電噴霧四級(jí)桿質(zhì)譜結(jié)構(gòu)式裂解圖

在相同的色譜及質(zhì)譜條件下，對(duì)樣品的乙醇提取液進(jìn)行高效液相色譜、質(zhì)譜和質(zhì)譜-質(zhì)譜分析。結(jié)果在樣品中檢測(cè)到尼群地平的準(zhǔn)分子離子，即 m/z為361；對(duì) m/z為361的峰進(jìn)行二級(jí)全掃描質(zhì)譜，產(chǎn)生與尼群地平對(duì)照品完全一致的碎片離子，且紫外光譜、保留時(shí)間均與尼群地平對(duì)照品相同，色譜見圖2-4。結(jié)合紫外光譜、液相色譜保留時(shí)間、準(zhǔn)分子離子和二級(jí)質(zhì)譜裂解碎片4方面的信息，可以判定所測(cè)中藥降壓制劑中非法添加了尼群地平。

圖2 紫外光譜圖

圖3 高效液相色譜圖

圖4 二級(jí)質(zhì)譜圖

3 討論

中藥降壓制劑通常含多味中藥，每味中藥又含有多種化學(xué)成分，因此在含量測(cè)定時(shí)對(duì)分析方法的選擇提出了更高的要求。筆者所采用的串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜法，可以通過對(duì)質(zhì)荷比的篩選獲得復(fù)雜基質(zhì)中單一組分的色譜圖，不需要實(shí)現(xiàn)其與干擾組分間完全的色譜分離；同時(shí)，通過二級(jí)質(zhì)譜分析，還可以對(duì)待測(cè)物進(jìn)行結(jié)果確證，以保證藥物定性分析結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠，操作更為簡便、快速。將液相色譜的高分離技術(shù)和質(zhì)譜的高選擇性相結(jié)合，大大提高了檢測(cè)方法的專屬性和靈敏度，這對(duì)于控制中藥降壓制劑的質(zhì)量、保證臨床用藥的安全性具有現(xiàn)實(shí)意義。

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