內皮素在梗阻性黃疸大鼠腎損傷中的作用及丹參的影響

秦琦瑜 李勇 陳進軍 范立僑 張慶富 趙群 陳虎 石鑫 王威

梗阻性黃疸(obstructive jaundice，OJ)患者術后易并發急性腎衰竭。OJ引起腎功能損害的原因是多方面的，目前認為微循環障礙及一些炎性介質可能起重要作用。內皮素(ET－1)是極強的縮血管活性因子，常導致臟器微循環障礙［1］，而丹參常用于防治與微循環障礙相關的疾病。本實驗復制大鼠OJ模型，通過觀測OJ大鼠血漿ET－1及腎皮質微循環的變化，探討OJ腎損傷的機制及丹參的治療作用。為臨床防治OJ引起的腎損害提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗對象及分組 雄性健康SD大鼠90只(河北醫科大學實驗動物中心提供)，體重(210±30)g。隨機分為假手術組(SO組)，膽總管結扎組(BDL組)，丹參干預組(SM組)，每組又分為3、7、10 d 3個時相，每個時相10只。

1.2 實驗儀器及藥品 WX－9型微循環顯微鏡及其微循環圖像分析系統，WX恒溫恒濕灌流系統，均為徐州光學儀器總廠產品。2%戊巴比妥鈉注射液(丹參注射液，正大青春寶藥業)。ET－1試劑盒，由解放軍總醫院科技開發中心放免所提供。

1.3 模型建立 術前禁食12 h，自由飲水，予2%戊巴比妥鈉注射液，0.25 ml/100 g腹腔注射麻醉，自上腹正中切口進腹。SO組僅分離膽總管，不結扎;BDL、SM組在分離膽總管后，于膽總管中上段用0號絲線雙重結扎，然后關腹。3組大鼠從手術當日開始，每日腹腔內注射藥物干預至預設定時相的前1 d。SO、BDL 2組注射0.9%氯化鈉溶液，0.5 ml/100 g，SM組大鼠注射丹參注射液(0.5 ml/100 g)，1次d。

1.4 腎皮質微循環觀測 3組在相應時相點，按上述方法麻醉后，右肋緣下斜切口開腹，暴露右腎，稍加以分離，溫0.9%氯化鈉溶液持續灌注右腎表面，溫度23～25℃，室內濕度維持在29%～31%。用WX－9型微循環顯微鏡及其微循環圖像分析系統，觀測右腎皮質微血管的管徑。

1.5 血指標檢測 血清總膽紅素(TB)，尿素氮(BUN)，肌酐(Cr)，使用全自動生化分析儀測定。ET－1采用放射免疫分析法測定，按照說明書操作。

1.6 統計學分析應用SPSS 11.5統計軟件，計量資料以表示，采用t檢驗或方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清膽紅素測定 BDL、SM組血清總膽紅素水平明顯高于SO組，差異有統計學意義(P＜0.05)。BDL組TB水平隨膽總管結扎時間延長而增高明顯(P＜0.05)。見表1。

表1 3組不同時相TB水平比較 μmol/L，

表1 3組不同時相TB水平比較 μmol/L，

注:與SO組比較，*P ＜0.05;與3 d比較，#P ＜0.05;與7 d比較，△P ＜0.05

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2.2 ET－1的測定 與SO組比較，BDL組各時相ET－1水平顯著升高(P＜0.05)。BDL組ET－1水平隨著膽總管結扎時間的延長升高更加明顯(P＜0.05)。與BDL組比較，SM組各時相的ET－1水平顯著降低(P ＜0.05)。見表2。

表2 3組不同時相血漿ET－1水平比較 pg/ml，

表2 3組不同時相血漿ET－1水平比較 pg/ml，

注:與SO組比較，*P ＜0.05;與BDL組比較，#P ＜0.05;與3 d比較，△P ＜0.05;與7 d比較，☆P ＜0.05

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2.3 腎皮質微血管管徑的觀測 與SO組比較，BDL組各時相微血管管徑變小，差異有統計學意義(P＜0.05)。BDL組隨著膽總管結扎時間的延長管徑變小更加明顯(P＜0.05)。與BDL組比較，SM組3 d無明顯變化，7、10 d微血管管徑增大(P＜0.05)。見表3。

表3 3組不同時相腎皮質微血管管徑比較 μm，

表3 3組不同時相腎皮質微血管管徑比較 μm，

注:與SO組比較，*P ＜0.05;與BDL組比較，#P ＜0.05;與3 d比較，△P ＜0.05;與7 d比較，☆P ＜0.05

組別 3 d(n=10) 7 d(n=10) 10 d(n=10)SO組11.6±1.1 11.2±1.5 11.7±2.1 BDL組 10.3±2.3* 8.8±2.1*△ 7.5±1.9*☆SM組 10.3±3.7 10.6±2.9# 11.2±3.3#

2.4 血清BUN測定 與SO組比較，BDL組3 d無明顯變化，7、10 d BUN水平升高(P＜0.05)。BDL組隨著膽總管結扎時間的延長BUN水平升高(P＜0.05)。與BDL組比較，SM組3、7 d無明顯變化(P ＞0.05)，10 d BUN水平下降(P ＜0.05)。見表4。

表4 3組不同時相血清BUN水平比較 mmol/L，

表4 3組不同時相血清BUN水平比較 mmol/L，

注:與SO組比較，*P ＜0.05;與BDL組比較，#P ＜0.05;與3 d比較，△P ＜0.05;與7 d比較，☆P ＜0.05

組別 3 d(n=10) 7 d(n=10) 10 d(n=10)SO組6.2±0.5 6.3±0.9 5.8±0.6 BDL組 5.9±0.8 8.3±1.2*△ 10.9±1.3*☆SM組 6.4±0.8 7.8±1.0 8.7±1.2#

2.5 血清Cr測定 與SO組比較，BDL組3 d無明顯變化，7、10 d Cr水平升高(P＜0.05)。BDL組隨著膽總管結扎時間的延長Cr水平升高(P ＜0.05)。與BDL組比較，3、7 d無明顯變化(P＞0.05)，SM組10 d Cr水平下降(P ＜0.05)。見表5。

表5 3組大鼠不同時相血清Cr水平比較

3 討論

OT常引起諸多臟器、組織不同程度的損害，OJ患者術后腎功能損害較常見，研究發現許多因素參與OJ后腎損害的發生，如:循環血量不足，腎血流量減少，血漿內毒素水平升高，高膽紅素血癥等。并認為內毒素很可能通過ET的介導而致肝腎功能損害。Foitzik等［2］發現ET可使水腫性胰腺炎小鼠血管收縮、胰腺毛細血管血流量減少，說明ET是促進微循環衰竭的重要因子。臟器微循環障礙可以導致機體相應組織器官有效血液灌流不足，缺血、缺氧，出現功能紊亂和形態學改變。

本實驗結果顯示:BDL組3 d后血漿ET－1含量即升高，隨著膽道梗阻時間的延長ET－1呈進行性升高，并且腎皮質微血管收縮，管徑變小，OJ 7、10 d后反映腎功能的重要指標血清BUN、Cr水平升高，腎功能受損。ET－1的升高與TB、腎皮質微血管的管徑變化及腎功能改變呈同步趨勢。提示血漿ET－1水平升高及腎皮質微循環障礙，可能是OJ時腎功能損害的重要因素。以往也有實驗顯示OJ時血漿、腎組織中ET－1含量明顯升高［3］，肝內 ET－1含量也明顯升高，且與肝臟損害成正相關［4］。可能是OJ時血液中的高結合膽紅素、內毒素及手術因素共同作用使ET－1含量升高。其中內毒素可以在ET－1 mRNA的轉錄和翻譯水平直接調節ET－1的合成和釋放［5］。也有學者認為某些膽鹽成分刺激血管內皮細胞和腎內毛細血管可以使ET－1合成與釋放增多。ET－1是目前發現的作用最強和作用時間最持久的內源性縮血管活性肽［2］，通過作用于血管平滑肌的ET－1受體，誘導細胞外鈣離子內流，導致細胞內鈣超載引起血管強烈收縮。根據本實驗結果推斷OJ時腎皮質微血管收縮可能與ET－1水平升高有密切關系。造成OJ時腎皮質微血管強烈收縮，微循環障礙，從而影響腎皮質的血液灌注，加上手術失血等因素，腎臟缺血、缺氧致腎臟損傷。

丹參注射液可以降低腸道通透性，減少內毒素和細菌移位，降低血內毒素水平。抑制氧化酶活性，減輕氧自由基脂質過氧化作用。能夠抑制ET－1的合成。研究證明丹參與生脈聯合應用可明顯降低 OJ患者術后內毒素、ET－1水平［6］，其機制可能與丹參和生脈注射液能抑制和抵抗內毒素，進而降低內毒素誘導的ET升高有關。丹參治療急性胰腺炎，胰腺ET－1 mRNA表達明顯下調，血中ET－1水平顯著降低，說明丹參注射液通過抑制ET－1 mRNA過度表達，減少ET－1的大量生成，從而發揮其保護作用［7，8］。以上研究均證實丹參可以降低血漿ET－1水平，與本實驗結果一致。本實驗中給予丹參注射液治療3 d后，OJ大鼠血漿ET－1水平即開始下降，各時相ET－1水平與膽總管結扎組比較均明顯降低，7、10 d后腎皮質微血管擴張、管徑增大，血清BUN、Cr水平明顯降低，腎功能指標顯著改善。說明丹參注射液能夠降低OJ大鼠血漿ET－1水平，擴張腎皮質微血管、改善腎皮質微循環，進而改善腎功能。本實驗提示丹參注射液對OJ引起的腎損害具有保護作用。

1 周曉娜，常麗麗，時曉冬，等.急性胰腺炎患者血漿內皮素和P－選擇素的變化及丹參對其的影響.中國醫師進修雜志，2006，29:37－38.

2 Foitzik T，Faulhaber J，Hotz HG，et al.Endothelin mediates local and systemic disease sequelae in severe experimental pancreatitis.Pancreas，2001，22:248－254.

3 柏楠，藺錫候，王宇，等.梗阻性黃疸大鼠血漿和腎組織內皮素含量的變化及與腎功能關系的研究.中華肝膽外科雜志，2002，8:228－231.

4 李小剛，劉青光，潘承恩，等.丹參注射液對梗阻性黃疸大鼠肝內NO、MDA、ET的影響及其意義.西安醫科大學學報，2002，23:93.

5 Housset C，Rockey DC，Bisseum，et al，Endothel in receptorin the liver:lipocytes as a contractile target for endothelia－1.Proc Natl Acad Sci USA，1993，90:9266.

6 王向東，彭兵，賈乾斌，等.丹參與生脈合用對阻塞性黃疸術后內毒素、內皮素及細胞因子影響的研究.現代預防醫學，2006，33:265－266.

7 石承先，張瑩，李玉祥，等.急性胰腺炎胰腺內皮素mRNA表達與腸壁通透性的關系及丹參的影響.貴州醫藥，2009，33:14－16.

8 趙軍，白秋江，胡躍民，等.內皮素受體拮抗劑臨床研究進展.河北醫藥，2009，31:1242－1243.